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NADH氧化酶（NOX）检测试剂盒,索莱宝,BC0630-50管/48样

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上海金畔生物科技有限公司提供NADH氧化酶（NOX）检测试剂盒,索莱宝,BC0630-50管/48样，可以访问官网了解更多产品信息。
NADH氧化酶（NOX）检测试剂盒,索莱宝,BC0630-50管/48样

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索莱宝

·  英文名称 : NADH Oxidase(NOX) Assay Kit

·  别名 : NADH氧化酶试剂盒 NOX Kit NADH氧化酶（NOX）试剂盒 NADH氧化酶（NOX）测试盒

·  检测方法 : 可见分光光度法

 

测定意义：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
测定原理：NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

浓度
规格 50管/48样
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NADH氧化酶试剂盒 微量法,索莱宝,BC0635-100管/96样

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NADH氧化酶试剂盒 微量法,索莱宝,BC0635-100管/96样

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索莱宝

·  英文名称 : Micro NADH Oxidase(NOX) Assay Kit

·  别名 : NADH氧化酶试剂盒 NOX Kit NADH氧化酶（NOX）试剂盒 NADH氧化酶（NOX）测试盒

·  检测方法 : 微量法

 

测定原理：

NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
需要的仪器，耗材:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水
测定意义：

NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。测定原理：NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

浓度
规格 100管/96样
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还原型辅酶Ⅰ二钠，NADH-Na2,索莱宝,N8120-250mg CAS : 606-68-8

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还原型辅酶Ⅰ二钠，NADH-Na2,索莱宝,N8120-250mg CAS : 606-68-8

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·  别名 : 还原β–烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐；β–还原辅酶Ⅰ 二钠盐; Dihydrodophosphopyridinenucleotide disodium salt;Reduced coenzymeⅠsodium salt；NADH-Na2; Reduced nicotinamide adenine dinucleotide disodium salt

·  英文名称 : NADH Na2

·  CAS : 606-68-8

·  分子式 : C21H27N7Na2O14P2

·  分子量 : 709.4

·  储存条件 : -20℃

·  纯度 : >98%

·  外观（性状） : 白色冻干粉

·  单位 : 支

 

说明：生化研究。

浓度
规格 250mg
保存 -20℃

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品参数
  • 产品详情

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
400 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

货号 15275 存储条件 f/l
规格                       400 Tests                          
Ex (nm) 460                             Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Amplite 总NAD和NADH检测试剂盒 （比色法）增强灵敏度是美国AAT Bioquest研发的检测总NAD和NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色总NAD / NADH检测试剂盒为检测总NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH。无需从样品混合物中纯化NAD / NADH。酶循环反应显着提高了检测灵敏度。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的 吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite™比色法总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至0.1μM的总NAD / NADH。与试剂盒＃15258相比，该试剂盒具有更高的灵敏度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的总NAD和NADP检测试剂盒。

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟至2小时

监测460 nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

 

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

 

2.准备NAD / NADH反应混合物：

2.1将8 mL NADH探针缓冲液（组分B-II）加入到NAD / NADH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NAD / NADH反应混合物足以进行200次分析。未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 M系列稀释的NADH标准品。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1：白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

B L                

BL               

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

NS3

NS3

NS4

NS4

NS5

NS5

NS6

NS6

NS7

NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2：每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.078μM至5μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM， 终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μLNAD/ NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NAD / NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

 

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275

图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

 

细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光 货号15296-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光 货号15296
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
100 Tests
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光

细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光 货号15296

简要概述

      Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种 的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。 

产品说明书

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5  –  1×106细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.使用APC通道用流式细胞仪分析细胞

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中，密度为1×105至1×106个细胞/ mL。

注意1：应对每个细胞系进行单独测评，以确定细胞密度。 对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也兼容。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。 优化每个实验的孵育时间。

3.将1μL JJ1902NAD（P）H探针（组分A）加入0.5 mL细胞悬浮液中。在37℃下孵育30-60分钟。

注意对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共温育30分钟。 详细信息请参见说明书中的图1。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪监测APC通道的荧光强度。

Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
250 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法)

Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273

货号 15273 存储条件 F/L
规格 250 Tests 价格 4488
Ex (nm) 460 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（比色法）是美国AAT Bioquest研发的检测NAD/NADH的试剂盒，。 NAD形成NADP，。 NADH（NADPH）是NAD（NADP）的还原形式，NAD（NADP）是NADH（NADPH）的氧化形式。 NAD或NADP在氧化还原反应中起辅助因子的作用，在细胞反应中转移电子。 氧化形式和还原形式之间的平衡是NAD / NADH（NADP / NADPH）比率。 该比率是指示细胞氧化还原状态的重要组分，并且它是反映代谢活性和细胞健康的测量。 在健康的哺乳动物组织中，游离NAD +和NADH之间的比率的估计可以高达700.相反，NADP / NADPH比率通常为约0.005，因此NADPH是该辅酶的主要形式。

NADH检测试剂盒(比色法) 货号12571-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

NADH检测试剂盒(比色法) 货号12571
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
400 Tests
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)

简要概述

        Amplite NADH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 N。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的 吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite 比色NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至3μM的NADH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育持续15分钟至2小时

监测460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个

 

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：

将1mL NADH探针（组分A）加入4mL NADH测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：5mL NADH反应混合物用于一个96孔。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将100μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到400μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生200μM（100pmol / L）NADH标准溶液。 注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的200μMNADH标准溶液进行1：2连续稀释，得到NADH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要制备细胞或组织样品。

 

表1白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2             

NS3              

NS3

NS4

NS4

NS5

NS5

NS6

NS6

NS7

NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意：将连续稀释的NADH标准品（3.13μM至200μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

 

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

NADH检测试剂盒(比色法) 货号12571

图1。 使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite ™比色NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 孵育30分钟（n = 3）可以检测到低至3μM的NADH，在460nm处测量吸光度。

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

NADH检测试剂盒(比色法) 货号12571

Amplite NADH检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15261-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

  • 产品参数
  • 产品详情

Amplite NADH检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15261
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
400 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

货号 15261                       存储条件 f/l
规格                       400 Tests                       
Ex (nm) 571 Em (nm) 585                  
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Amplite NADH检测试剂盒（荧光法）是美国AAT Bioquest 研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 
        传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 传统NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短UV波长使得这些方法具有低灵敏度和高干扰。 由于NAD和NADH的吸收较弱，紫外吸收方法需要较大的样品量，如果样品的可用性有限，则使相同的NAD和NADH测量不实用。

Amplite NADH检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15261

        这种Amplite 荧光NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NADH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。 Amplite 荧光NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（1μM）内检测少至100皮摩尔的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite NADH检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

1.准备NADH储备溶液：
将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。
注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：
将10mL Amplite NADH测定缓冲液（组分B）加入NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。
注意：这种NADH反应混合物足以用于两个96孔或四个384孔板。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：
3.1将50μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中以产生100μM（100pmol / L）NADH标准溶液。
注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的100μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH标准品系列稀释液。

3.3如表1和表2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中
注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

NS3

NS3

NS4                

NS4                    

NS5

NS5

NS6

NS6

NS7

NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

4.在上清液反应中运行NADH测定：
4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（在Ex / Em = 540 / 590nm处佳）。
注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
注2：对于基于细胞的NADH测量，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。
        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

Amplite NADH检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15261

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech）在96孔黑色板中用Amplite NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时，可以检测到低至1μM（100pmol /孔）的NADH，而NAD没有响应。

Amplite NADH检测试剂盒比色法货号12571-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NADH检测试剂盒比色法货号12571
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
400 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)

货号 15271 存储条件 F/L
规格 400 Tests
Ex (nm) 460 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Amplite NADH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADH的试剂盒，NAD +和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP， 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的 吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite 比色NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至3μM的NADH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的NADH检测试剂盒。 

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收： 460nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育持续15分钟至2小时

监测460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个

 

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

2.准备NADH反应混合物：

将1mL NADH探针（组分A）加入4mL NADH测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：5mL NADH反应混合物用于一个96孔。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将100μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到400μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生200μM（100pmol / L）NADH标准溶液。 注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的200μMNADH标准溶液进行1：2连续稀释，得到NADH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔板中。

注意：根据需要制备细胞或组织样品。

 

表1.白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

NS3

NS3

NS4

NS4

NS5

NS5

NS6

NS6

NS7

NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

 

表2.每个孔的试剂

孔 体积 试剂
NS1 – NS7 50 µL 连续稀释 (3.13 to 200 µM)
BL 50 µL PBS
TS 50 µL 测试样品

*注意：将连续稀释的NADH标准品（3.13μM至200μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

 

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

 

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

Amplite NADH检测试剂盒比色法货号12571

图1。 使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite ™比色NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 孵育30分钟（n = 3）可以检测到低至3μM的NADH，在460nm处测量吸光度。

 

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

 

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

 

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

 

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

 

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 货号12591-AAT Bioquest荧光染料

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胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 货号12591
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
100 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
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Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒

胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 货号12591

简要概述

        Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种 的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用PE通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

实验示例

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器在37ºC下孵育30-60分钟
3.洗涤细胞并将其保存在测定缓冲液中
4.使用PE通道通过流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中以1×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在您选择的无血清培养基或缓冲液中。或者，可以制备细胞并在常规完全培养基中处理。与JZL1707 NAD（P）H Sensor孵育时，请更改为无血清培养基或您选择的缓冲液。
在37ºC下将细胞与测试化合物一起孵育所需的时间，以刺激细胞内的NADH / NADPH。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。

2.将1 µL JZL1707 NAD（P）H传感器（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。在37ºC下孵育30-60分钟。注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100 µM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，然后与JZL1707 NAD（P）H Sensor工作溶液在37ºC共同孵育30分钟。分钟。有关详细信息，请参见图1。

3.用所需的缓冲液洗涤细胞一次。将细胞保存在测定缓冲液（组分B）中。

4.使用流式细胞仪监测PE通道的荧光强度。

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
400 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

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Product details

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

货号                   15258                       存储条件                   f/l                  
规格 400 Tests
Ex (nm) 575 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将基团添加到腺苷核苷酸的2'位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

        传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。 

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

Amplite™比色NAD / NADH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，可在100μL检测体积（300 nM;图1）中检测少至30皮摩尔的NAD（H）。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过吸光度酶标仪在~575nm或~570nm至~605nm的吸光度比下轻松读取，以提高测定灵敏度。

产品说明书

96孔板测定示例

 

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

添加NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

操作方法

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NAD / NADH反应混合物：

将10mL NAD / NADH传感器缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL                  

BL                     

TS                   

TS                       

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

NS3

NS3

NS4

NS4

NS5

NS5

NS6

NS6

NS7

NS7

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，浓度）可能由于NADH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

注意3：对于基于细胞的NAD / NADH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（目录号20012）裂解细胞。

 

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在固体黑色96孔板中用Amplite™总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。


Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒 货号15290-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒 货号15290
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
100 Tests
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
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产品详情

Product details

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒 货号15290

货号                            15290 存储条件 f/l
规格 100 Tests                           
Ex (nm) 535                             Em (nm) 557                    
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

        Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与细胞内的相关的活性氧（ROS）的异常产生和DNA损伤。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种很好的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

实验示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC孵育30-60分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 540/590 nm（截止波长= 570 nm）或使用TRITC滤光片的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

操作步骤

1.刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞）。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在无血清培养基或您选择的缓冲液中。或者，可以在常规的全培养基中制备和处理细胞。 与JZL1707 NAD（P）H传感器一起孵育时，更换为您选择的无血清培养基或缓冲液。

2.在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液。 将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC共孵育30-60分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃下共孵育30分钟。 详细信息请参见图1。

3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。 移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

4.使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy3过滤器或TRITC过滤器组拍摄图像。

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15261-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15261 货号 15261 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 400 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法）是美国AAT Bioquest 研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 传统NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短UV波长使得这些方法具有低灵敏度和高干扰。 由于NAD和NADH的吸收较弱，紫外吸收方法需要较大的样品量，如果样品的可用性有限，则使相同的NAD和NADH测量不实用。

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15261

这种Amplite 荧光NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NADH。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。 Amplite 荧光NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（1μM）内检测少至100皮摩尔的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADH检测试剂盒。 

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff： 570nm
推荐孔板： 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

 

1.准备NADH储备溶液：
将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。
注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物：
将10mL Amplite NADH测定缓冲液（组分B）加入NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。
注意：这种NADH反应混合物足以用于两个96孔或四个384孔板。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：
3.1将50μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到450μLPBS缓冲液（pH 7.4）中以产生100μM（100pmol / L）NADH标准溶液。
注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的100μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH标准品系列稀释液。

3.3如表1和表2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中
注意：根据需要准备细胞或组织样本。

 

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

  

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

 

表2每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.1μM至100μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份

 

4.在上清液反应中运行NADH测定：
4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（在Ex / Em = 540 / 590nm处最佳）。
注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
注2：对于基于细胞的NADH测量，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（cat＃20012）裂解细胞。

 

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。
        注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15261

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech）在96孔黑色板中用Amplite NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时，可以检测到低至1μM（100pmol /孔）的NADH，而NAD没有响应。

 

参考文献

Mycoplasma pneumoniae protects infected epithelial cells from hydrogen peroxide-induced cell detachment.
Authors: Takeshi Yamamoto, Yutaka Kida, Koichi Kuwano
Journal: Cellular microbiology (2019): e13015

Design, synthesis, and ex vivo evaluation of a selective inhibitor for retinaldehyde dehydrogenase enzymes
Authors: Angelica R Harper, Anh T Le, Timothy Mather, Anthony Burgett, William Berry, Jody A Summers
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry (2018)

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

 

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Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光 Cat#15280
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说明书
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Amplite NADH检测试剂盒(比色法) 货号15271-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NADH检测试剂盒(比色法)

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)

Amplite NADH检测试剂盒(比色法) 货号15271 货号 15271 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 400 Tests 价格 3264
Ex (nm) 460 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite 比色NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至3μM的NADH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的NADH检测试剂盒。 

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收： 460nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育持续15分钟至2小时

监测460nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个

 

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

2.准备NADH反应混合物：

将1mL NADH探针（组分A）加入4mL NADH测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

注意：5mL NADH反应混合物用于一个96孔。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将100μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到400μLPBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生200μM（100pmol / L）NADH标准溶液。 注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的200μMNADH标准溶液进行1：2连续稀释，得到NADH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2所述，将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔板中。

注意：根据需要制备细胞或组织样品。

 

表1.白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

  

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

 

表2.每个孔的试剂

孔 体积 试剂
NS1 – NS7 50 µL 连续稀释 (3.13 to 200 µM)
BL 50 µL PBS
TS 50 µL 测试样品

*注意：将连续稀释的NADH标准品（3.13μM至200μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

 

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。（详见附录）。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

 

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

Amplite NADH检测试剂盒(比色法) 货号15271

图1。 使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices），在96孔白色/透明底板中用Amplite ™比色NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 孵育30分钟（n = 3）可以检测到低至3μM的NADH，在460nm处测量吸光度。

 

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

 

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

 

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

 

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

 

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

 

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

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Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
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Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

 

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Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15261
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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275 货号 15275 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 400 Tests 价格 3924
Ex (nm) 460 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 总NAD和NADH检测试剂盒 （比色法）增强灵敏度是美国AAT Bioquest研发的检测总NAD和NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色总NAD / NADH检测试剂盒为检测总NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH。无需从样品混合物中纯化NAD / NADH。酶循环反应显着提高了检测灵敏度。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite™比色法总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至0.1μM的总NAD / NADH。与试剂盒＃15258相比，该试剂盒具有更高的灵敏度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的总NAD和NADP检测试剂盒。

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收： 460nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

96孔板检测示例

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

加入NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟至2小时

监测460 nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

 

操作步骤

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

 

2.准备NAD / NADH反应混合物：

2.1将8 mL NADH探针缓冲液（组分B-II）加入到NAD / NADH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

2.2将2 mL NADH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

注意：这种NAD / NADH反应混合物足以进行200次分析。未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL10M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 M系列稀释的NADH标准品。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

 

表1：白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

  

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

 

表2：每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意：将连续稀释的NADH标准品（0.078μM至5μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

 

4.在上清液反应中运行NADH测定：

4.1将50μLNAD/ NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NAD / NADH测定体积为100μL/孔

注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

 

数据分析

        空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275

图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

 

附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

1.植物细胞样品：

用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

 

2.细菌样品：

离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

 

3.哺乳动物细胞样本：

从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

 

4.组织样品：

称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

 

参考文献

Functional definition of NrtR, a remnant regulator of NAD+ homeostasis in the zoonotic pathogen Streptococcus suis
Authors: Qingjing Wang, Bachar H Hassan, Ningjie Lou, Justin Merritt, Youjun Feng
Journal: The FASEB Journal (2019): fj–201802179RR

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
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Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
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A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) Cat#15258
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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258 货号 15258 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 400 Tests 价格 3924
Ex (nm) 575 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。 

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

Amplite 比色NAD / NADH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，可在100μL检测体积（300 nM;图1）中检测少至30皮摩尔的NAD（H）。 可以以方便的96孔或384孔板进行检测。 其信号可通过光吸收酶标仪在~575nm或~570nm至~605nm的吸光度比下轻松读取，以提高测定灵敏度。

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收： 570/610nm
推荐孔板： 透明底板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

添加NADH标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育15分钟–2小时

检测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

 

操作方法

1.准备NADH储备溶液：

将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NAD / NADH反应混合物：

将10mL NAD / NADH缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL 10μM NADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到黑色96孔板中。

注意：根据需要准备细胞或组织样本。

 

表1黑色96孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

  

注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

 

表2.每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADH探针（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

 

4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光酶标仪检测荧光。

注1：也可将板的混合物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

注意3：对于细胞的NAD / NADH检测，建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（货号：20012）裂解细胞。

 

数据分析

        空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在黑色96孔板中用Amplite 总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。

 

试剂应用文献

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Han, Xiaojuan and Tai, Haoran and Wang, Xiaobo and Wang, Zhe and Zhou, Jiao and Wei, Xiawei and Ding, Yi and Gong, Hui and Mo, Chunfen and Zhang, Jie and others
Journal: Aging cell (2016): 416–427

 

参考文献

Reduction of renal tubular injury with a RAGE inhibitor FPS-ZM1, valsartan and their combination in streptozotocin-induced diabetes in the rat
Authors: Davoud Sanajou, Amir Ghorbani Haghjo, Hassan Argani, Leila Roshangar, Nadereh Rashtchizadeh, Saeed Nazari Soltan Ahmad, Zahra Ashrafi-Jigheh, Saman Bahrambeigi, Farshid Asiaee, Jalil Rashedi
Journal: European journal of pharmacology (2019): 40–48

Functional analysis of the mitochondrial alternative oxidase gene (aox1) from Aspergillus niger CGMCC 10142 and its effects on citric acid production
Authors: Li Hou, Ling Liu, Hongfei Zhang, Lin Zhang, Lan Zhang, Jian Zhang, Qiang Gao, Depei Wang
Journal: Applied microbiology and biotechnology (2018): 1–15

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

 

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产品名称 货号
Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 Cat#15275
Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15257
Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15261

说明书
Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法).pdf

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒 货号15290-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒 货号15290 货号 15290 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 6564
Ex (nm) 535 Em (nm) 557
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测NADH/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与细胞内的相关的活性氧（ROS）的异常产生和DNA损伤。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H具有挑战性。 Cell Meter™细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒提供了监测活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法。 JZL1707 NAD（P）H传感器是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。 JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒。 

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适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC滤波片
发射 TRITC滤波片
推荐孔板： 黑色透明

产品说明书

实验示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC孵育30-60分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.在Ex / Em = 540/590 nm（截止波长= 570 nm）或使用TRITC滤光片的荧光显微镜下监测荧光强度（底部读取模式）

 

操作步骤

1.刺激NADP / NADPH，用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）在无血清培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中处理细胞）。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在无血清培养基或您选择的缓冲液中。或者，可以在常规的全培养基中制备和处理细胞。 与JZL1707 NAD（P）H传感器一起孵育时，更换为您选择的无血清培养基或缓冲液。

2.在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液。 将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC共孵育30-60分钟，避光。

注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37℃下共孵育30分钟。 详细信息请参见图1。

3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。 移除每个孔中的溶液，并添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B）用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

4.使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪监测荧光增加，或使用荧光显微镜和Cy3过滤器或TRITC过滤器组拍摄图像。

 

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
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Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

 

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产品名称 货号
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Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒.pdf