Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 货号15261-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光

Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光

Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光    货号15261 货号 15261 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 400 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 585
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite NADH检测试剂盒(荧光法)是美国AAT Bioquest 研发的检测NADH的试剂盒,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP +)是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式,NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP,通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。

传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 传统NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短UV波长使得这些方法具有低灵敏度和高干扰。 由于NAD和NADH的吸收较弱,紫外吸收方法需要较大的样品量,如果样品的可用性有限,则使相同的NAD和NADH测量不实用。

Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光    货号15261

这种Amplite 荧光NADH检测试剂盒为检测NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶在酶循环反应中特异性识别NADH。 此外,该测定具有非常低的背景,因为其在红色可见范围内运行,这显著降低了生物样品的干扰。 Amplite 荧光NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析,可在100μL分析体积(1μM)内检测少至100皮摩尔的NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite NADH检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备NADH反应混合物(50μL)

加入NADH标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育15分钟 –  2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度

 

1.准备NADH储备溶液:
将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品(组分C)的小瓶中以制备1mM(1nmol / L)NADH储备溶液。
注意:未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备NADH反应混合物:
将10mL Amplite NADH测定缓冲液(组分B)加入NADH再循环酶混合物(组分A)的瓶中,并充分混合。
注意:这种NADH反应混合物足以用于两个96孔或四个384孔板。未使用的NADH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备NADH标准品的系列稀释液(0至100μM):
3.1将50μL的NADH储备溶液(来自步骤1)加入到450μLPBS缓冲液(pH 7.4)中以产生100μM(100pmol / L)NADH标准溶液。
注意:稀释的NADH标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

3.2取200μL的100μMNADH标准溶液进行1:3连续稀释,得到30,1,10,3,1,0.3,0.1和0μM的NADH标准品系列稀释液。

3.3如表1和表2所述,将NADH标准品和含有NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中
注意:根据需要准备细胞或组织样本。

 

表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

BL

BL

TS

TS

NS1

NS1

….

….

NS2

NS2

 

 

NS3

NS3

 

 

NS4

NS4

 

 

NS5

NS5

 

 

NS6

NS6

 

 

NS7

NS7

 

 

注意:NS = NADH标准,BL =空白对照,TS =测试样品

 

表2每个孔的试剂组成

NADH Standard

Blank Control

Test Sample

Serial Dilutions*: 50 μL

PBS: 50 μL

50 μL 

*注意:将连续稀释的NADH标准品(0.1μM至100μM)加入NS1至NS7的孔中,一式两份

 

4.在上清液反应中运行NADH测定:
4.1将50μL的NADH反应混合物(来自步骤2)加入NADH标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤3.3),使总NADH测定体积为100μL/孔
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时,避光。
4.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加(在Ex / Em = 540 / 590nm处最佳)。
注1:也可将板的内容物转移到白色透明底板上,用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。
注2:对于基于细胞的NADH测量,建议使用ReadiUse 哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *(cat#20012)裂解细胞。

 

数据分析

        空白孔中的荧光(仅用PBS缓冲液)用作对照,并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。
        注意:荧光背景随时间增加,因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光    货号15261

图1.使用NOVOStar酶标仪(BMG Labtech)在96孔黑色板中用Amplite NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时(n = 3)时,可以检测到低至1μM(100pmol /孔)的NADH,而NAD没有响应。

 

参考文献

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说明书
Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光.pdf