Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒

简要概述

Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于染色细胞膜的试剂盒，Cell Navigator 细胞质膜染色试剂盒可快速，均匀地标记质膜，而没有凝集素表现出的细胞类型差异。 它可以用作HCS（高含量筛选）的分割工具，以及对细胞质膜进行染色以用于标准荧光显微镜检查。 试剂盒中使用的绿色荧光染料可固定但不能通透，因此不适用于还涉及通过抗体探测内部靶标的实验。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.准备并向细胞添加Cellpaint Green工作溶液
3.在37℃下孵育5至20分钟
4.使用FITC滤光片组读取荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
Cellpaint 绿色原液（500X）：
将100 uL DMSO（组分C）添加到Cellpaint Green（组分A）小瓶中，制成500X储备溶液。 注意：20 µL Cellpaint Green 500X储备溶液足以用于一个96孔板。 如果管密封严密，可以将未使用的Cellpaint Green 500X储备溶液分装并在≤-20ºC下保存1个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.工作溶液配制

Cellpaint 绿色工作溶液（1X）：
将20 uL的500X储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：我们建议在使用前使工作溶液新鲜。

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样品示例及操作

1.在细胞板中加入100 uL /孔（96孔板）或50 uL /孔（384孔板）的Cellpaint Green工作溶液。 避光保存，在37ºC下孵育细胞5-20分钟。 注意：细胞膜探针的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

2.除去每个孔中的工作溶液。 用生理缓冲液（例如HHBS，DPBS或您选择的缓冲液）洗涤细胞3次，并替换为HHBS。

3.可选：染色后固定细胞。 用4％甲醛固定细胞15-30分钟。 用生理缓冲液洗涤细胞三遍。

4.使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图1.在玻片上，Cellpaint Green与Hoechst 33342共染色的HL-60细胞的荧光图像。 使用荧光显微镜，使用带有FITC滤镜的60X油镜对细胞成像。 由于来自细胞边界上方和下方的膜的所有荧光信号均被不加选择地捕获，因此图像显得更加刺破和扩散。 与常规的落射荧光成像相比，共聚焦荧光成像比常规的落射荧光显微镜更灵敏，可以为您提供更多的控制。 如果可以使用共聚焦显微镜，则可能会获得清晰的细胞膜成像。

Cell Navigator 线粒体标记试剂盒 绿色荧光

简要概述

        Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记细胞器细胞器，如膜，溶酶体，线粒体和细胞核等。活细胞线粒体的选择性标记为研究细胞事件提供了一种强有力的方法。这个特定的试剂盒旨在标记蓝色荧光的活细胞线粒体。该试剂盒使用专有染料，可根据线粒体膜电位梯度选择性累积在线粒体中。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，可以很容易地渗透完整的活细胞，并在进入细胞后被困在线粒体中。该荧光线粒体指示剂长时间保留在线粒体中，因为该指示剂携带细胞保留组。这一关键特征显着提高了染色效率。标签协议是健壮的，需要 少的动手时间。它可以很容易地适用于各种荧光平台，如微孔板分析，免疫细胞化学和流式细胞术。它适用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞活力，细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒为所有重要组分提供了优化的细胞标记方案。它适用于增殖和非增殖细胞，可用于悬浮细胞和贴壁细胞。Cell Navigator 线粒体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

样品分析

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将所有组件温度调至室温。

1.2通过将20μLMitolite Green（组分A）稀释到10mL活细胞染色缓冲液（组分B）中制备染料工作溶液。

注1：对于一个96孔板，20μL的500X Mitolite Green（组分A）就足够了。在≤-20ºC下等分并储存未使用的500X Mitolite Green。避光，避免反复冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的浓度根据具体应用而变化。可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于粘附细胞：在96孔黑色墙壁/透明底板上或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。当细胞达到所需的汇合时，加入等体积（例如对于96孔板为100μL，对于384孔板为25μL）的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热（37℃）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料加工溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育30分钟至2小时。用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如浓度为1：1的生长培养基缓冲液）替换染料上样溶液。

注1：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或培养时间以使染料积累。

注2：悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）处理过的盖玻片上，并作为粘附细胞染色（见步骤2.1）。

图1.使用Cell Navigator™线粒体染色试剂盒染色的U2OS细胞图像* Costar黑色96孔板中的绿色荧光*

参考文献

Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒 橙色荧光

简要概述

        Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于染色细胞膜的试剂盒，Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒可快速，均匀地标记质膜，而没有凝集素表现出的细胞类型差异。它可以用作HCS（高含量筛选）的分割工具，以及对细胞质膜进行染色以用于标准荧光显微镜检查。试剂盒中使用的染色剂可以固定，但不能通透，因此不适用于还涉及通过抗体探测内部靶标的实验。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Navigator 细胞膜染色试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与Cellpaint Orange工作溶液在37ºC下孵育10-20分钟
3.在荧光显微镜下于Ex / Em = 540/590 nm（TRITC滤光片组）分析细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Cellpaint 橙色储备溶液（500X）：
将100 µL DMSO（组分C）添加到Cellpaint Orange（组分A）小瓶中，制成500X Cellpaint Orange储备液。 注意：如果管密封严密，未使用的500X Cellpaint Orange储备液可以在≤-20ºC下保存一个月。 避光。

2.工作溶液配制

将20 µL 500X Cellpaint Orange储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Cellpaint Orange工作溶液。 这种Cellpaint Orange工作溶液在室温下至少可稳定8小时。 避光。 注意：20 µL 500X Cellpaint Orange 500X储备溶液足以用于一个96孔板。

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样品示例及操作

1.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或50 µL /孔（384孔板）的Cellpaint Orange工作溶液。

2.避光保存，在37°C下孵育细胞10-20分钟。 注意：细胞膜探针的浓度取决于具体应用。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

3.除去每个孔中的Cellpaint Orange工作溶液。

4.用生理缓冲液（例如HHBS，PBS或您选择的缓冲液）洗涤细胞3次。

5.染色后固定细胞（可选）。 用4％甲醛固定细胞15-30分钟。 用生理缓冲液洗涤细胞三遍。

6.使用带有TRITC滤光片组（Ex / Em = 540/590 nm）的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

图1.在96孔黑色壁/透明底板中，用Cellpaint Orange染色的HeLa细胞的荧光图像。 使用带有TRITC滤光片的荧光显微镜对细胞成像。