标签归档：nad

辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒,索莱宝,BC0310-50管/24样

发表于由

上海金畔生物科技有限公司提供辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒,索莱宝,BC0310-50管/24样，可以访问官网了解更多产品信息。
辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒,索莱宝,BC0310-50管/24样

询价
索莱宝

·  英文名称 : CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit

·  别名 : 辅酶ⅠNAD(H)含量测定试剂盒 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒,辅酶含量测定盒

·  检测方法 : 可见分光光度法

 

测定意义：辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理：分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

浓度
规格 50管/24样
保存

NAD激酶（NADK）检测试剂盒,索莱宝,BC1030-50管/48样

发表于由

上海金畔生物科技有限公司提供NAD激酶（NADK）检测试剂盒,索莱宝,BC1030-50管/48样，可以访问官网了解更多产品信息。
NAD激酶（NADK）检测试剂盒,索莱宝,BC1030-50管/48样

询价
索莱宝
  • 英文名称 : NAD Kinase (NADK) Assay Kit
  • 别名 : NAD激酶试剂盒 NADK Kit NAD激酶（NADK）试剂盒 NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒
  • 检测方法 : 可见分光光度法

    • 浓度
    规格 50管/48样
    保存

    NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒,索莱宝,BC1040-50管/48样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒,索莱宝,BC1040-50管/48样，可以访问官网了解更多产品信息。
    NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒,索莱宝,BC1040-50管/48样

    询价
    索莱宝

    ·  英文名称 : NAD-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit

    ·  别名 : NAD-苹果酸脱氢酶试剂盒 NAD-MDH Kit NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）试剂盒 NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒

    ·  检测方法 : 紫外分光光度法

     

    测定意义：MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH 是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸–天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD-依赖的MDH 和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
    测定原理：NAD-MDH 催化NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm 处光吸收下降。
    需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。

    浓度
    规格 50管/48样
    保存

    NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒,索莱宝,BC1130-50管/48样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒,索莱宝,BC1130-50管/48样，可以访问官网了解更多产品信息。
    NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒,索莱宝,BC1130-50管/48样

    询价
    索莱宝
  • 英文名称 : NAD Malic Enzyme(NAD-ME) Assay Kit
  • 别名 : NAD-苹果酸酶试剂盒 NAD-ME Kit NAD-苹果酸酶（NAD-ME）试剂盒 肌酸激酶测试盒
  • 检测方法 : 紫外分光光度法

    • 浓度
    规格 50管/48样
    保存

    辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC0315-100管/48样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC0315-100管/48样，可以访问官网了解更多产品信息。
    辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC0315-100管/48样

    询价
    索莱宝

    ·  英文名称 : Micro NAD(H) Kit

    ·  别名 : 辅酶Ⅰ含量测定试剂盒 NAD(H) Kit 辅酶ⅠNAD(H)含量测定试剂盒 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒

    ·  检测方法 : 微量法

     

    测定意义：辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD是糖酵解和TCA循环的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态，NADH/NAD比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD降解产物具有非常重要的调控作用。

    测定原理：NAD和NADH在254 nm下有吸收峰，利用高效液相色谱法在相应波长下测定其含量。

    需要的仪器、耗材: 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各2个，0.45μm）、C18柱（4.6 ×150 mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、乙腈（120 mL）、甲醇（色谱级，300 mL）、蒸馏水

    浓度
    规格 100管/48样
    保存

    NAD激酶（NADK）测检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1035-100管/96样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供NAD激酶（NADK）测检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1035-100管/96样，可以访问官网了解更多产品信息。
    NAD激酶（NADK）测检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1035-100管/96样

    询价
    索莱宝

    ·  英文名称 : Micro NAD Kinase (NADK) Assay Kit

    ·  别名 : NAD激酶试剂盒 NADK Kit NAD激酶（NADK）试剂盒 NAD激酶（NADK）测试盒

    ·  检测方法 : 微量法

     

    测定原理：

    NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；NADPH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过在600 nm下测定MTT的还原速度（吸光值的变化）可反映出NADK活性的大小。

    需要的仪器，耗材:

    可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

    测定意义：

    NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内惟一能够催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶，可催化NAD(H)以ATP或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成NADP(H)。因此，NAD激酶在合成NADP(H)以及调节NAD(H)与NADP(H)的平衡上具有重要作用。测定原理：NADK催化NAD+磷酸化，生成NADP+；NADP+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH；NADPH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过在600 nm下测定MTT的还原速度（吸光值的变化）可反映出NADK活性的大小。需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

    浓度
    规格 100管/96样
    保存

    NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1045-100管/96样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1045-100管/96样，可以访问官网了解更多产品信息。
    NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1045-100管/96样

    询价
    索莱宝

    ·  英文名称 : Micro NAD-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit

    ·  别名 : NAD-苹果酸脱氢酶试剂盒 NAD-MDH Kit NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）试剂盒 NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）测试盒

    ·  检测方法 : 微量法

     

    测定意义：MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸–天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
    测定原理：NAD-MDH催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
    需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

    浓度
    规格 100管/96样
    保存

    NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1135- 100管/96样

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1135- 100管/96样，可以访问官网了解更多产品信息。
    NAD-苹果酸酶（NAD-ME）检测试剂盒 微量法,索莱宝,BC1135- 100管/96样

    询价
    索莱宝

    ·  英文名称 : Micro NAD Malic Enzyme(NAD-ME) Assay Kit

    ·  别名 : NAD-苹果酸酶试剂盒 NAD-ME Kit NAD-苹果酸酶（NAD-ME）试剂盒 NAD-苹果酸酶（NAD-ME）测试盒

    ·  检测方法 : 微量法

     

    测定意义：ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

    测定原理：NAD-ME催化NAD+还原成NADH，在340nm下测定NADH增加速率。

    需要的仪器，耗材:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

    浓度
    规格 100管/96样
    保存

    氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-1g CAS : 53-84-9

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-1g CAS : 53-84-9，可以访问官网了解更多产品信息。
    氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-1g CAS : 53-84-9

    询价
    索莱宝

    ·  别名 : β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；二磷酸吡啶核苷酸；Diphosphopyridine nucleotide； CoenzymeⅠ；CoⅠ；NAD； NAD+ ；

    ·  英文名称 : NAD

    ·  CAS : 53-84-9

    ·  分子式 : C21H27N7O14P2

    ·  分子量 : 663.43

    ·  储存条件 : -20℃

    ·  外观（性状） : 白色冻干粉

    ·  单位 : 支

     

    说明：生化研究；药物研究，临床诊断；有机合成。

     50mg/ml 水完全溶解 

    浓度
    规格 1g
    保存 -20℃

    氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-250mg CAS : 53-84-9

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司提供氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-250mg CAS : 53-84-9，可以访问官网了解更多产品信息。
    氧化型辅酶Ⅰ，NAD,索莱宝,N8110-250mg CAS : 53-84-9

    询价
    索莱宝

    ·  别名 : β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；二磷酸吡啶核苷酸；Diphosphopyridine nucleotide； CoenzymeⅠ；CoⅠ；NAD； NAD+ ；

    ·  英文名称 : NAD

    ·  CAS : 53-84-9

    ·  分子式 : C21H27N7O14P2

    ·  分子量 : 663.43

    ·  储存条件 : -20℃

    ·  外观（性状） : 白色冻干粉

    ·  单位 : 支

     

    说明：生化研究；药物研究，临床诊断；有机合成。

     50mg/ml 水完全溶解 

    浓度
    规格 250mg
    保存 -20℃

    Amplite NAD检测试剂盒 荧光法蓝色荧光 货号15280-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    • 产品参数
    • 产品详情

    Amplite NAD检测试剂盒 荧光法蓝色荧光 货号15280
    级别 :
    超纯、高纯
    含量 :
    95%
    产品规格 :
    200 Tests
    品牌 :
    aat bioquest
    用途范围 :
    AAT Bioquest生产的荧光染料
    特色服务 :
    包邮

    产品详情

    Product details

    Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光

    Amplite NAD检测试剂盒 荧光法蓝色荧光 货号15280

    货号 15280 存储条件 f/l
    规格 200 Tests
    Ex (nm) 422 Em (nm) 466
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NAD的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其氧化形式（NAD）是活细胞中发现的许多酶反应的必需辅助因子。 量化这些因子的产生或消耗是监测酶介导的反应或筛选这些酶反应的调节剂或底物的重要方法。 市场上有几种用于量化NADH或总NAD / NADH量的试剂盒，但是迄今为止在大量过量NADH存在下检测NAD是非常具有挑战性的，因为NAD在259 nm处具有其吸收峰且不发荧光， 使测量不实用。

            Amplite 荧光NAD分析试剂盒可便捷，快速地检测NAD。 该试剂盒使用我们新开发的NAD传感器Quest Fluor NAD试剂直接测量NAD。 该试剂盒中使用的专有探针仅与NAD反应产生在Ex / Em = 420 / 480nm处荧光的产物，并且对NADH几乎没有响应。 该试剂盒可在100μL测定体积中检测少至30 nM的NAD，并在过量的NADH存在下监测0.3％的NAD产生。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且可以用于高通量筛选。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的NAD检测试剂盒。 

    产品说明书

    96孔板检测示例

     

    概述

    准备NAD标准品或测试样品（50μL）

    添加20μLQuestFluor NAD探针添加20μL

    测定溶液在室温下孵育10-20分钟

    添加15μL增强剂溶液

    在室温下孵育10-20分钟

    监测420/480 nm的荧光 

    注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分。

     

    操作步骤

    1.准备NAD库存解决方案：

    将500μlddH2 O加入到NAD标准品（组分D）的小瓶中以制备1mM NAD储备溶液。

    注意：未使用的NAD储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

     

    2.准备NAD标准品的系列稀释液（0至10μM）：

    2.1将10μLNAD储备溶液（来自步骤1）加入990L H2O或PBS缓冲液中以产生10M NAD标准溶液。

    注意：稀释的NAD标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    2.2取200μL10μMNAD标准溶液，在H2O或PBS中进行1：3连续稀释，得到NAD标准品的10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

    2.3如表1所述，将50μL系列稀释的NAD标准品和含有NAD的测试样品加入黑色/固体底96孔微孔板中：

     

    表1在黑色/固体底96孔微孔板中的NAD标准品和测试样品的布局

    BL

    BL

    TS

    TS

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    NS2

    NS2

    NS3

    NS3

    NS4

    NS4

    NS5

    NS5

    NS6

    NS6

    NS7

    NS7

    注1：NS = NAD标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

    注2：将连续稀释的NAD标准品从10μM加到0.01μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。

     

    3.运行NAD测定：

     

    3.1将20μLQuestFluor NAD探针（组分A）溶液加入NAD标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

    3.2将20μL测定溶液（组分B）加入每个孔中，充分混合。

    注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NAD Probe和10μLAssaySolution。

    3.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

    3.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分C），使总NAD测定体积为105μL/孔，并在室温下孵育10-20分钟，避光。

    注意：对于384孔板，添加7.5 uL增强剂。

    3.5使用荧光板读数器在420/480 nm处检测荧光增加。

     

    数据分析

            空白孔中的荧光（仅用H 2 O或PBS缓冲液）用作对照，并从具有NAD反应的那些孔的值中减去。 NAD标准曲线如图1所示。

    Amplite NAD检测试剂盒 荧光法蓝色荧光 货号15280

    图1.使用Germini酶标仪（Molecular devices），在96孔黑色/固体底板中用Amplite ™荧光NAD测定试剂盒测量NAD剂量反应。 A：NAD标准曲线，在孵育20分钟时可检测到低至30nM的NAD（n = 3）。 B：NAD和NADH响应的比较C：在溶液中存在100μMNADH的NAD标准曲线。 从孵育20分钟（n = 3）可以检测到从NADH转化的低至0.3％的NAD（~300nM）。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    • 产品参数
    • 产品详情

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275
    级别 :
    超纯、高纯
    含量 :
    95%
    产品规格 :
    400 Tests
    品牌 :
    aat bioquest
    用途范围 :
    AAT Bioquest生产的荧光染料
    特色服务 :
    包邮

    产品详情

    Product details

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

    货号 15275 存储条件 f/l
    规格                       400 Tests                          
    Ex (nm) 460                             Em (nm)
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Amplite 总NAD和NADH检测试剂盒 （比色法）增强灵敏度是美国AAT Bioquest研发的检测总NAD和NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色总NAD / NADH检测试剂盒为检测总NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH。无需从样品混合物中纯化NAD / NADH。酶循环反应显着提高了检测灵敏度。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的 吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite™比色法总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至0.1μM的总NAD / NADH。与试剂盒＃15258相比，该试剂盒具有更高的灵敏度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的总NAD和NADP检测试剂盒。

    产品说明书

    96孔板检测示例

    概述

    准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

    加入NADH标准品或测试样品（50μL）

    在室温下孵育15分钟至2小时

    监测460 nm处的吸光度

    注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

     

    操作步骤

    1.准备NADH储备溶液：

    将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

    注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

     

    2.准备NAD / NADH反应混合物：

    2.1将8 mL NADH探针缓冲液（组分B-II）加入到NAD / NADH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

    2.2将2 mL NADH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

    注意：这种NAD / NADH反应混合物足以进行200次分析。未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

    3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

    3.1将10μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

    注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    3.2取200μL10M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 M系列稀释的NADH标准品。

    3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

    注意：根据需要准备细胞或组织样本。

    表1：白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

    B L                

    BL               

    TS

    TS

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    NS2

    NS2

    NS3

    NS3

    NS4

    NS4

    NS5

    NS5

    NS6

    NS6

    NS7

    NS7

    注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

    表2：每个孔的试剂组成

    NADH Standard

    Blank Control

    Test Sample

    Serial Dilutions*: 50 μL

    PBS: 50 μL

    50 μL 

    *注意：将连续稀释的NADH标准品（0.078μM至5μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM， 终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

    4.在上清液反应中运行NADH测定：

    4.1将50μLNAD/ NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NAD / NADH测定体积为100μL/孔

    注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

    注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。

    4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

    4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

     

    数据分析

            空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒比色法增强灵敏度 货号15275

    图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

    A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

    B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

    附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

    1.植物细胞样品：

    用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

    2.细菌样品：

    离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

    3.哺乳动物细胞样本：

    从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

    4.组织样品：

    称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

     

    Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    • 产品参数
    • 产品详情

    Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273
    级别 :
    超纯、高纯
    含量 :
    95%
    产品规格 :
    250 Tests
    品牌 :
    aat bioquest
    用途范围 :
    AAT Bioquest生产的荧光染料
    特色服务 :
    包邮

    产品详情

    Product details

    Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法)

    Amplite NAD NADH比率检测试剂盒比色法货号15273

    货号 15273 存储条件 F/L
    规格 250 Tests 价格 4488
    Ex (nm) 460 Em (nm)
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（比色法）是美国AAT Bioquest研发的检测NAD/NADH的试剂盒，。 NAD形成NADP，。 NADH（NADPH）是NAD（NADP）的还原形式，NAD（NADP）是NADH（NADPH）的氧化形式。 NAD或NADP在氧化还原反应中起辅助因子的作用，在细胞反应中转移电子。 氧化形式和还原形式之间的平衡是NAD / NADH（NADP / NADPH）比率。 该比率是指示细胞氧化还原状态的重要组分，并且它是反映代谢活性和细胞健康的测量。 在健康的哺乳动物组织中，游离NAD +和NADH之间的比率的估计可以高达700.相反，NADP / NADPH比率通常为约0.005，因此NADPH是该辅酶的主要形式。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    • 产品参数
    • 产品详情

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258
    级别 :
    超纯、高纯
    含量 :
    95%
    产品规格 :
    400 Tests
    品牌 :
    aat bioquest
    用途范围 :
    AAT Bioquest生产的荧光染料
    特色服务 :
    包邮

    产品详情

    Product details

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

    货号                   15258                       存储条件                   f/l                  
    规格 400 Tests
    Ex (nm) 575 Em (nm)
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将基团添加到腺苷核苷酸的2'位置。 NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

            传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。 

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

    Amplite™比色NAD / NADH检测试剂盒提供灵敏的一步法检测，可在100μL检测体积（300 nM;图1）中检测少至30皮摩尔的NAD（H）。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可通过吸光度酶标仪在~575nm或~570nm至~605nm的吸光度比下轻松读取，以提高测定灵敏度。

    产品说明书

    96孔板测定示例

     

    概述

    准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

    添加NADH标准品或测试样品（50μL）

    在室温下孵育15分钟–2小时

    监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

    操作方法

    1.准备NADH储备溶液：

    将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

    注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

    2.准备NAD / NADH反应混合物：

    将10mL NAD / NADH传感器缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

    注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

    3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

    3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

    注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    3.2取200μL10μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

    3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

    注意：根据需要准备细胞或组织样本。

    表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

    BL                  

    BL                     

    TS                   

    TS                       

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    NS2

    NS2

    NS3

    NS3

    NS4

    NS4

    NS5

    NS5

    NS6

    NS6

    NS7

    NS7

    注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

    表2.每个孔的试剂组成

    NADH Standard

    Blank Control

    Test Sample

    Serial Dilutions*: 50 μL

    PBS: 50 μL

    50 μL 

    注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，浓度）可能由于NADH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

    4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

    4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

    注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

    4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

    4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

    注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

    注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

    注意3：对于基于细胞的NAD / NADH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（目录号20012）裂解细胞。

     

    数据分析

            空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

    注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 货号15258

    图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在固体黑色96孔板中用Amplite™总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。


    Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15263-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    • 产品参数
    • 产品详情

    Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15263
    级别 :
    超纯、高纯
    含量 :
    95%
    产品规格 :
    250 Tests
    品牌 :
    aat bioquest
    用途范围 :
    AAT Bioquest生产的荧光染料
    特色服务 :
    包邮

    产品详情

    Product details

    Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

    货号 15263                          存储条件 f/l                   
    规格                       250 Tests                        
    Ex (nm) 571 Em (nm) 585
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

            Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是美国AAT Bioquest研发的检测NAD/NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和NADP +是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。  在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。 通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。 传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来完成。 该方法具有低灵敏度和高干扰，因为该测定在需要昂贵的石英微孔板的UV范围内进行。

            这种Amplite 荧光NAD / NADH比率分析试剂盒为敏感检测NAD，NADH及其比例提供了一种便捷的方法。 系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。 此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了来自生物样品的干扰。 无需从样品混合物中纯化NAD / NADH。 可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行测定。 其信号可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（ Ex / Em = 540/590nm）或吸光度酶标仪在~576nm处容易地读取。 该试剂盒提供NAD和NADH提取缓冲液，以及细胞裂解缓冲液，方便您使用。 它经常用于从细胞裂解物中测定NAD / NADH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的NAD/NADH检测试剂盒。 

    产品说明书

    96孔板测定示例

    概述

    准备25μLNADH标准品和/或测试样品

    添加25μLNADH或NAD提取溶液

    在室温下孵育15分钟

    加入25μLNAD或NADH萃取溶液

    加入75μLNAD/ NADH反应混合物

    在室温下孵育15分钟至2小时

    监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

    注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

    操作方法

    1.准备NADH储备溶液：

    将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

    注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

     

    2.准备NAD / NADH反应混合物：

    将10mL NADH传感器缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

    注意：这种NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

     

    3.准备连续稀释的NADH标准品（0至10μM）：

    3.1将30μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入970μLPBS缓冲液（pH7.4）中，得到30μM（30pmol / L）NADH标准溶液。

    注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    3.2取200μL30M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：3连续稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03和0 M系列稀释的NADH标准品。

    3.3如表1和2中所述，将连续稀释的NADH标准品和/或含NAD / NADH的测试样品添加到固体黑色96孔微量培养板中。

    注意：根据需要准备细胞或组织样本。

    表1.实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

    BL

    BL

    TS

    TS

    TS (NADH)

    TS (NADH)

    TS (NAD)

    TS (NAD)

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    ….

    ….

    ….

    ….

    NS2

    NS2

    NS3

    NS3

    NS4           

    NS4             

    NS5

    NS5

    NS6

    NS6

    NS7

    NS7

    注意：NS = NAD / NADH标准; BL =空白对照; TS =测试样品; TS（NADH）=用NADH萃取溶液处理10至15分钟的测试样品，然后用NAD萃取溶液中和; TS（NAD）=用NAD提取溶液处理10至15分钟的测试样品，然后用NADH提取溶液中和。

    表2每个孔的试剂组成

    NADH Standard

    Blank Control

    Test Sample (NAD/NADH)

    Test Sample

    (NADH Extract)

    Test Sample

    (NAD Extract)

    Serial Dilutions*: 25 μL

    PBS: 25 μL

    Test Sample: 25 μL

    Test Sample: 25 μL

    Test Sample: 25 μL

    Component F:

    25 μL

    Component F: 25 μL

    Component F: 25 μL

    Component D: 25 μL

    Component E: 25 μL

    Incubate at room temperature for 10 to 15 minutes

    Component F: 25 μL

    Component F: 25 μL

    Component F: 25 μL

    Component E: 25 μL

    Component D: 25 μL

    Total: 75 μL

    Total: 75 μL

    Total: 75 μL

    Total: 75 μL

    Total: 75 μL

    *注意：将连续稀释的NADH标准品从0.03μM至30μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>300μM，终浓度）可能由于NADH传感器（非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

    3.4对于NADH提取（NADH）：将25μLNADH提取溶液（组分D）加入含有NAD / NADH的测试样品的孔中。 在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μLNAD提取溶液（组分E）以中和NADH提取物，如表1和2中所述。

    对于NAD提取（NAD）：将25μLNAD提取溶液（组分E）加入含有NAD / NADH的测试样品的孔中。 在室温下孵育10至15分钟，然后加入25μLNADH提取溶液（组分D）以中和NAD提取物，如表1和2中所述。

    对于总NAD和NADH：将25μLNAD/ NADH对照溶液（组分F）加入NADH标准品和含有NAD / NADH的测试样品的孔中。 在室温下孵育10至15分钟，然后如表1和2中所述添加25μL对照溶液（组分F）。

    注意1：根据需要准备细胞或组织样本。 NAD / NADH裂解缓冲液（组分G）可用于裂解细胞（详见附录）。

    注意2：在健康的哺乳动物细胞中，与NADH相比，NAD更多，因此可以简单地使用总NAD和NADH减去NAD来计算NADH的量。

     

    4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

    4.1将75μLNADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.4）的每个孔中，使得总NADH测定体积为150μL/孔。

    4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

    4.3用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值570nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

    注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

    数据分析

            空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 典型数据如图1所示（总NAD和NADH与NAD或NADH提取物）。

    Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒荧光法 红色荧光 货号15263

    图1.使用Gemini酶标仪（Molecular Devices），在96孔黑色板中用Amplite™NAD / NADH比率测定试剂盒测量总NADH和NAD及其提取物剂量响应。 用或不用NADH或NAD提取溶液处理25μL等量的NAD和NADH 15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在加入75μLNADH反应混合物后30分钟，在Ex / Em = 540 / 590nm（在570nm处截止）获得信号。 从具有NADH反应的那些孔的值中减去空白信号。 （注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的）。

    附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

    1.植物细胞样品：

    用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

    2.细菌样品：

    离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

    3.哺乳动物细胞样本：

    从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

    4.组织样品：

    称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15257-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15257 货号 15257 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
    规格 400 Tests 价格 3924
    Ex (nm) 571 Em (nm) 585
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是AAT Bioquest研发的检测NAD+/NADH的试剂盒。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。 在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。

    传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定通过监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化来进行。 Amplite™荧光总NAD和NADH检测试剂盒为敏感检测NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH，其显着提高了检测灵敏度。此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显着降低了生物样品引起的干扰。该测定已证明在Ex / Em = 540 / 590nm处具有高灵敏度和低干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NAD+/NADH检测试剂盒。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15257

    Amplite™荧光总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（100nM;图1）中检测少至10皮摩尔的NAD（H）。 该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且容易适应自动化而无需分离步骤。 其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最大Ex / Em = 540 / 590nm）或吸光度酶标仪在~576nm处容易地读取。

    产品说明书

    96孔板测定示例

     

    概述

    准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

    添加NADH标准品或测试样品（50μL）

    在室温下孵育15分钟–2小时

    监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

     

    操作方法

    1.准备NADH储备溶液：

    将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中，得到1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

    注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

    2.准备NAD / NADH反应混合物：

    将10mL NAD / NADH传感器缓冲液（组分B）加入NAD / NADH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

    注意：NAD / NADH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

    3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

    3.1将10μL的NADH储备溶液（来自步骤1）加入到990L PBS缓冲液（pH 7.4）中，以产生10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

    注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    3.2取200μL10μMNADH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释液。

    3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

    注意：根据需要准备细胞或组织样本。

     

    表1实心黑色96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

    BL

    BL

    TS

    TS

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    NS2

    NS2

     

     

    NS3

    NS3

     

     

    NS4

    NS4

     

     

    NS5

    NS5

     

     

    NS6

    NS6

     

     

    NS7

    NS7

     

    		  

    注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

     

    表2.每个孔的试剂组成

    NADH Standard

    Blank Control

    Test Sample

    Serial Dilutions*: 50 μL

    PBS: 50 μL

    50 μL 

    注意：将连续稀释的NADH标准品（0.01μM至10μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。

     

    4.在上清液反应中运行NAD / NADH测定：

    4.1将50μL的NADH反应混合物（来自步骤2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品（来自步骤3.3）的每个孔中，使得总NADH测定体积为100μL/孔。

    注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

    4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

    4.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

    注1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

    注意2：对于NAD / NADH比率测量，建议使用试剂盒15263。

    注意3：对于基于细胞的NAD / NADH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（目录号20012）裂解细胞。

     

    数据分析

     

            空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

    注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 货号15257

    图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在固体黑色96孔板中用Amplite TM总NAD和NADH测定试剂盒测量NADH剂量反应。 在孵育1小时（n = 3）时可以检测到低至100nM（10pmol /孔）的NADH，而NADPH没有响应。

     

    试剂应用文献

    Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase

    Authors: Ling, Min and Huang, Peixin and Islam, Shamima and Heruth, Daniel P and Li, Xuanan and Zhang, Li Qin and Li, Ding-You and Hu, Zhaohui and Ye, Shui Qing
    Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

     

    参考文献

    Enhanced 1, 3-propanediol production in Klebsiella pneumoniae by a combined strategy of strengthening the TCA cycle and weakening the glucose effect
    Authors: Xinyao Lu, Shunli Ren, Jingzheng Lu, Hong Zong, Jian Song, Bin Zhuge
    Journal: Journal of applied microbiology (2018)

    Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
    Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
    Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

    Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
    Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
    Journal: Fermentation (2017): 61

    Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
    Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
    Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

    MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
    Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
    Journal: Oncogene (2017)

    Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
    Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
    Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

    Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
    Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
    Journal: Biochemistry (2017)

    Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
    Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
    Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

    A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
    Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
    Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

    AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
    Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
    Journal: Aging cell (2016): 416–427

     

    相关产品

    产品名称 货号
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) Cat#15258
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15257
    Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15261

    说明书
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光.pdf

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275-AAT Bioquest荧光染料

    发表于由

    上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275 货号 15275 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
    规格 400 Tests 价格 3924
    Ex (nm) 460 Em (nm)
    分子量 溶剂
    产品详细介绍

    简要概述

    Amplite 总NAD和NADH检测试剂盒 （比色法）增强灵敏度是美国AAT Bioquest研发的检测总NAD和NADH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色总NAD / NADH检测试剂盒为检测总NAD和NADH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NAD / NADH。无需从样品混合物中纯化NAD / NADH。酶循环反应显着提高了检测灵敏度。 NADH探针是一种生色传感器，在NADH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADH探针的吸收与溶液中NADH的浓度成正比。 Amplite™比色法总NAD和NADH分析试剂盒提供灵敏的分析，可在100μL分析体积中检测低至0.1μM的总NAD / NADH。与试剂盒＃15258相比，该试剂盒具有更高的灵敏度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的总NAD和NADP检测试剂盒。

     

    适用仪器

    光吸收酶标仪  
    吸收： 460nm
    推荐孔板： 透明底板

    产品说明书

    96孔板检测示例

    概述

    准备NAD / NADH反应混合物（50μL）

    加入NADH标准品或测试样品（50μL）

    在室温下孵育15分钟至2小时

    监测460 nm处的吸光度

    注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

     

    操作步骤

    1.准备NADH储备溶液：

    将200μLPBS缓冲液加入到NADH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADH储备溶液。

    注意：未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

     

    2.准备NAD / NADH反应混合物：

    2.1将8 mL NADH探针缓冲液（组分B-II）加入到NAD / NADH回收酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。

    2.2将2 mL NADH探针（组分B-I）加入上述瓶中（来自步骤2.1）并充分混合。

    注意：这种NAD / NADH反应混合物足以进行200次分析。未使用的NAD / NADH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。

     

    3.准备NADH标准品的系列稀释液（0至10μM）：

    3.1将10μL1mMNADH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液（pH7.4）中，得到10μM（10pmol / L）NADH标准溶液。

    注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

    3.2取200μL10M NADH标准溶液（来自步骤3.1）进行1：2连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 M系列稀释的NADH标准品。

    3.3如表1和2中所述，将含有NADH标准品和含NAD / NADH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。

    注意：根据需要准备细胞或组织样本。

     

    表1：白色/透明底96孔微孔板中NADH标准品和测试样品的布局

    BL

    BL

    TS

    TS

    NS1

    NS1

    ….

    ….

    NS2

    NS2

     

     

    NS3

    NS3

     

     

    NS4

    NS4

     

     

    NS5

    NS5

     

     

    NS6

    NS6

     

     

    NS7

    NS7

     

    		  

    注意：NS = NADH标准，BL =空白对照，TS =测试样品

     

    表2：每个孔的试剂组成

    NADH Standard

    Blank Control

    Test Sample

    Serial Dilutions*: 50 μL

    PBS: 50 μL

    50 μL 

    *注意：将连续稀释的NADH标准品（0.078μM至5μM）加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADH（例如，>100μM，最终浓度）将导致饱和信号并使校准曲线非线性。

     

    4.在上清液反应中运行NADH测定：

    4.1将50μLNAD/ NADH反应混合物（来自步骤2.2）加入NADH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NAD / NADH测定体积为100μL/孔

    注意1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADH反应混合物。

    注意2：根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见，裂解缓冲液（组分D）可用于裂解细胞。

    4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。

    4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。

     

    数据分析

            空白孔中的吸光度（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从具有NADH反应的那些孔的值中减去。 NADH标准曲线如图1所示。

    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度 货号15275

    图1. Amplite™比色NADP / NADPH比率分析试剂盒用于使用SpectraMax酶标仪（Molecular devices）测量白色/透明96孔微量培养板中的总NADP / NADPH量和NADP / NADPH比率。

    A-总NADPH和NADP剂量反应：孵育1小时可检测到低至0.03μM的总NADPH。

    B-NADP / NADPH比例：用或不用NADP提取溶液处理等量的NADP和NADPH混合物15分钟，然后在室温下用提取溶液中和。 在460nm读取信号。 NADP / NADPH摩尔比基于图1B中所示的吸光度计算。

     

    附录：使用组分G（NAD / NADH裂解缓冲液）的测试样品制剂

    1.植物细胞样品：

    用裂解缓冲液以200mg / mL均化，并以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测试。

     

    2.细菌样品：

    离心收集细菌细胞（（10,000 g，0°C，15 min）。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液，将处理后的溶液在室温下保持15分钟。以2500 rpm离心5分钟， 用上清液进行试验。

     

    3.哺乳动物细胞样本：

    从平板孔中取出培养基，每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液（或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔），并将处理过的溶液在室温下保持15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟，使用上清液进行测试。

     

    4.组织样品：

    称取约20mg组织，用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟，使用上清液进行测定。

     

    参考文献

    Functional definition of NrtR, a remnant regulator of NAD+ homeostasis in the zoonotic pathogen Streptococcus suis
    Authors: Qingjing Wang, Bachar H Hassan, Ningjie Lou, Justin Merritt, Youjun Feng
    Journal: The FASEB Journal (2019): fj–201802179RR

    Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
    Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
    Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

    Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
    Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
    Journal: Fermentation (2017): 61

    Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
    Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
    Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

    MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
    Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
    Journal: Oncogene (2017)

    Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
    Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
    Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

    Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
    Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
    Journal: Biochemistry (2017)

    Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
    Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
    Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

    A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
    Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
    Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

    AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
    Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
    Journal: Aging cell (2016): 416–427

     

    相关产品

    产品名称 货号
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) Cat#15258
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15257
    Amplite NADH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光 Cat#15261

    说明书
    Amplite NAD+/NADH检测试剂盒（比色法）增强灵敏度.pdf