Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒

简要概述

Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒提供了基于荧光的测定法，用于使用流式细胞仪检测细胞内钙动员。它可以用于动力学读数或终点读数。将Calbryte 520 AM染料加载到细胞中后，只需洗涤细胞并添加钙通量激动剂，即可通过流式细胞仪使用动力学读取模式或终点读取模式读取样品。 Calbryte 520 AM可以通过扩散被动地穿过细胞膜。一旦进入细胞内部，Calbryte 520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激表达目的GPCR的细胞时，受体会发出释放细胞内钙的信号，这会明显增加Calbryte 520的荧光。Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒也可用于检测细胞钙通量作为细胞分选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 钙检测流式细胞仪分析检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在测定缓冲液中准备细胞

2. 添加Calbryte 520 AM染料加载溶液（1 µL）

3. 在37°C孵育30分钟

4. 清洗细胞

5. 添加钙通量激动剂

6. 在530/30 nm滤光片（FITC通道）使用流式细胞仪检测荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

Calbryte 520 AM储备溶液（500X）：在Calbryte 520 AM储备溶液（组分A）的小瓶中加入100 µL DMSO（未提供），并充分混合。 注意：100 µL Calbryte 520 AM储备溶液足以进行100次测定。 如果试管密封严密，可以将未使用的Calbryte 520 AM原液分装并在<-20°C下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

实验步骤

1.除去细胞培养基，并加入0.5 mL测定缓冲液。注意：对于贴壁细胞和非贴壁细胞，建议分别使用4 x 10⁵ – 8 x 10⁵和1 x 10⁶-2 X 10⁶。每个细胞系应根据个体情况进行评估，以确定细胞内钙动员的细胞密度。

2.将1µL Calbryte 520 AM储备溶液（500X）加到0.5 mL非标准或贴壁细胞的测定缓冲液（组分B）中。注意：如果细胞（例如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，则可将丙磺舒（组分C）添加到染料工作溶液中（孔浓度将为0.125-1 mM），以减少去离子水的泄漏。

3.将细胞在37°C下孵育30分钟。

4.对于非贴壁细胞，将细胞离心并去除染料。将细胞重悬于0.4 mL HHBS（组分D）中。对于贴壁细胞，使用0.5 mM EDTA轻轻地将细胞从板中提起并离心。将细胞重悬于0.4 mL HHBS（组分D）中。注意：要从板上分离贴壁细胞，可以考虑使用酶试剂（例如胰蛋白酶，Accutase），但需要进行测试以确保细胞表面上的目标受体不受影响。

5.用HHBS或所需的缓冲液制备5X激动剂化合物。

6.使用530/30 nm滤光片（FITC通道）在流式细胞仪上检测，在添加100 µL制备的激动剂之前和之后分析样品。注意：为获得结果，重要的是在添加激动剂后1分钟内进行测定。确保激动剂添加到实际读数开始之间的时间对于所有样品保持恒定。

图示

图1.通过Cell Meter 流式细胞钙测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP诱导的细胞内钙释放。将细胞与Calbryte 520 AM染料在37°C下孵育30分钟，然后向细胞中添加10μM的ATP， 在加入ATP后，获得基线并分析其余细胞。这种反应是随着时间的推移而测量的。分析在NovoCyte 3000流式细胞仪上进行。图表上的箭头表示添加ATP和实际分析之间的时间（30秒）。

通过Cell Meter 流式细胞钙测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP诱导的细胞内钙释放。将细胞与Calbryte 520 AM染料在37°C下孵育30分钟，然后向细胞中添加10μM的ATP， 在加入ATP后，获得基线并分析其余细胞。这种反应是随着时间的推移而测量的。分析在NovoCyte 3000流式细胞仪上进行。图表上的箭头表示添加ATP和实际分析之间的时间（30秒）。B.荧光信号随时间的变化。

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具，有多种参数可用于检测细胞活力。 该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来检测细胞凋亡。 在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。 已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS。 使用带有575/26 nm发射滤光片组（PE通道）的流式细胞仪，优化了该特定的测定试剂盒以监测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）

2. 添加膜联蛋白V-iFluor 555测定溶液

3. 在室温下孵育30至60分钟

4. 使用带有575/26 nm滤光片（PE通道）的流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜分析细胞

实验步骤

1.用膜联蛋白V-iFluor 555准备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×10⁵细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL Annexin V-iFluor 555（组分A）。

1.5避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.6在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.7使用带有575/26 nm滤光片（PE通道）的流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析：

2.1使用带有575/26 nm滤光片的流式细胞仪（PE通道）定量Annexin V- iFluor 555结合物。

3.通过使用荧光显微镜进行分析：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片盖玻片的载玻片上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与Annexin V-iFluor 555孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加到盖玻片上。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与膜联蛋白V-iFluor 555孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3在荧光显微镜下使用Cy3滤光片组，用Annexin V-iFluor 555分析凋亡细胞。将Nuclear Red DCS1（#17552）添加到细胞后，使用Cy5通道测量细胞活力。质膜上的橙色染色表明膜联蛋白V-iFluor 555与细胞表面的PS结合。

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测

简要概述

        Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞周期的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。在正常细胞中，DNA密度的改变与细胞生长、分化、休眠等细胞功能相关。细胞周期通过许多不同的细胞周期调控因子相互作用来调节。这些调控因子的激活因子，可以与DNA结合，开启或关闭那些能引起细胞分裂的蛋白质。在这个调控级联反应中，任何一步的错误都会引起细胞非正常地增殖，这是一种潜在的病理状态，例如肿瘤的形成。活细胞研究的潜在应用是对细胞DNA含量的测定和细胞周期进行检测，为了对细胞的生长模式的变化进行检测，对细胞凋亡进行监测，对肿瘤细胞活动和抑制剂基因机制进行研究。Cell Meter荧光法细胞周期检测试剂盒 *绿色荧光 适合于流式细胞检测* 是设计用来检测细胞周期进程和增殖的，在活细胞、经通透性处理的细胞和固定化细胞中使用我们独特的Nuclear Green CCS1对细胞周期进程和增殖进行监测。在所给样品的不同细胞中，有G0/G1, S 和G2/M 期以及细胞凋亡之前的亚-G1期等，可以通过流式细胞仪检测。经过Nuclear Green CC1染色的细胞可以通过流式细胞仪在Ex/Em = 490 nm/520 nm(FL1 通道)进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

用测试化合物制备细胞，密度为5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL
将2.5μL200XNuclear Green CCS1加入0.5 mL细胞溶液中
在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30-60分钟
使用FL1通道用流式细胞仪分析细胞（（Ex / Em = 490/525 nm）

操作步骤

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中，密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡或其他细胞周期功能。

3.将2.5μL的200X Nuclear Green CCS1（组分A）加入处理过的细胞中。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30至60分钟。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nuclear Green CCS1孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。由于Nuclear Green CCS1是细胞可渗透的，因此不必在DNA染色前固定细胞。

5.可选：将细胞以1000 rpm离心4分钟，然后将细胞重新悬浮于0.5 mL测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测荧光强度。

数据分析

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力和增殖的工具。有多种参数可用于监测细胞活力和增殖。在正常细胞中，DNA密度根据细胞的生长，分裂，静止执行其正常功能而变化。细胞周期的进程受各种细胞周期调节因子之间复杂的相互作用控制。这些调节剂激活转录因子，该转录因子与DNA结合并开启或关闭导致细胞分裂的蛋白质的产生。这种调节级联中的任何失误都会导致异常细胞增殖，这是许多病理状况（例如肿瘤形成）的基础。活细胞研究的潜在应用是确定细胞DNA含量和细胞周期分布，以检测生长模式的变化，检测凋亡，评估肿瘤细胞的行为和抑制基因的机制。该特定试剂盒旨在使用Nuclear Red CCS1（固定细胞中的细胞周期染色剂）检测细胞周期进程和增殖。染料穿过透化的膜并插入细胞DNA中。试剂盒中提供的RNase降解RNA后，Nuclear Red CCS1的信号强度与DNA含量成正比。可以使用流式细胞仪（FL2通道）检测给定样品中处于G0 / G1，S和G2 / M期的细胞百分比，以及处于凋亡之前的sub-G1期的细胞百分比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用5×10⁵至1×10⁶cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞

2. 用70％乙醇固定细胞

3. 将0.5 µL 100X Nuclear Red CCS1和5 µL RNase A加入0.5 mL细胞溶液中

4. 在室温下孵育30-60分钟

5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞，以诱导凋亡或其他细胞周期功能。

2.对于每个样品，用0.5 mL PBS制备细胞，密度为5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL。

2.1对于贴壁细胞：将细胞用胰蛋白酶消化，悬浮在10％FBS培养基中，离心（1000 rpm，5分钟），然后将沉淀重悬于PBS中。

2.2对于悬浮细胞：将细胞离心（1000 rpm，5分钟），并将沉淀物悬浮在PBS（1 mL）中。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

3.用70％乙醇固定细胞：

3.1将0.5 mL细胞悬液吸移至1.2 mL无水乙醇中（ 终浓度约为70％）。

3.2在冰上孵育细胞至少2小时（或在-20°C过夜）。在染之前，细胞可以在-20°C下保存2年。

4.用Nuclear Red CCS1染色细胞：

4.1以1000 rpm的速度沉淀细胞5分钟，并用冷PBS至少洗涤一次。

4.2将沉淀物悬浮在0.5 mL测定缓冲液（组分C）中。

4.3加入5 µL 100X Nuclear Red CCS1（组分A）和5 µL 100X RNase A（组分B）。

4.4在室温下孵育细胞30至60分钟。 注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.5可选：将细胞以1000 rpm离心5分钟，然后将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液（组分B）或自备缓冲液中。

4.6使用FL2通道（Ex / Em = 490/620 nm），通过流式细胞仪检测荧光强度。 

Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合流式细胞检测

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter NIR膜电位检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可检测细胞凋亡的线粒体膜电位。该荧光测定法是基于我们专有的阳离子MitoLite NIR 染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR 主要在线粒体中积累，但是在凋亡细胞中，MitoLite NIR 染色强度降低。通过MitoLite NIR 染色的细胞可以通过流式细胞术观察到红色激发和远红色发射（FL4通道）。该试剂盒可与其他试剂配对，例如蓝激发碘化丙啶和Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒（＃22803），用于多参数研究细胞活力和凋亡。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡激活剂和抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞

2. 将5 µL 200X MitoLite NIR加入1 mL细胞溶液中

3. 在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育细胞15-30分钟

4. 沉淀细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中

5. 使用带有FL4通道的流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，在1 mL温暖的培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37℃，5％CO₂培养箱中，以5-50 µM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite NIR同时添加。 为了获得佳结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向处理过的细胞中加入5 µL 200X MitoLite NIR（组分A）。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至30分钟。 注意：对于贴壁细胞，在用MitoLite NIR染料上样溶液孵育之前，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用含血清的培养基洗涤一次。

5.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于1 mL分析缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用带有FL4通道的流式细胞仪（Ex / Em = 635/660 nm）检测荧光强度。

选。

Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒 适合于流式细胞仪

简要概述

线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低中等水平的超氧化物的产生对于许多重要细胞过程的适当调节至关重要，这些过程包括基因表达，信号转导和肌肉对耐力运动训练的适应性。不受控制的线粒体超氧化物的产生会触发细胞氧化损伤，从而导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂来定量活细胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活细胞渗透性，可以快速，选择性地靶向线粒体中的超氧化物。与超氧化物反应时会生成红色荧光。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的线粒体超氧化物。该试剂盒针对流式细胞仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备细胞密度为0.5-1×10 ⁶细胞/ mL

2. 用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3. 将1 µL 500X MitoROS 580加到0.5 mL细胞悬液中

4. 将细胞在37°C染色1小时

5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

1. MitoROS 580储备溶液（500X）：将100 µL DMSO（组分C）添加到MitoROS 580（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580储备溶液。避光。注意：请密闭存放。

实验步骤

1. 对于每个样品，在自备的0.5 mL生长培养基或缓冲液中制备细胞，密度为5×10 ⁵至1×10 ⁶个细胞/ mL。注意：应单独评估每种细胞系，以确定超氧化物诱导的细胞密度。

2. 在分析缓冲液（组分B）或自备的缓冲液（例如PBS）中用25 µL 20X测试化合物处理细胞以诱导超氧化物。对于对照细胞（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

3. 将细胞在37°C孵育至少30分钟。注意：将 Jurkat细胞在37°C下用50 µM AMA处理30分钟以诱导超氧化物。有关详细信息，请参见图1。

4. 将0.5 µL细胞悬浮液中加入1 µL 500X MitoROS 580储备液。

5. 在37°C下孵育1小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在MitoROS 580孵育之前用含血清的培养基洗涤一次。适当的孵育时间取决于单个细胞的类型和测试使用的化合物。

6. 使用带有FL2通道的流式细胞仪（Ex / Em = 488/590 nm）检测荧光强度。

 图示

图1.使用Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒检测Jurkat细胞中的超氧化物。AMA处理（红色）：将细胞在37°C下用50 µM抗（AMA）处理30分钟，然后与MitoROS 580孵育1小时。对照（蓝色）：在未经AMA处理的情况下，将细胞与MitoROS 580在37°C孵育1小时。使用流式细胞仪（BD FACSCalibur）在FL2通道检测上荧光信号