Portelite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对 Cytocite 和 Qubit 荧光计进行了优化*

简要概述

Portelite 荧光总核酸定量试剂盒用于快速测量核酸总量，包括样品中的双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA) 和 RNA。 该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green All 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于测量样品中可能含有双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA)、RNA 和长寡核苷酸的核酸总量。 Helixyte Green All 试剂不加选择地与 dsDNA、ssDNA 和 RNA 结合。 Portelite 荧光总核酸定量试剂盒针对使用 CytoCite 或 Qubit® 荧光计测量核酸总量进行了优化。

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适用仪器

产品说明书

实验方案

概述

1.准备 Helixyte Green All 工作溶液
2.在每个 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green All 工作溶液
3.在每管中加入 10 µL 核酸标准品或测试样品
4.在室温下孵育 2 分钟
5.使用 CytoCite 荧光计或 Qubit 荧光计检测荧光强度

溶液制备

Helixyte Green ALL工作溶液
1.用检测缓冲液（组分 B）将 Helixyte Green All 试剂（组分 A）稀释 200 倍。 例如，要为 5 个样品制备足够的工作溶液，将 5 μL Helixyte Green All（组分 A）添加到 1 mL 检测缓冲液（组分 B）中。
注意：通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得最佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。

操作步骤 

样品体积的可接受范围是 1~20 μL，具体取决于核酸样品的估计浓度。
以下方案是基于 10 μL 的样品体积生成的。
1.将 190 µL 1X Helixyte Green All 工作溶液添加到每个 Cytocite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。
注意 使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。
2.每管加入10 μL核酸标准品或测试样品，涡旋2~3秒混匀。
3.在室温下孵育所有管子 2 分钟。
4.将样品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。

标准校准曲线的制作
对于 Portelite 检测，您可以选择使用核酸标准品制作校准曲线。 这是生成定制 DNA 标准曲线的简要方案。
1.进行 1:2 连续稀释：将 10 ng/μL 核酸标准品 #2（组分 D）添加到检测缓冲液（组分 B）中以获得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 标准品 稀释。
2.将 190 µL Helixyte Green All 工作溶液加入每个管中。
3.将 10 µL 标准品加入 0.2 mL PCR 管中，然后涡旋混合 2~3 秒。
4.在室温下孵育反应 2 分钟。
5.将样品插入 CytoCite 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。

图示

图 1. 使用 Qubit 荧光计（蓝色）或 CytoCite 荧光计（红色）比较总核酸剂量反应。

参考文献

Accurate bulk quantitation of droplet digital PCR.
Authors: Sun, Chen and Liu, Leqian and Vasudevan, Harish N and Chang, Kai-Chun and Abate, Adam R
Journal: bioRxiv : the preprint server for biology (2021)

Nucleic Acid Quantitation with Log-Linear Response Hybridization Probe Sets.
Authors: Wu, Lucia R and Fang, John Z and Khodakov, Dmitriy and Zhang, David Yu
Journal: ACS sensors (2020): 1604-1614

Nucleic Acid Extraction from Human Biological Samples.
Authors: Mullegama, Sureni V and Alberti, Michael O and Au, Cora and Li, Yan and Toy, Traci and Tomasian, Vanina and Xian, Rena R
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2019): 359-383

MICROFLUIDIC DEVICES FOR LABEL-FREE AND NON-INSTRUMENTED QUANTITATION OF UNAMPLIFIED NUCLEIC ACIDS BY FLOW DISTANCE MEASUREMENT.
Authors: Chatterjee, Debolina and Mansfield, Danielle S and Woolley, Adam T
Journal: Analytical methods : advancing methods and applications (2014): 8173-8179

Helicase-dependent amplification of nucleic acids.
Authors: Cao, Yun and Kim, Hyun-Jin and Li, Ying and Kong, Huimin and Lemieux, Bertrand
Journal: Current protocols in molecular biology (2013): 15.11.1-15.11.12

Concentration determination of nucleic acids and proteins using the micro-volume BioSpec-nano-spectrophotometer.
Authors: Sukumaran, Suja
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2011)

Microvolume quantitation of nucleic acids.
Authors: Desjardins, Philippe R and Conklin, Deborah S
Journal: Current protocols in molecular biology (2011): 3J

Comparison of two real-time PCR methods for detection of ostreid herpesvirus 1 in the Pacific oyster Crassostrea gigas.
Authors: Martenot, C and Oden, E and Travaillé, E and Malas, J P and Houssin, M
Journal: Journal of virological methods (2010): 86-9

NanoDrop microvolume quantitation of nucleic acids.
Authors: Desjardins, Philippe and Conklin, Deborah
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2010)

Effect of perinatal short-course zidovudine on the clinical and virological manifestations of HIV-1 subtype E infection in infants.
Authors: Sutthent, Ruengpung and Chokephaibulkit, Kulkanya and Piyasujabul, Daorung and Vanprapa, Nirun and Roogpisuthipong, Anuwat and Chaisilwatana, Pongsakdi
Journal: Journal of clinical virology : the official publication of the Pan American Society for Clinical Virology (2002): 47-56

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒 优化用于 CytoCite 和Qubit 荧光分析仪

	货号	11109	存储条件	在2-8度冷藏保存
	规格	100 Tests	价格	1008
	Ex (nm)	485	Em (nm)	590
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要组成部分。 Biuret，Lowry，BCA和Bradford检测常规用于估计蛋白质浓度。然而，这些比色测定不太敏感，并且需要大的样品体积以确保准确性。我们的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测定法（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定法）更敏感。试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中是非荧光的，但与蛋白质反应迅速并产生明亮的荧光。 Portelite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种简单的方法来定量溶液中的蛋白质浓度。该测定的动态范围为12.5ug / mL至5mg / mL的BSA。该套件针对Cytocite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化。它可用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测定柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率; （4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒。 

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备并添加BSA标准品或测试样品（10μL）
在0.2 mL PCR管（Cat＃CCT100）中制备并添加Prolite 橙色工作溶液（190μL）
在室温下孵育15分钟
使用CytoCite 或Qubit荧光分析仪监测荧光

溶液制备

Prolite 橙色工作溶液：
将5μLProlite Orange（200X）（组分A）加入995μL样品稀释缓冲液（组分E）中并充分混合。 注意：请勿将工作溶液混入玻璃容器中。

样品实验方案

该方案适用于Qubit®荧光分析仪。

1.运行蛋白质测定

1.1每孔加入190μL/孔的Prolite Orange工作溶液。

1.2将10μLBSA标准品（组分B，C，D）或10μL样品加入190μLProlite Orange工作溶液管中，使最终测定体积为200μL/管。

1.3在室温下孵育反应15分钟。 注意：保护样品避光，避免将样品拿在手中。

1.4将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。 按照适用于CytoCite 荧光计的步骤进行操作。具体操作点击查看。

2.Qubit®荧光计的简要方案

2.1按Qubit®主屏幕主屏幕上的蛋白质，然后按读取标准。

2.2将3个含有标准的试管中的每一个插入样品室。

2.3关闭盖子并按Read标准。

2.4仪器显示结果并生成校准曲线。

2.5按Run sample并选择样品量至10μL。

2.6将样品管插入样品室。

2.7盖上盖子，然后按Read tube。

2.8仪器在实验屏幕上显示结果。 最高值是原始样品浓度，最低值是稀释浓度。

3.标准溶液制备

        对于CytoCite 荧光计测定，您可以选择使用自己的蛋白质标准进行校准。这是一个生成定制蛋白质标准曲线的简要方案。

3.1在PBS缓冲液中制备400μg/ ml（400 ng /μL）的蛋白质溶液。

3.2用PBS缓冲液进行1：2连续稀释，得到200,100,50,25,12.5ng /μl系列标准稀释液。

3.3将190μLPolite 橙色工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

3.4每管加入10μL标准品或10μL样品。

3.5在室温下孵育反应15分钟。

3.6将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

图示

图1使用Portelite 荧光蛋白定量试剂盒*优化用于CytoCite 和Qubit 荧光分析仪*和Qubit®荧光分析仪，在Ex / Em 485 / 5000nm下测量BSA，鸡蛋卵清蛋白，猪甲状腺球蛋白的系列稀释液。 可以检测到低至50 ng / mL的蛋白质。

参考文献

Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2017): 37606-37614

Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954

Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87

Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7

Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
Journal: Analyst (2015): 3375-83

Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40

Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81

Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516

Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9

A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒 优化用于 CytoCite 和Qubit 荧光分析仪

	货号	11111	存储条件	在2-8度冷藏保存
	规格	500 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	485	Em (nm)	590
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Portelite 荧光蛋白定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于定量蛋白的试剂盒，蛋白质定量是蛋白质纯化，电泳，细胞生物学，分子生物学和其他研究应用中的重要组成部分。 Biuret，Lowry，BCA和Bradford检测常规用于估计蛋白质浓度。然而，这些比色测定不太敏感，并且需要大的样品体积以确保准确性。我们的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒比现有的比色蛋白测定法（例如Bradford和Bicinchoninic acid（BCA）测定法）更敏感。试剂盒中使用的Prolite 橙在水溶液中是非荧光的，但与蛋白质反应迅速并产生明亮的荧光。 Portelite 荧光蛋白定量试剂盒提供了一种简单的方法来定量溶液中的蛋白质浓度。该测定的动态范围为12.5ug / mL至5mg / mL的BSA。该试剂盒针对Cytocite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化。它可用于（1）研究蛋白质/蛋白质相互作用; （2）亲和层析后测定柱级分; （3）估计细胞提取物中膜蛋白的回收率; （4）融合蛋白的高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Portelite 荧光蛋白定量试剂盒。 

产品说明书

操作步骤

简要概述

准备并添加BSA标准品或测试样品（10μL）
在0.2 mL PCR管（Cat＃CCT100）中制备并添加Prolite 橙色工作溶液（190μL）
在室温下孵育15分钟
使用CytoCite 或Qubit荧光分析仪监测荧光

溶液制备

Prolite 橙色工作溶液：
将5μLProlite Orange（200X）（组分A）加入995μL样品稀释缓冲液（组分E）中并充分混合。 注意：请勿将工作溶液混入玻璃容器中。

样品实验方案

该方案适用于Qubit®荧光分析仪。

1.运行蛋白质测定

1.1每孔加入190μL/孔的Prolite Orange工作溶液。

1.2将10μLBSA标准品（组分B，C，D）或10μL样品加入190μLProlite Orange工作溶液管中，使最终测定体积为200μL/管。

1.3在室温下孵育反应15分钟。 注意：保护样品避光，避免将样品拿在手中。

1.4将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。 按照适用于CytoCite 荧光计的步骤进行操作。具体操作点击查看。

2.Qubit®荧光计的简要方案

2.1按Qubit®主屏幕主屏幕上的蛋白质，然后按读取标准。

2.2将3个含有标准的试管中的每一个插入样品室。

2.3关闭盖子并按Read标准。

2.4仪器显示结果并生成校准曲线。

2.5按Run sample并选择样品量至10μL。

2.6将样品管插入样品室。

2.7盖上盖子，然后按Read tube。

2.8仪器在实验屏幕上显示结果。 最高值是原始样品浓度，最低值是稀释浓度。

3.标准溶液制备

        对于CytoCite 荧光计测定，您可以选择使用自己的蛋白质标准进行校准。这是一个生成定制蛋白质标准曲线的简要方案。

3.1在PBS缓冲液中制备400μg/ ml（400 ng /μL）的蛋白质溶液。

3.2用PBS缓冲液进行1：2连续稀释，得到200,100,50,25,12.5ng /μl系列标准稀释液。

3.3将190μLPolite 橙色工作溶液加入0.2 mL PCR管中。

3.4每管加入10μL标准品或10μL样品。

3.5在室温下孵育反应15分钟。

3.6将样品插入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

数据分析

图1使用Portelite 荧光蛋白定量试剂盒*优化用于CytoCite 和Qubit 荧光分析仪*和Qubit®荧光分析仪，在Ex / Em 485 / 5000nm下测量BSA，鸡蛋卵清蛋白，猪甲状腺球蛋白的系列稀释液。 可以检测到低至50 ng / mL的蛋白质。

参考文献

Dual Amplification Fluorescence Assay for Alpha Fetal Protein Utilizing Immunohybridization Chain Reaction and Metal-Enhanced Fluorescence of Carbon Nanodots
Authors: Xu, D. D.; Liu, C.; Li, C. Y.; Song, C. Y.; Kang, Y. F.; Qi, C. B.; Lin, Y.; Pang, D. W.; Tang, H. W.
Journal: ACS Appl Mater Interfaces (2017): 37606-37614

Quantification of Membrane Protein Self-Association with a High-Throughput Compatible Fluorescence Assay
Authors: Li, J.; Qiu, X. J.
Journal: Biochemistry (2017): 1951-1954

Use of anchor protein modules in fluorescence polarisation aptamer assay for ochratoxin A determination
Authors: Samokhvalov, A. V.; Safenkova, I. V.; Eremin, S. A.; Zherdev, A. V.; Dzantiev, B. B.
Journal: Anal Chim Acta (2017): 80-87

Tryptophan fluorescence quenching as a binding assay to monitor protein conformation changes in the membrane of intact mitochondria
Authors: Akbar, S. M.; Sreeramulu, K.; Sharma, H. C.
Journal: J Bioenerg Biomembr (2016): 241-7

Ag@SiO2-entrapped hydrogel microarray: a new platform for a metal-enhanced fluorescence-based protein assay
Authors: Jang, E.; Kim, M.; Koh, W. G.
Journal: Analyst (2015): 3375-83

Label-free fluorescence assay for protein kinase based on peptide biomineralized gold nanoclusters as signal sensing probe
Authors: Song, W.; Wang, Y.; Liang, R. P.; Zhang, L.; Qiu, J. D.
Journal: Biosens Bioelectron (2015): 234-40

Budded baculoviruses as a tool for a homogeneous fluorescence anisotropy-based assay of ligand binding to G protein-coupled receptors: the case of melanocortin 4 receptors
Authors: Veiksina, S.; Kopanchuk, S.; Rinken, A.
Journal: Biochim Biophys Acta (2014): 372-81

Characterization of G protein-coupled receptors by a fluorescence-based calcium mobilization assay
Authors: Caers, J.; Peymen, K.; Suetens, N.; Temmerman, L.; Janssen, T.; Schoofs, L.; Beets, I.
Journal: J Vis Exp (2014): e51516

Cleavage of pro-tumor necrosis factor alpha by ADAM metallopeptidase domain 17: a fluorescence-based protease assay cleaves its natural protein substrate
Authors: Zhang, C.; Zheng, L.; Nurnberg, J.; Vacari, B. M.; Zhou, J.; Wang, Y.
Journal: Anal Biochem (2014): 14-9

A fluorescence-based thermal shift assay identifies inhibitors of mitogen activated protein kinase kinase 4
Authors: Krishna, S. N.; Luan, C. H.; Mishra, R. K.; Xu, L.; Scheidt, K. A.; Anderson, W. F.; Bergan, R. C.
Journal: PLoS One (2013): e81504