DNA定量试剂盒（荧光高灵敏度）针对CytoCite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化

简要概述

        DNA定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量DNA的试剂盒，DNA定量是用于各种基因组分析的DNA样品制备中非常重要的。 这种Portelite dsDNA定量试剂盒提供了一种使用手持式荧光分析仪使用Helixyte Green探针定量dsDNA的快速方法。 它针对Cytocite 和Qubit 荧光计进行了优化。 Portelite dsDNA定量分析线性超过五个数量级。 该测定法对RNA上的双链DNA（dsDNA）具有高度选择性，并且设计为对于25pg / uL至100ng / uL的初始样品浓度是准确的。 Helixyte Green在与dsDNA结合后表现出大的荧光增强，并且比UV吸光度读数更敏感。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的DNA定量试剂盒。 

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备Helixyte 绿色工作溶液
在每个0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液（Cat＃：CCT100）
将10μLDNA标准品或测试样品加入每个试管中
在室温下孵育2分钟
使用CytoCite 荧光分析仪或Qubit 荧光分析仪监测荧光

溶液制备

Helixyte Green 工作溶液制备：
为10个样品制备足够的工作溶液，将10μLHelixyteGreen （组分A）加入2 mL DNA分析缓冲液（组分B）中。 注意：用铝箔覆盖或将其置于黑暗中，以保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在其制备后几小时内使用。

样品实验方案

        样品体积是1~20μL（取决于DNA样品的估计浓度）。推荐样品体积为10μL，DNA浓度范围为0.5~10 ng /μL。如果使用其他样品量，请在浓度计算中调整稀释倍数。

1.基于10μL样品体积生成以下方案，DNA浓度在0.5~10 ng /μL范围内。

1.1在每个Cytocite 样品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中加入190μL1XHelixyte Green 工作溶液注意：使用薄壁聚丙烯，透明的0.2 mL PCR管，如＃CCT100。

1.2将DNA标准品或测试样品10μL加入每个试管中，然后涡旋混合2~3秒。

1.3让所有试管在室温下孵育2分钟。

1.4将样品插入CytoCite 或Quibit ，并用绿色荧光通道监测荧光。按照适用于CytoCite 荧光分析仪的步骤进行操作。详细说明请点击查看。

2.标准校准曲线的制备

        对于Portelite 分析，您可以选择使用DNA标准制作校准曲线。 以下是生成定制DNA标准曲线的简要方案：

2.1用DNA Assay Buffer进行稀释，得到10,8,6,4,2,1,0.5,0 ng /μLDNA标准稀释液。

2.2将190μLHelixyteGreen 工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

2.3每管加入10μL标准品或10μL样品。

2.4在室温下孵育反应2分钟。

2.5将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算浓度样本。 我们建议使用在线线性回归计算器（点击查看）。

图1.使用Portelite 荧光DNA高灵敏度定量试剂盒生成的DNA标准曲线。 使用FITC通道定量荧光强度，使用log-log best-fit计算回归模型。 检测限为10 pg /μL。