Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量凋亡染色质浓缩来监测细胞凋亡。与健康细胞相比，凋亡细胞的染色质紧密结合更多数量的核染料。我们的Cell Meter 核细胞凋亡测定试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可用于检测核浓缩细胞的凋亡。这种荧光测定法是基于使用我们专有的非荧光染料对细胞中DNA含量的检测，该染料在与DNA结合后会发出强烈的荧光。在正常细胞中，Nuclear Green 不具有细胞渗透性，但是在凋亡细胞中，质膜受损或细胞代谢受损/没有细胞代谢的细胞无法阻止染料进入细胞。染料一旦进入细胞，便会与细胞内DNA结合，产生高度荧光的复合物，从而将细胞鉴定为无活力的细胞。核绿色染色；可以使用流式细胞仪（FL1通道）或荧光显微镜（FITC滤波片组）测量DCS1。该试剂盒可与我们的其他凋亡试剂一起使用，例如我们的Cell Meter NIR线粒体膜电位检测试剂盒（Cat＃22802），用于细胞存活率和凋亡的多参数研究。该试剂盒经过优化，可筛选凋亡激活剂和抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 核细胞凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用5×10⁵至1×10⁶cell/ mL的密度制备含测试化合物的细胞

2. 将5µL 200X Nuclear Green DCS1加入1 mL细胞溶液中

3. 将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30至60分钟

4. 沉淀细胞并将细胞重悬于1 mL生长培养基中

5. 使用带有FL1通道的流式细胞仪分析荧光强度

实验步骤

1.对于每个样品，在1 mL温暖的培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞以诱导凋亡。

3.向处理过的细胞中加入5 µL 200X Nuclear Green DCS1（组分A）。

4.将细胞溶液在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30至60分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞贴壁，并在用Nuclear Green DCS1染料上样溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.可选：以1000 rpm离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于1 mL的测定缓冲液（组分B）或自备缓冲液中。

6.使用带有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490/525 nm）检测荧光强度。

Cell Meter 荧光法线粒体超氧化物活性检测试剂盒

简要概述

        Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测线粒体的试剂盒，线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低至中等水平的超氧化物的产生对于许多基本细胞过程的适当调节是至关重要的，包括基因表达，信号转导和肌肉适应耐力运动训练。不受控制的线粒体超氧化物产生可引发细胞氧化损伤，其导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。细胞内线粒体超氧化物的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响非常重要。Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂MitoROS 520来量化活细胞中的超氧化物水平.MitoROS 520具有细胞渗透性，能够快速，有选择地检测线粒体中的超氧化物。它在与超氧化物反应时产生绿色荧光，并且在Ex / Em = 490 / 520nm处可以容易地读取所得荧光。Cell Meter 荧光线粒体超氧化物活性测定试剂盒提供灵敏的一步荧光测定法，用于检测活细胞中的线粒体超氧化物，孵育1小时。该试剂盒可用于流式细胞仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒。 

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样本实验方案

概述

适用于荧光显微镜：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.添加MitoROS™520工作解决方案

4.将细胞在37°C染色60分钟

5.监测Ex / Em = 490 / 530nm处的荧光增加

适用于流式细胞仪：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.在37°C下染色细胞60分钟

4.用流式细胞仪监测荧光强度

操作步骤

对于荧光显微镜/ 96孔微孔板：

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在培养基或所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用5μ   MAMA在37°C处理RAW 264.7巨噬细胞2小时以诱导超氧化物。 

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到细胞板中。

4.将细胞在37°C孵育1小时，并使用荧光显微镜和FITC过滤器拍摄图像。

对于流式细胞仪：

1.根据需要处理细胞。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意我们用50μM  AMA在37℃处理Jurkat细胞2小时以诱导超氧化物。

3.将1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）细胞加入细胞中。

4.将细胞在5％CO 2,37℃培养箱中孵育1小时，并使用FITC通道中的流式细胞仪监测荧光强度（Ex / Em = 488 / 530nm）。

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 *近红外荧光,适合微孔板检测*

简要概述

Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列试剂盒，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些 的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter细胞活性检测试剂盒 *近红外荧光,适合微孔板检测* 使用一种专属型染料，一旦进入活细胞中，其荧光强度增强。这种染料是一种疏水性复合物，可以轻易地进入完整的活细胞。通过细胞内酯酶水解弱荧光性底物，产生具有强烈荧光的亲水性产物，并且可以在保持在细胞质中。这种酯酶的活性与活细胞数量成比例关系，因此酯酶水解荧光底物形成的产物的荧光强度与活细胞数量相关。生长在培养板中的细胞可以被染料，且在不到两小时内就可以完成定量分析。本检测法比四唑盐或者基于Alarmar Blue的检测更加强大、稳定。它可以用于许多荧光实验平台的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。它在许多研究中非常有用，包括细胞粘附性、趋化作用、 抗性、细胞活性、细胞凋亡和细胞毒性研究。本试剂盒提供所有必需组分和检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞，也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中，每孔用试剂100ul，本试剂盒提供的试剂足以进行200次检测；384微孔板中，每孔加试剂25ul，本试剂盒提供的试剂足以进行800次检测。

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样品实验方案

简要概述

准备含测试化合物的细胞溶液
取出介质
加入CytoCalcein™NIR工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
在室温或37°C下孵育1小时
在Ex / Em = 635/670 nm（截止= 665 nm）时读取荧光强度（底部读取模式）

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
CytoCalcein™NIR储备溶液：
将20 µL DMSO（组分B）添加到CytoCalcein™NIR（组分A）的小瓶中，并充分混合以制成CytoCalcein™NIR储备液。 注意：20 µL CytoCalcein™NIR储备液足以装满一块板。 避光。 为了存放，请将管子密封。

2.工作溶液配制

将20 µL CytoCalcein™NIR储备溶液添加到瓶中的测定缓冲液（10 mL，组分C）中并充分混合以制成CytoCalcein™NIR工作溶液。 注意：此CytoCalcein™NIR工作溶液适用于一块细胞板，在室温下至少可稳定2小时。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.根据需要用测试化合物处理细胞。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入100 µL /孔（96孔板）和25 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.从细胞中除去培养基。注意：加载CytoCalcein™NIR工作溶液之前，必须除去培养基。

3.加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的CytoCalcein™NIR工作溶液。

4.在室温或37°C下避光放置1小时。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。对于非贴壁细胞，建议在孵育后以800 rpm的速度离心细胞板2分钟，然后制动。

5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 635/670 nm（截止= 665 nm）下监控荧光强度。

Cell Meter 细胞衰老活性测定试剂盒

简要概述

Cell Meter 细胞衰老活性测定试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞衰老的试剂盒，细胞衰老是触发不可逆的生长停滞，以防止DNA损伤的细胞生长。与衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）在衰老细胞中高度过表达，并且已被广泛用作衰老标记。 X-gal染色是一种比色法，可广泛用于检测衰老细胞中的SA-beta-gal。彩色方法有一些局限性，例如由于X-gal的细胞渗透性低，需要较长的染色时间和较低的灵敏度而需要固定样品。 Cell Meter 细胞衰老活性测定试剂盒使用Xite β-D-吡喃半乳糖苷，这是一种荧光β-Gal底物，易于进入活细胞，并被细胞内的SA-β-gal裂解，产生强烈的绿色荧光。与不渗透细胞的X-Gal底物不同，它具有出色的细胞渗透性。 Cell Meter 细胞衰老活性测定试剂盒使用户能够以更高的灵敏度和强大的性能检测衰老。 Xite产品可以很好地保留在细胞内，为荧光成像和流式细胞仪分析产生稳定的信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞衰老活性测定试剂盒。 

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样品实验方案

简要概述

1.根据需要处理样品。
2.准备Xite β-D-吡喃半乳糖苷工作溶液并将其添加到样品中。
3.在37°C下孵育样品15至45分钟。
4.使用FITC滤光片组监控荧光强度。

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
Xite β-D-吡喃半乳糖苷储备溶液（100X）：
将100 uL DMSO（组分C）添加到Xite β-D-吡喃半乳糖苷（组分A）中并充分混合。 注意：将未使用的Xite β-D-吡喃半乳糖苷储备溶液以单次使用的等分试样保存在-20°C下。

2.工作溶液

Xite β-D-吡喃半乳糖苷工作溶液（1X）：
用1 mL测定缓冲液稀释10 uL Xite β-D-吡喃半乳糖苷储备溶液（100X），制成Xite β-D-吡喃半乳糖苷工作溶液（1X）。注意：应立即使用Xite β-D-吡喃半乳糖苷工作溶液。

样品操作及实验分析

以下方案可用作指导，具体实验应根据需要进行调整。

1.根据需要处理样品。

2.用您选择的缓冲液（例如DPBS）洗涤细胞。

3.加入100 uL Xite β-D-吡喃半乳糖苷工作溶液15-45分钟，然后在37°C的培养箱中孵育样品。 注意：孵育的时间需要仔细确定。

4.取出工作溶液并用您选择的缓冲液洗涤细胞。

5.将细胞重悬于测定缓冲液（组分B）中，并使用流式细胞仪或带有FITC过滤器的荧光显微镜监控荧光强度。

Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光

简要概述

        Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。它可以对多种生物分子造成损害，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进针对入侵病原体的宿主防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是涉及生理和病理过程的一系列基本生物氧化剂。由于其半衰期极短且稳态浓度低，因此检测和了解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。 AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green专为满足这种需求而开发。它提供了一种敏感的工具来监测活细胞中的ONOO水平。AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green特别与细胞间ONOO-反应生成亮绿色荧光产品。它可用于荧光成像，流式细胞仪和基于荧光酶标仪的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 绿色荧光 。 

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样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（500X）：
向DAX-J2 PON Green小瓶（组分A）中添加20 µL DMSO（组分C）。 注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green储备溶液足以装满1个板。

2.工作溶液

将10μL的500X DMSO重构的DAX-J2 过氧亚硝酸盐传感器储备溶液添加到500μL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：工作解决方案不稳定； 使用前根据需要进行准备。

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样品操作及实验分析

1.在90 µL（96孔板）或22.5 µL（384孔板）中添加10 µL /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的DAX-J2 PON Green工作溶液。细胞板中每孔的细胞培养。注意：染色前无需清洗细胞。建议用完全培养基染色细胞。

2.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和22.5 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1。

3.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm（截止波长= 515 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有FITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 蓝色荧光

简要概述

        Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞自噬的试剂盒，自噬是一种进化上保守的降解过程，其靶向长寿命蛋白质，细胞器和其他细胞质成分，通过溶酶体途径降解。自噬途径与遍在蛋白 – 蛋白酶体途径的作用互补，其通常降解短寿命蛋白质。多重细胞作用需要激活自噬途径，包括饥饿期间的存活，细胞内组分的清除，发育和免疫。在没有压力的情况下，自噬具有管家功能，去除受损的细胞器和细胞成分，防止细胞毒性作用。自噬的减少和缺陷与多种疾病有关，例如Huntingtons，Alzheimers和Parkinsons。就癌症发展而言，自噬似乎扮演着多重角色。某些自噬蛋白（如Beclin-1和Bif-1）的表达减少或缺失会增加小鼠的肿瘤易感性，而这些蛋白的过表达可抑制癌细胞的生长。然而，自噬对于实体瘤的营养不良和缺氧核心内的癌细胞的存活是至关重要的。 Cell Meter 自噬试剂盒使用Autophagy Blue 作为特异性自噬体标记来分析自噬的活性。该测定被优化用于直接检测分离和附着细胞中的自噬。该试剂盒为分析方案提供了所有必需的组分。 Cell Meter 自噬试剂盒适用于荧光显微镜，荧光酶标仪和流式细胞仪。 Autophagy Blue 在Ex / Em = 333 / 518nm处具有荧光激发和发射。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒。

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样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞，密度为1 – 2×10⁴个细胞/孔
2.添加Autophagy Blue 工作溶液
3.在37°C孵育15-60分钟
4.用洗涤缓冲液洗涤细胞
5.监测Ex / Em = 330 / 520nm处的荧光增加（截止= 475nm），使用DAPI滤光片组的荧光显微镜或使用Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式细胞仪

工作溶液配制

将20μL500XAutophagy Blue （组分A）加入10 mL染色缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Autophagy Blue 工作溶液。 避光。 注意：对于一个96孔板，20μL的500X Autophagy Blue （组分A）就足够了。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.根据您的特异性诱导方案（约1-2×104个细胞/孔/ 96孔板）将细胞培养至 适于自噬诱导的密度。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。

2.去除培养基

3.向每个孔中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Autophagy Blue 工作溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.用洗涤缓冲液（组分C）洗涤细胞3-4次，然后向每个孔中加入100μL洗涤缓冲液（组分C）。注意：如果细胞看起来没有充分染色，建议增加标记浓度或孵育时间以使染料积累。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 330 / 520nm（截止= 475nm），具有DAPI滤光器组的荧光显微镜或具有Ex / Em = 330 / 520nm通道的流式细胞仪监测荧光强度。

数据分析

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于流式细胞仪橙色检测

简要概述

        Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

        Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 µL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

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样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Nitrixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。

Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒

简要概述

        Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞毒性检测试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。有许多不同的参数都可以用来检验细胞活性。Cell Meter荧光法细胞毒性检测试剂盒提供了一种快速、简单、精确、均一的一种荧光分析法来对细胞活性进行检测。本检测法是基于蓝色、非荧光性染料刃天青，接受了来自活细胞线粒体呼吸链中释放的电子时，被还原成粉红色荧光染料（试卤灵）；通过对其颜色、荧光的变化的观察来实现检测。产物试卤灵的总量与活细胞数量成直接比例关系。对细胞的增殖性和细胞毒性检测，用本试剂盒比用其他检测法（例如，MTT）具有更灵敏度；因为本试剂盒的组分非常适合于低细胞毒性分析，并且能进行长时间保温（例如24~48小时）。本检测法可以便捷地用于96和384微孔板分析中。其灵敏度（<100 CHO细胞），非放射性和无需洗脱，这些特性使本试剂盒适用于细胞增值性和细胞毒性的高通量扫描筛选，与许多化合物不同的是，它可以用于各种不同的实验平台中。本试剂盒提供所有必需组分和检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞，也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中，每孔用试剂20ul，本试剂盒提供的试剂足以进行1000次检测；384微孔板中，每孔加试剂10ul，本试剂盒提供的试剂足以进行2000次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞毒性检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.添加1/5体积的分析溶液（组分A）
3.将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育1-24小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（底部读取模式）（截止= 570 nm）

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中，并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。 对于96孔板，建议的总体积为100μL，对于384孔板，建议的总体积为50μL。

2.对照组设置
2.1阳性对照：含有细胞和已知的增殖或细胞毒性诱导剂。
2.2阴性对照：含有细胞但不含有测试化合物。
2.3载体对照：含有细胞和用于递送测试化合物的载体。
2.4非细胞对照：含有不含细胞的生长培养基。 注意：血清中的LDH会导致背景荧光。
2.5测试化合物对照：含有用于递送测试化合物的载体[Hank's平衡盐溶液（HBSS）或磷酸盐缓冲盐水（PBS）]和测试化合物。 一些测试化合物具有强自发荧光并且可能产生假阳性结果。 注意：对于96孔板，将所有对照的总体积与100μL匹配，对于具有生长培养基的384孔板，将所有对照的总体积与50μL相匹配。
 
3.将测定溶液（组分A）预热至37°C，并在开始实验前彻底混合。

4.向每个孔中加入20μL/孔（96孔板）或10μL/孔（384孔板）的测定溶液（组分A）。 轻轻摇动平板30秒，混合试剂。

5.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育1-24小时，避光。 注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型的代谢率和使用的细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
6.在Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）下用荧光酶标仪（底部读取模式）监测荧光强度。
 
数据分析
        从含有细胞的那些孔的值中减去来自非细胞对照孔的背景荧光读数。注意：空白孔的背景荧光可以根据生长培养基或微量滴定板的来源而变化。每个孔中的荧光读数表示该孔中的细胞数。

根据以下公式计算样品和对照的细胞活力百分比：
％细胞活力= 100×（Fsample-Fo）/（Fctrl-Fo）
Fsample是在测试化合物存在下的荧光读数。
Fctrl是不存在测试化合物（载体对照）时的荧光读数。
Fo是平均背景（非细胞对照）荧光强度。

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算CHO-K1细胞样品。

简要概述

Cell Meter 活细胞免洗胱天蛋白酶3/7成像试剂盒使用我们开发的可渗透细胞的荧光胱天蛋白酶底物ApoSight Green Caspase 3/7（荧光探针）直接检测活细胞中的胱天蛋白酶活性。 ApoSight Green Caspase 3/7底物由三个部分组成，包括a）荧光团，b）半胱天冬酶选择性肽片段（DEVD），以及c）细胞穿透部分。细胞穿透部分将探针带入活细胞。进入活细胞后，半胱天冬酶选择性肽片段被半胱天冬酶裂解以释放荧光团。恢复的荧光强度与要测量的胱天蛋白酶的活性直接相关。与活细胞中现有的半胱天冬酶测定相比，ApoSight Green Caspase 3/7底物更加稳定，方便和准确。 ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物释放出Ex / Em〜490/520 nm的荧光团。如NucView试剂所报道的，它不需要DNA相互作用即可发荧光。如FMK肽探针所报道的，它不抑制胱天蛋白酶活性。尽管胱天蛋白酶的荧光FMK肽抑制剂被广泛用于检测活细胞中的胱天蛋白酶活性，但是该技术有一些严重的局限性：a）FMK半胱天冬酶抑制剂具有很高的细胞毒性，因为FMK肽与活性胱天蛋白酶共价结合。 b）FMK肽与caspase的不可逆共价结合会抑制caspase活性，导致假阳性凋亡。 C）FMK分析具有极高的本底，并且需要大量洗涤，从而导低的通量。 d）FMK肽在水溶液中不稳定，必须立即使用。 Cell Meter 活细胞免洗Caspase 3/7成像试剂盒提供了优化的荧光成像测定法，用于检测caspase3 / 7活性。该检测可以使用96孔或384孔板进行实验，并易于适应自动化。

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适用仪器

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.使用96孔板的密度为5×10⁴至2×10⁵细胞/ 100 µL /孔的待测化合物制备细胞
2.加入等体积的ApoSight Caspase 3/7底物工作溶液
3.在5％CO₂培养箱中于37°C孵育60分钟
4.用HHBS洗涤细胞1-2次
5.使用带有530/30 nm滤波片（FITC通道）的流式细胞仪或带有FITC滤波片组的荧光显微镜分析细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。

ApoSight Green Caspase 3/7底物储备液（200X）
在ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物瓶中加入50 µL DMSO，制成200X ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物原液。
注意，一次性使用等分试样，以避免重复的冻融循环。
 
2.工作溶液配置
ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液
通过将5 µL 200X ApoSight Green Caspase 3/7底物储备溶液与1 mL分析缓冲液（组分B）混合，制备ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液。
注意，100 µL ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液足以进行96孔板的10次检测
注意，实验前准备足够的ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液，并立即使用。

样品示例及操作

悬浮培养中诱导细胞凋亡的实例

1.用2μg/ mL喜树碱处理Jurkat细胞3小时
2.用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3-4小时
3.用4μg/ mL喜树碱处理HL-60细胞4小时
4.用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意，应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导凋亡细胞密度。

荧光显微镜的样品方案

1.用5×10⁴至2×10⁵个细胞/ 100 µL /孔/ 96孔板的密度制备含待测化合物的细胞。
2.向细胞中加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板）。
3.在5％CO₂培养箱中于37°C孵育60分钟。
4.用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞1-2次。
5.使用FITC滤波片组的荧光显微镜成像。

图示

图1.使用ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物检测Jurkat细胞中胱天蛋白酶3/7活性。将Jurkat细胞（200,000个细胞/孔/ 96孔板）用1μM星形孢菌素或DMSO处理4小时。将细胞与Caspase 3/7底物工作溶液在37°C下孵育1小时。使用FITC滤波片组，用荧光显微镜拍摄图像。

Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过检测Caspase 3的激活来监测细胞凋亡。由于caspase-3（CPP32 / apopain）的激活对于细胞凋亡的启动很重要，因此caspase 3被公认为是细胞凋亡的可靠指标。Caspase 3具有对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）的底物选择性。该试剂盒使用Ac-DEVD-AMC作为caspase-3活性的荧光指示剂。Caspase 3切割AMC肽会产生强荧光的AMC，该荧光在450-480 nm激发下用340-370 nm的荧光进行监测。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案，该测定适用于高通量测定。该试剂盒以96孔板，每孔使用100 uL试剂，试剂足够200次检测。该试剂盒以384孔板，每孔使用25 uL试剂，试剂足够800次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液

3. 在室温下孵育1小时

4. 检测Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）的荧光强度

溶液配制

工作溶液配制

将50 µL Caspase 3/7底物（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Caspase 3/7底物工作溶液。 注意：将未使用的组分A和B分装并存储在-20℃下。 避免重复冻结/解冻循环。

实验步骤

1. 通过向PBS或所需的缓冲液中加入10 µL /孔的10X测试化合物（96孔板）或5 µL /孔的5X测试化合物（384孔板）来处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2. 将细胞板在37°C，5％CO₂培养箱中孵育（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。

3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Caspase 3/7底物工作溶液。

4. 在避光的条件下，在室温下孵育平板至少1小时。注意：如果需要，在室温下添加Caspase 3/7工作溶液之前10分钟，向选定样品中添加1 µL 1 mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑制剂，以确认对caspase 3 / 7-like的抑制活动。

5. 以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非粘附细胞）2分钟（制动）。

6. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 350/450 nm（截止= 420 nm）处检测荧光强度。

图示

图1.使用Cell Meter Caspase 3/7活性凋亡测定试剂盒检测Jurkat细胞中的Caspase 3/7活性。 当天，将Jurkat细胞以80,000个细胞/孔/ 90 µL的浓度接种在Costar黑色96孔板中。 在有和没有1 µM星形孢菌素的情况下将细胞处理4小时，并在有或没有10 µM的胱天蛋白酶抑制剂AC-DEVD-CHO的情况下处理细胞10分钟。 加入半胱天冬酶3/7测定溶液（100μL/孔），并在室温下孵育1小时。 在Ex / Em ＝ 360 / 470nm（截止＝ 420nm）下测量荧光强度。

图2.白蛋白暴露上调了足细胞中的促凋亡途径。 A，活化的半胱天冬酶3/7活性相对于用5mg / ml白蛋白（实心柱）或5mg / ml右旋糖酐（实心柱）处理的足细胞中的总细胞蛋白标准化了指定的时间。 *表示与相应的右旋糖酐处理的对照相比，P <0.0001。 B，用5mg / ml葡聚糖（Dex）或5mg / ml白蛋白（Alb）处理培养的足细胞的TUNEL染色。核用DAPI染成蓝色。 TUNEL阳性细胞核是绿色的。 C，将半胱天冬酶3/7活性标准化为用5 mg / ml白蛋白或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD（泛半胱氨酸蛋白酶抑制剂）处理的足细胞中的总细胞蛋白。 z VAD很大程度上废除了caspase活性（*，P = 0.01对白蛋白+ z VAD）。 D，用锥虫蓝测定法测定的死细胞百分比，用单独的5 mg / ml白蛋白（空心柱）或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD（实心柱）处理24小时或5 mg / ml的足细胞单独使用白蛋白（水平阴影线）或5 mg / ml白蛋白+50 µM z-VAD 48小时（垂直阴影线）。 *表示在48小时时与白蛋白+ z-VAD相比，P = 0.001。 * Caspase活性是根据制造商的指导使用Caspase 3/7活性试剂盒（AAT Bioquest，Sunnyvale，CA）确定的。资料来源：Graph from Endocytosis of Albumin by Podocytes Elicits an Inflammatory Response and Induces Apoptotic Cell Death by Kayo Okamura, et al., PLoS ONE, Jan. 2013.

Cell Meter 荧光法吞噬检测试剂盒 红色荧光

简要概述

        Cell Meter 荧光法吞噬检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的吞噬检测试剂盒，吞噬作用定义为细胞对质膜内的颗粒的细胞摄取。通过吞噬和破坏入侵的微生物，吞噬作用的过程对先天免疫反应至关重要。通过清除凋亡小体，维持组织稳态和重塑也需要吞噬作用。吞噬作用的摄取机制取决于颗粒的大小，受体 – 配体相互作用和细胞骨架的参与。一旦内化，吞噬体与溶酶体融合形成用于消化的 吞噬溶酶体，导致pH逐渐降低。我们的Cell Meter 荧光吞噬测定试剂盒使用独特的pH依赖性Protonex 600红色乳胶珠结合物。与大多数现有荧光染料不同，Protonex 600红乳胶珠缀合物在细胞外是非荧光的。然而，当它们在酸性吞噬体/吞噬溶酶体内时，其荧光显着增加。这种特性使其易于使用而无需台盼蓝淬灭步骤和用于研究吞噬作用及其规定的强大工具。 Cell Meter 荧光吞噬测定试剂盒还包括绿色荧光细胞活力染料，可通过荧光显微镜同时检测活细胞和吞噬作用过程。该测定还可以适用于荧光微量板读数器和流式细胞术检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法吞噬检测试剂盒。 

产品说明书

操作步骤

1.将Cytochalasin D作为阳性对照或DMSO或您的测试化合物添加到每个孔中。 注意：测定中使用的细胞松弛素D的浓度应针对每个单独的细胞系进行优化。

2.将板在细胞培养箱中孵育30分钟。

3.每孔加入12.5μLProtonex 600 Red-Latex Beads Conjugate溶液（12X）。

4.将板在细胞培养箱中孵育4小时。 注意：每个细胞系的用户应优化孵育时间。

5.每孔加入12.5μLCytoTrace Green工作溶液（12X）。

6.将板在细胞培养箱中孵育30分钟。

7.用1X PBS洗涤板两次。

8.用德克萨斯红过滤器（Ex / Em = 570 / 600nm）和具有FITC过滤器的CytoTrace Green（Ex / Em = 490 / 525nm）观察细胞内的吞噬作用。

数据分析

图示：使用Cell Meter 荧光吞噬作用测定试剂盒（Cat＃21225）检测RAW 264.7细胞中的吞噬作用。 将RAW 264.7细胞与（B）或不用（A）细胞松弛素D孵育30分钟，然后加入Protonex 600 Red-Latex Beads在生长培养基中并孵育4小时，然后加入Cell Tracker并孵育30分钟。 使用Keyence荧光显微镜拍摄图像。