Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 橙色荧光,适合酶标仪检测

简要概述

Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来检测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用我们专有的橙色荧光Apopxin PS传感器，该传感器特异性结合PS，其亲和力远高于Annexin V（Kd <10 nM）。该试剂盒中使用的PS传感器与膜PS结合后具有橙色荧光。它的光谱性质几乎与Cy3®或AlexaFluor®555的光谱性质相同，使其易于用配备有Cy3®或AlexaFluor®555光源和滤光片的普通荧光仪器（Cy3®或AlexaFluor®555分别是GE Healthcare和Invitrogen的商标）进行实验。由于它对PS的亲和力大大增强，因此该试剂盒比仅与显微镜或流式细胞仪平台一起使用的其他基于膜联蛋白V的商业化凋亡试剂盒更为强大。除显微镜和流式细胞仪平台外，该试剂盒还可与荧光酶标仪一起使用。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入等量的Apopxin Orange工作溶液

3. 在室温下孵育1小时

4. 在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）或使用Cy3滤光片的荧光显微镜下检测荧光强度（底部读取模式）

溶液配制

工作溶液配制

将10μL的100X Apopxin 橙色（组分A）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin Orange工作溶液。 注意： 100μLApopxin Orange工作溶液足以用于一个孔。现用现配避免长时间放置。

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10ul /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。

3.在每个孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin Orange工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非贴壁细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（Ext / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm））或使用带有Cy3®滤光片的荧光显微镜对图像进行荧光强度检测。

图示

图1.用Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒染色的Costar黑色96孔板中Jurkat细胞的荧光图像。 不使用（左）/使用20 µM喜树碱（右）处理Jurkat细胞5小时。 使用具有通道的荧光显微镜测量荧光强度。

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在同时检测凋亡，坏死和健康细胞。凋亡被描述为一种主动的，程序性的自主细胞拆卸过程，可避免引起炎症。在凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，在观察形态变化之前，可以检测到磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现。该试剂盒中使用的PS指示剂与膜PS结合后会发出红色荧光。膜不透性DNA Nuclear Green DCS1（Ex / Em = 490/525 nm）标记核的能力证明，质膜完整性的丧失代表了晚期细胞凋亡和坏死的简单方法。此外，该试剂盒还提供了活细胞细胞质标记染料CytoCalcein Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞细胞质。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡（红色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）

2. 添加Apopxin 深红色测定溶液

3. 在室温下孵育30-60分钟

4. 使用具有660/20 nm（用于凋亡-APC通道），530/30 nm（用于坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（用于健康细胞-Pacific blue通道）的流式细胞仪或带有荧光显微镜的细胞分析 DAPI（健康细胞），FITC（坏死细胞）和Cy5滤波片（凋亡细胞）

溶液配制

储备溶液配制

1. CytoCalcein 紫色450储备溶液（200X）：将100 µL DMSO加到CytoCalcein Violet 450（组分D）小瓶中，制成200X CytoCalcein Violet 450储备溶液， 避光。

实验步骤

1.用Apopxin 深红色制备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导凋亡。

1.2离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL 100X Apopxin 深红色（组分A）。

1.5可选1：向坏死细胞中加入1 µL 200X Nuclear Green DCS1（组分C）。

1.6可选2：然后向细胞中加入1 µL 200X CytoCalcein Violet 450储备液，以进行健康的细胞染色。

1.7避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.8在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.9使用流式细胞仪检测荧光强度，该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm（凋亡-APC通道），530/30 nm（坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（健康细胞-Pacific Blue通道）显微镜用DAPI（健康细胞），FITC（坏死细胞）和Cy5滤波片（凋亡细胞）。

2.使用流式细胞仪分析细胞：

2.1使用流式细胞仪分别对Apopxin 深红色结合物进行定量，该流式细胞仪的荧光强度为660/20 nm（凋亡-APC通道），530/30 nm（坏死-FITC通道）和450/40 nm发射滤光片（健康细胞-Pacific Blue通道）。 注意：Apopxin 与贴壁细胞结合的流式细胞仪分析未经过常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.使用荧光显微镜分析细胞：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到盖玻片或黑色96孔板的上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑色96孔板）上生长细胞。与Apopxin 深红色孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加回到盖玻片（或96孔板）中。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与Apopxin 深红色孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3使用Cy5滤光片在荧光显微镜下用Apopxin 深红色分析凋亡细胞。当添加Nuclear Green DCS1时，使用FITC滤波片检测细胞活力；或当向细胞中添加CytoCalcein Violet 450时，使用Violet滤波片检测细胞活力。质膜上的红色染色表明Apopxin 深红色与细胞表面的PS结合。

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具，有多种参数可用于检测细胞活力。 该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来检测细胞凋亡。 在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。 已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS。 使用带有575/26 nm发射滤光片组（PE通道）的流式细胞仪，优化了该特定的测定试剂盒以监测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（200 µL /样品）

2. 添加膜联蛋白V-iFluor 555测定溶液

3. 在室温下孵育30至60分钟

4. 使用带有575/26 nm滤光片（PE通道）的流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜分析细胞

实验步骤

1.用膜联蛋白V-iFluor 555准备和孵育细胞：

1.1用测试化合物处理细胞一段时间（对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×10⁵细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液（组分B）中。

1.4向细胞中加入2 µL Annexin V-iFluor 555（组分A）。

1.5避光保存，于室温下孵育30至60分钟。

1.6在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300 µL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

1.7使用带有575/26 nm滤光片（PE通道）的流式细胞仪或带有Cy3滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析：

2.1使用带有575/26 nm滤光片的流式细胞仪（PE通道）定量Annexin V- iFluor 555结合物。

3.通过使用荧光显微镜进行分析：

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片盖玻片的载玻片上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。与Annexin V-iFluor 555孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加到盖玻片上。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与膜联蛋白V-iFluor 555孵育后，还可以将细胞固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.3在荧光显微镜下使用Cy3滤光片组，用Annexin V-iFluor 555分析凋亡细胞。将Nuclear Red DCS1（#17552）添加到细胞后，使用Cy5通道测量细胞活力。质膜上的橙色染色表明膜联蛋白V-iFluor 555与细胞表面的PS结合。

Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 蓝色荧光,适合微孔板检测

简要概述

我们的Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞活性的试剂盒。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。该试剂盒使用我们专有的基于荧光小分子的Apopxin™PS传感器，该传感器以比膜联蛋白V（Kd <10 nM）高得多的亲和力特异性结合PS。与膜PS结合后具有蓝色荧光。它可以以酶标仪，显微镜和流式细胞仪的形式使用，而大多数其他商业凋亡检测试剂盒只能与显微镜或流式细胞仪平台一起使用。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
2.加入等量的Apopxin™Violet 450工作溶液
3.在室温下孵育1小时
4.观察Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）的荧光强度（底部读取模式）或使用装有紫罗兰色滤光片的荧光显微镜

溶液配制

工作溶液配制

将10μL100X Apopxin™紫罗兰色450（组分A）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin™紫罗兰色450工作溶液。 

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10X /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育所需的时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞需要4-6小时）以诱导凋亡。注意：由于在405 nm激发时，从380至490 nm的宽发射光谱，某些化合物（例如喜树碱）可能会产生假阳性反应。

3.在每个孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin™Violet 450工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 405/450 nm（截止= 420 nm）或使用带有紫色滤光片的荧光显微镜对图像池进行荧光强度监测。

图1.用Apopxin™Violet 450偶联物染色的HeLa细胞的荧光图像。 Jurkat细胞在37℃下不使用（左）或用1μM星形孢菌素（右）处理4小时。 使用带有紫色滤光片组的显微镜（激发＝ 405nm）测量荧光强度。