Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 货号11560-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光     货号11560 货号 11560 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 420 Em (nm) 480
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)是具有过氧化物酶活性的酶家族,以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物(例如脂质氢过氧化物)还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此,它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到,改变GPx水平与由许多评论和复杂疾病引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平,作为潜在治疗癌症,糖尿病,神经退行性疾病和心血管疾病的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法,用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽(GSH)氧化成氧化型谷胱甘肽(GSSG)。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶(GR)和NADPH再循环至还原态GSH:

 

R-O-O-H + 2GSH     GPx             R-O-H + GSSG + H2O

GSSG + NADPH + H+        GR           2GSH + NADP+

 

产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。 荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量,其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比,我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定,我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 420nm
发射: 480nm
cutoff: 430nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备GPx分析混合物(50μL)

添加GPx标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育30分钟

加入20μLQuestFluor™NADP探针

添加20μLNAP检测溶液

在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂

溶液在室温孵育30-60分钟,在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光

注意1.为了获得最佳效果,强烈建议使用黑色版。

注意2.在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方法

 

1.制备谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)标准储备液:

将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品(组分A)的小瓶中,制成10U / mL标准储备溶液。

注意:未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

 

2.准备GPx标准的系列稀释液:

2.1将4μLGPx标准储备溶液(10U / mL,来自步骤1)加入996L 1×PBS缓冲液中,以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。

注意:稀释的GPx标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1:2连续稀释,得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。

2.3如表1和2中所述,将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

 

表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

….

….

 

 

 

 

 

 

GP 1

GP 1

….

….

….

….

 

 

 

 

 

 

GP 2

GP 2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

GP 3

GP 3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

GP 4

GP 4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

GP 5

GP 5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

GP 6

GP 6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

GP 7

GP 7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:GP = GPx标准,BL =空白对照,TS =测试样品。

 

表2每个孔的试剂组成

GPx Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

1×PBS Buffer : 50 μL

50 μL

*注意:将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL,一式两份加入GP1到GP7的孔中。

 

3.准备GSH原液(100X):

将100μlddH2 O加入到GSH小瓶(组分D)中以制备100X GSH储备溶液。

 

4.准备GPx底物储备液(100X):

将100μlddH2O加入到基质小瓶(组分E)中以制备100X底物储备溶液。

 

5.准备GPx分析混合物:

5.1将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶混合物(组分C)中。

5.2将50μLGSH储备溶液(来自步骤3的组分D),50μL底物储备溶液(组分E,来自步骤4)加入到组分B + C的瓶子中(来自步骤5.1),并充分混合以进行GPx测定 混合物(组分B + C + D + E)。

注1:该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。 它不稳定,请及时使用。

注2:不建议储存未使用的GPx分析混合物。 可以将未使用的组分B + C混合物(来自步骤5.1)分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC,尽管灵敏度可能会降低。

注3; 将未使用的100X GSH储备溶液(来自步骤3)和100X GPx底物储备溶液(来自步骤4)分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

 

6.运行GPx分析:

6.1将50μLGPx测定混合物(来自步骤5.2)加入到GPx标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤2.3),使总体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。

6.2在室温下孵育反应30分钟,避光。

 

7.运行NADP测定:

7.1将20μLQuestFluor™NADP探针(组分F)加入到GPx标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中,充分混合。

7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液(组分G),充分混匀。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针(组分F)和10μLNAP检测溶液(组分G)。

7.3在室温下孵育反应10-20分钟,避光。

7.4向每个孔中加入15μL增强剂(组分H),使总测定体积为155μL/孔,并在室温下孵育30-60分钟,避光。

注意:对于384孔板,添加7.5μL增强剂。

7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。

 

参考文献

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Journal: Soft Matter (2014): 3374

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Journal: Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2014): L597

Can recombinant human glutathione peroxidase 1 with high activity be efficiently produced in Escherichia coli
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Journal: Antioxid Redox Signal (2014): 1524

Changes of the Thioredoxin System, Glutathione Peroxidase Activity and Total Antioxidant Capacity in Rat Brain Cortex During Acute Liver Failure: Modulation by L-histidine
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Characterization and structural analysis of human selenium-dependent glutathione peroxidase 4 mutant expressed in Escherichia coli
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Characterization of biochemical properties of a selenium-independent glutathione peroxidase of Cryptosporidium parvum
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Journal: Oncotarget. (2014)

Construction of a highly stable artificial glutathione peroxidase on a protein nanoring
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Daily rhythms of catalase and glutathione peroxidase expression and activity are endogenously driven in the hippocampus and are modified by a vitamin A-free diet
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说明书
Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 .pdf