Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒 蓝色荧光

简要概述

        Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。荧光胺本质上是非荧光性的，但是一旦与脂肪胺类（包括：多肽、蛋白质）反应便会产生一种带蓝绿色荧光的衍生物。Amplite荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒提供了一种在水溶液中对蛋白质进行定量检测的简单方法。它的荧光信号可以容易读出Ex/Em = 380 /470 nm。该Amplite 荧光胺蛋白质检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析中，并且无需任何分步操作就可以容易地实现自动化。本检测法可以在30分钟内完成。用Amplite 荧光胺蛋白质检测试剂盒，可以检出少至3 ug/mL的BSA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备荧光胺工作溶液（25μL）
2.添加BSA标准品或测试样品（75μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.在Ex / Em = 380 / 470nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.1标准溶液

BSA标准
通过进行1：2连续稀释，将适量的BSA标准品1 mg / mL（组分C）稀释到PBS中，以获得BSA标准品（BS7-BS1）的连续稀释液。

2.工作溶液

将DMSO（组分B）的全部内容物加入荧光胺（组分A）的瓶中，并充分混合。 注意：2.5 mL的荧光胺工作溶液足以用于1个平板。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准品（BS1-BS7,1.563至100μg/ mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备BSA标准品（BS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用30μL试剂代替75μL。

2.向BSA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μL荧光胺工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入10μL荧光胺工作溶液，总体积为40μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 380 / 470nm的荧光板读数器监测荧光增加。

Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒

简要概述

        Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测AST的试剂盒，天冬氨酸氨基转移酶（AST），也称为血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶（GOT），是转移酶家族的成员。它催化天冬氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移，是氨基酸代谢中的重要酶。AST存在于许多身体组织中，血清AST水平低。然而，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黄疸，肝癌，心肌梗塞，AST可能会渗入血流并且AST水平显着升高。因此，血清AST水平的测定具有重要的临床和诊断意义。

        Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶（AST）检测试剂盒为各种生物样品中AST的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 天冬氨酸转氨酶催化天冬氨酸和α-酮戊二酸与草酰乙酸和谷氨酸的反应：

天冬氨酸（Asp）+α-酮戊二酸＝草酰乙酸+谷氨酸（Glu）

        通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物L-谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（Ex / Em = 540nm / 590nm）下读取信号。使用Amplite 荧光天冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到低至2 mU / mL的AST。该测定是稳定的，并且可以容易地适用于各种各样的应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备AST反应混合物（50μL）

加入AST标准品或测试样品（50μL）

孵育于37℃，20-30分钟或室温，60分钟

在Ex / Em = 540 / 590nm处监测荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻组分A和B各一瓶。

操作方法

1.准备AST标准品的连续稀释液（1至300 mU / mL）：

1.1向DPBS缓冲液中加入所需量的AST阳性对照，制成100 U / mL AST标准溶液。

注意：未使用的AST阳性对照（组分D）应始终存储在4℃。 不要冻结。

1.2将3μL100U / mL AST标准溶液（来自步骤1.1）加入含0.1％BSA的997 L DPBS缓冲液中，得到300 mU / mL AST标准溶液。

1.3取300μL300mU / mL AST标准溶液进行1：3连续稀释，得到AST标准品的100,30,10,3,1,0.3和0 mU / mL系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述，将AST标准品和含有AST的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意：如果需要，将测试样品稀释至含有0.1％BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

2.准备AST测定混合物：

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶（组分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL AST测定缓冲液（组分B）加入AST Enzyme Mixture瓶中（组分A），并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液（来自步骤2.1）加入到AST Enzyme Mixture溶液中（来自Step2.2）使用AST测定混合物。

注意1：该AST测定混合物足以用于两个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注意2：或者，可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50倍的AST酶混合物原液，然后通过将原液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合制备AST测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X AST Enzyme Mixture储备液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃，避免冻融循环。

3.运行AST测定：

3.1将50μL的AST测定混合物（来自步骤2.3）加入AST标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.4），使得总AST测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLAST测定混合物。

3.2将反应在37°C下孵育20-30分钟或在室温下孵育60分钟，避光。

注意：空白控制的背景随着时间和温度的增加而增加。 如果在37℃下孵育30分钟，背景将很高。

3.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm处截止）。

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

简要概述

        Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，。SMase的激活在细胞反应中起重要作用，例如细胞生长调节，细胞分化，细胞周期停滞和程序性细胞死亡。已经基于它们的阳离子依赖性和作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶（SMase）。 它们是溶酶体酸性SMase，分泌锌依赖性酸性SMase，镁依赖性中性SMase，镁非依赖性中性SMase和碱性SMase。在五种类型的鞘磷脂酶中，溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞应激反应中产生神经酰胺的主要因素。

        我们的Amplite 荧光酸性鞘磷脂酶检测试剂盒是检测酸性SMase活性或筛选其抑制剂的灵敏方法之一。。 它可用于测量血液，细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”测定，与HTS液体处理仪器兼容。

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产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液（50μL）

添加SMase标准品和/或SMase测试样品（50μL）

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物（50μL）

在室温下孵育持续1-2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（在570 nm处截止）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶（或瓶）。

操作方法

1.准备鞘磷脂工作液：

将50μL鞘磷脂（组分B）加入5mL SMase反应缓冲液（组分D）中，并充分混合。

注意：应及时使用鞘磷脂工作液。

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品：

2.1将20μL含0.1％BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品（组分F）的小瓶中，制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意：应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液（来自步骤2.1）加入1000μL测定缓冲液（组分E）中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意：稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定，应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入固体黑色96孔微量培养板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液（来自步骤1）加入到鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（来自步骤2.4）。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

3.准备200X Amplite Red原液：

将80μLDMSO（组分G）加入到Amplite Red（组分C）的小瓶中以制备200X Amplite Red储备溶液。

注意1：未使用的Amplite Red原液应等分并保存在-20℃（避光）。

注意2：在硫醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT的浓度应低于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

4.准备鞘磷脂酶测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分E）加入酶混合物瓶（组分A）中，并充分混合。

4.2在开始测定之前，将25μL的200X Amplite Red储备溶液（来自步骤3）加入到酶混合物溶液瓶（来自步骤4.1）中以制备鞘磷脂酶测定混合物。

注意：应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

5.运行鞘磷脂酶测定：

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物（来自步骤4.2）加入鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品（来自步骤2.4）的每个孔中，以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时（避光）。

5.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm（在570nm处截止）观察荧光增加。

Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光

简要概述

        Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。

        这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。

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产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.准备H₂O₂反应混合物：

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒 红色荧光

简要概述

Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测蛋白激酶的试剂盒，。本试剂盒提供了一种快速、简单、均一的激酶活性检测法。它具有高灵敏度(<0·2 uM ADP)、宽ATP耐受性(1-300 uM)，不基于抗体，无发射性和不需洗脱就可以对酶催化产生的总ADP进行检测，这些特性使它成为检测激酶米氏方程动力学，筛选和鉴定激酶抑制剂的一种理想试剂盒。本检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步操作就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法通用型蛋白激酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

运行激酶反应（20μL）
添加ADP传感器缓冲液（20μL）
添加ADP传感器工作溶液（10μL）
在室温下孵育15分钟–1小时
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（截止= 570nm）

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1ADP Sensor I储备溶液（50X）：
将50μLDMSO（组分B3）加入到ADP传感器1（组分B1）的小瓶中，制备50X ADP传感器I储备溶液。

1.2ADP标准溶液（300 mM）：
向ADP标准品（组分C）中加入100μLDdH2O，制成300mM ADP标准溶液。

2.标准溶液配制

ADP标准配制
取300 mM ADP标准溶液，在激酶反应缓冲液中稀释10,000倍，制成30μMADP标准溶液。 取30μMADP标准溶液，在激酶反应缓冲液中进行1：3连续稀释，得到ADP标准溶液的连续稀释液。 注意：通过包含不含ADP的样品来测量背景荧光，在激酶反应缓冲液中连续稀释ADP标准品。

3.工作溶液配制

将50μL50XADP Sensor I储备溶液加入到ADP Sensor II（组件B2）的样品瓶中，制成ADP Sensor工作溶液。 注意：重组的ADP不稳定，可根据需要制作新鲜溶液，随用随配。

操作步骤

1.运行激酶反应（此步骤不提供试剂）：

1.1根据需要制备20μL（或对于384孔板10μL）激酶反应溶液/孔。 应根据需要优化激酶反应的组分（例如，特定激酶反应可能需要优化的缓冲系统）。 在大多数情况下，如果您没有优化的激酶缓冲液，ADP检测缓冲液（组分D）也可用于运行激酶反应。

1.2Amplite 荧光激酶检测试剂盒用于确定ADP的形成。

2.运行Amplite ADP分析：

2.1将20μLADP缓冲液（组分A）和10μLADP工作溶液加入每个充满20μL激酶反应溶液的孔中，使总ADP测定体积为50μL/孔。 对于384孔板，在每个充满10μL激酶反应溶液的孔中加入10μLADP传感器缓冲液（组分A）和5μLADP，使总ADP测定体积为25μL/孔。

2.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。

2.3用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光强度。

3.生成ADP校准曲线（筛选激酶抑制剂不需要）：

3.1添加20μL（对于96孔板）或10μL（对于384孔板）/孔ADP传感器缓冲液（组分A）和10μL（对于96孔板）或5μL（对于384） （间隔板）ADP传感器进入连续稀释的ADP标准品的每个孔中，使每个反应的总体积为50μL（对于96孔板）或25μL（对于384孔板）。

3.2将反应混合物在室温下孵育15分钟至1小时。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光强度。

3.4生成ADP标准曲线。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ADP剂量样本。