Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒(适用于流式细胞仪，激发光：405nm)

	货号	22809	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	415	Em (nm)	499
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

产品说明书

实验方案

简要概述

用5×10⁵到1×10⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

在37℃孵育20至30分钟

在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度（Pacific Orange滤光片组）

 

溶液配制

储备溶液配制

ThiolTrace Violet 500储备液（500X）：
在ThiolTrace Violet 500 的小瓶中加入200 µL DMSO（组分C）。注意：分装并在-20℃储存未使用的ThiolTrace Violet 500，避免反复冷冻/解冻循环。

 

工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将2 µL ThiolTrace Violet 500储备溶液添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）或您自备的缓冲液中，并充分混合。注意：ThiolTrace Violet 500 工作溶液可以在含有血清的细胞培养基中制备。

 

操作步骤

1. 对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，在使用ThiolTrace Violet 500工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。 注意：最佳孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。
2. 将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL缓冲液（可选）洗涤细胞。
3. 将细胞重悬于1 mL ThiolTrace Violet 500工作溶液中，并在37℃的培养箱中孵育20至30分钟。
4. 使用Pacific Orange滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪检测荧光强度。

 

图示

图1.在HL-60细胞中加入喜树碱后，ThiolTrace Violet 500的荧光强度降低。 将HL-60细胞在37℃，5％CO₂培养箱中在无（红线）或20μM喜树碱（绿线）下处理6小时，然后用ThiolTrace Violet 500染色20分钟。 使用带有Pacific Orange通道的ACEA NovoCyte 3000流式细胞仪测量荧光强度。

 

参考文献

Cell-based assay using glutathione-depleted HepaRG and HepG2 human liver cells for predicting drug-induced liver injury
Authors: Xu, J., Oda, S., Yokoi, T.
Journal: Toxicol In Vitro (2018): 286-301

 

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Cell Meter 细胞内谷胱甘肽检测试剂盒（适用于流式细胞仪）	22809	499
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活性氧 Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒

	货号	16055	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	576	Em (nm)	598
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体检测的试剂盒，细胞内羟基自由基的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响至关重要。羟基（HO·）是与其他分子高度反应的活性氧（ROS）之一，以实现稳定性。通常，羟基被认为是氧化代谢的有害副产物，其可以在生命系统中引起分子损伤。它显示平均寿命为10-9秒，可以与几乎所有生物分子如核DNA，线粒体DNA，蛋白质和膜脂质发生反应。 AAT Bioquest的Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒经过优化，可用于检测线粒体中的ROS。 MitoROS OH580是活细胞渗透探针，可以快速和选择性地靶向活细胞中的羟基自由基。当它与OH·反应时产生红色荧光，并且可以在Ex / Em = 540 / 590nm处容易地读取。 Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒提供灵敏的荧光探针，可在孵育1小时后检测活细胞中的OH·。该试剂盒可用于荧光酶标仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒。 

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

96孔板分析示例

概述

准备细胞用MitoROS OH580工作溶液

在37ºC孵育细胞60分钟

用测试化合物孵育细胞（诱导OH·）

在Ex / Em = 540/590 nm处检测荧光增加

注意：使用前在室温下解冻所有组件。

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞过夜，10,000至40,000个细胞/孔/90μL用于96孔板或2,500至10,000个细胞/孔/20μL用于384孔板。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，将细胞沉淀悬浮于培养基中，100,000-200,000细胞/孔/90μL，96孔poly-D赖氨酸平板或25,000-50,000细胞/孔/ 对于384孔聚-D赖氨酸板，20μL。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

2.准备MitoROS OH580方案：

2.1Prepare MitoROS OH580储备液（500X）：将50μLDMSO（组分C）加入MitoROS OH580（组分A）的小瓶中，并充分混合。

注意：25μL重组的MitoROS OH580原液足以容纳1个平板。 如果管子密封并且避光，可以将未使用的部分等分并在≤-20℃下储存超过一个月。避免反复冻融循环。

2.2准备MitoROS OH580工作溶液：将25μL500XDMSO重构的MitoROS OH580储备溶液（来自步骤2.1）加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

3.进行羟基自由基测定：

3.1取出培养基，加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS OH580工作溶液（步骤2.2）到细胞板中。将细胞在37ºC孵育1小时。

3.2为了诱导羟基自由基，用37℃的所需缓冲液（如PBS或HHBS）中的文本化合物处理细胞一段所需的时间，避光。

注意1：我们用芬顿反应（10μMCuCl2和100μMH2O2）在37℃处理HeLa细胞1小时，以诱导外源性羟基自由基。详细信息请参见图1。

注意2：我们用生长培养基中的PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯）在37℃下处理RAW 264.7细胞4小时，以刺激内源性羟基自由基。详细信息请参见图2。

3.3用HHBS或DPBS将细胞洗涤2-3次，并向每个孔中加入100μL测定缓冲液（组分B）。

3.4使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号，或使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）下以底部读取模式测量荧光增加。

数据分析

图1.使用MitoROS OH580（Cat＃16055）在HeLa细胞中测量羟基自由基的荧光图像。 将HeLa细胞与MitoROS OH580工作溶液在37℃下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。 芬顿反应：然后将细胞用10μMCuCl2和100μMH2O2在1X HBSS缓冲液中于37℃处理1小时。 对照：将HeLa细胞保持在1X HBSS缓冲液中而不进行处理。 用HHBS洗涤3次后，使用具有TRITC过滤器组（红色）的荧光显微镜测量HeLa细胞。 细胞核用Hoechst 33342（Cat＃17530，Blue）染色。

图2.使用MitoROS OH580（Cat＃16055）检测RAW 264.7细胞中的细胞内羟基自由基。 将细胞与MitoROS OH580工作溶液在37℃下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。 然后将细胞在没有或与PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，10-500ng / mL）在生长培养基中于37℃温育4小时。 用HHBS洗涤3次后，使用具有TRITC过滤器组的荧光显微镜测量HeLa细胞。

参考文献

Oxyl and hydroxyl radical transfer in mitochondrial amidoxime reducing component-catalyzed nitrite reduction
Authors: Yang J, Giles LJ, Ruppelt C, Mendel RR, Bittner F, Kirk ML.
Journal: J Am Chem Soc (2015): 5276

Arbutin, an intracellular hydroxyl radical scavenger, protects radiation-induced apoptosis in human lymphoma U937 cells
Authors: Wu LH, Li P, Zhao QL, Piao JL, Jiao YF, Kadowaki M, Kondo T.
Journal: Apoptosis (2014): 1654

Chloroplast-located BjFer1 together with anti-oxidative genes alleviate hydrogen peroxide and hydroxyl radical injury in cytoplasmic male-sterile Brassica juncea
Authors: Yang J, Liu S, Yang X, Zhang M.
Journal: Mol Biol Rep (2012): 4169

Hydroxyl radical (.OH) played a pivotal role in oridonin-induced apoptosis and autophagy in human epidermoid carcinoma A431 cells
Authors: Yu Y, Fan SM, Song JK, Tashiro S, Onodera S, Ikejima T.
Journal: Biol Pharm Bull (2012): 2148

Excess no predisposes mitochondrial succinate-cytochrome c reductase to produce hydroxyl radical
Authors: Chen J, Chen CL, Alevriadou BR, Zweier JL, Chen YR.
Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 491

Postresuscitation syndrome: potential role of hydroxyl radical-induced endothelial cell damage
Authors: Huet O, Dupic L, Batteux F, Matar C, Conti M, Chereau C, Lemiale V, Harrois A, Mira JP, Vicaut E, Cariou A, Duranteau J.
Journal: Crit Care Med (2011): 1712

Endogenous 3,4-dihydroxyphenylalanine and dopaquinone modifications on protein tyrosine: links to mitochondrially derived oxidative stress via hydroxyl radical
Authors: Zhang X, Monroe ME, Chen B, Chin MH, Heibeck TH, Schepmoes AA, Yang F, Petritis BO, Camp DG, 2nd, Pounds JG, Jacobs JM, Smith DJ, Bigelow DJ, Smith RD, Qian WJ.
Journal: Mol Cell Proteomics (2010): 1199

Hyperglycemia induces apoptosis in rat liver through the increase of hydroxyl radical: new insights into the insulin effect
Authors: Frances DE, Ronco MT, Monti JA, Ingaramo PI, Pisani GB, Parody JP, Pellegrino JM, Sanz PM, Carrillo MC, Carnovale CE.
Journal: J Endocrinol (2010): 187

Acarbose reduces myocardial infarct size by preventing postprandial hyperglycemia and hydroxyl radical production and opening mitochondrial KATP channels in rabbits
Authors: Minatoguchi S, Zhang Z, Bao N, Kobayashi H, Yasuda S, Iwasa M, Sumi S, Kawamura I, Yamada Y, Nishigaki K, Takemura G, Fujiwara T, Fujiwara H.
Journal: J Cardiovasc Pharmacol (2009): 25

Endogenous activation of mitochondrial KATP channels protects human failing myocardium from hydroxyl radical-induced stunning
Authors: Maack C, Dabew ER, Hohl M, Schafers HJ, Bohm M.
Journal: Circ Res (2009): 811

活性氧 Cell Meter 荧光法线粒体超氧化物活性检测试剂盒

	货号	16060	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	513	Em (nm)	537
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测线粒体的试剂盒，线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低至中等水平的超氧化物的产生对于许多基本细胞过程的适当调节是至关重要的，包括基因表达，信号转导和肌肉适应耐力运动训练。不受控制的线粒体超氧化物产生可引发细胞氧化损伤，其导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。细胞内线粒体超氧化物的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响非常重要。Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂MitoROS 520来量化活细胞中的超氧化物水平.MitoROS 520具有细胞渗透性，能够快速，有选择地检测线粒体中的超氧化物。它在与超氧化物反应时产生绿色荧光，并且在Ex / Em = 490 / 520nm处可以容易地读取所得荧光。Cell Meter 荧光线粒体超氧化物活性测定试剂盒提供灵敏的一步荧光测定法，用于检测活细胞中的线粒体超氧化物，孵育1小时。该试剂盒可用于流式细胞仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒。 

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

样本实验方案

概述

适用于荧光显微镜：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.添加MitoROS™520工作解决方案

4.将细胞在37°C染色60分钟

5.监测Ex / Em = 490 / 530nm处的荧光增加

适用于流式细胞仪：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.在37°C下染色细胞60分钟

4.用流式细胞仪监测荧光强度

操作步骤

对于荧光显微镜/ 96孔微孔板：

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在培养基或所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用5μM抗霉素A（AMA）在37°C处理RAW 264.7巨噬细胞2小时以诱导超氧化物。 

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到细胞板中。

4.将细胞在37°C孵育1小时，并使用荧光显微镜和FITC过滤器拍摄图像。

对于流式细胞仪：

1.根据需要处理细胞。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意我们用50μM抗霉素A（AMA）在37℃处理Jurkat细胞2小时以诱导超氧化物。

3.将1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）细胞加入细胞中。

4.将细胞在5％CO 2,37℃培养箱中孵育1小时，并使用FITC通道中的流式细胞仪监测荧光强度（Ex / Em = 488 / 530nm）。

参考文献

Comparison of the detrimental features of microglia and infiltrated macrophages in traumatic brain injury: A study using a hypnotic bromovalerylurea
Authors: Naoki Abe, Mohammed E Choudhury, Minori Watanabe, Shun Kawasaki, Tasuku Nishihara, Hajime Yano, Shirabe Matsumoto, Takehiro Kunieda, Yoshiaki Kumon, Toshihiro Yorozuya
Journal: Glia (2018)

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Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 绿色荧光

	货号	22786	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	494	Em (nm)	514
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞活性检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter细胞活性检测试剂盒 绿色荧光 使用一种专属型染料，一旦进入活细胞中，其荧光强度增强。这种染料是一种疏水性复合物，可以轻易地进入完整的活细胞。通过细胞内酯酶水解弱荧光性底物，产生具有强烈荧光的亲水性产物，并且可以在保持在细胞质中。这种酯酶的活性与活细胞数量成比例关系，因此酯酶水解荧光底物形成的产物的荧光强度与活细胞数量相关。生长在培养板中的细胞可以被染料，且在不到两小时内就可以完成定量分析。本检测法比四唑盐或者基于Alarmar Blue的检测更加强大、稳定。它可以用于许多荧光实验平台的高通量分析中，例如微孔板分析，免疫组化和流式细胞术。它在许多研究中非常有用，包括细胞粘附性、趋化作用、药物抗性、细胞活性、细胞凋亡和细胞毒性研究。本试剂盒提供所有必需组分和最佳检测方案。它适合于增殖型和非增殖型细胞，也可用于悬浮和贴壁细胞。96微孔板中，每孔用试剂100ul，本试剂盒提供的试剂足以进行500次检测；384微孔板中，每孔加试剂25ul，本试剂盒提供的试剂足以进行2000次检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞活性检测试剂盒。 

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产品说明书

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光

	货号	22816	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	532	Em (nm)	619
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光 是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白，CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中，例如亨廷顿综合症，caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性，其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使用(Ac-IETD)2- ProRed 作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割 ProRed 肽产生强蓝色荧光（eX/eM = 530/620 NM）。这种特性使得试剂盒能适合于DAPI滤光器。本试剂盒提供所有必需组分和最佳操作流程。该实验结果稳定，快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）
3.在室温下孵育1小时
4.在Ex / Em = 535/620 nm（截止= 610 nm）监测荧光强度（顶部或底部读取模式）

储存溶液配制

        除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Ac-IETD-ProRed 原液（200X）：
将65μLDMSO加入到Ac-IETD-ProRed （组分A）的小瓶中并充分混合以制备200X Ac-IETD-ProRed 储备溶液。避光。

工作溶液配制

将50μL的200X Ac-IETD-ProRed 储备溶液加入10mL的分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液。 避光。 注意：Caspase 8工作液不稳定，请及时使用。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物（96孔板）或5μL/孔的5X测试化合物（384孔板）加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的一段时间（对于用星形孢菌素处理的Jurkat细胞3-4小时）以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔/ 96孔或25μL/孔/ 384孔板的Caspase 8工作溶液。

4.将板在室温下孵育至少1小时，避光。注意：如果需要，在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前，向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂，以确认对caspase 8样活性的抑制作用。

5.在Ex / Em = 535 / 620nm（截止= 610nm）下用荧光酶标仪（顶部或底部读取模式）监测荧光强度。注意：有时，如果使用底部读取模式，底部读数可提供更好的信号与背景比，离心细胞板（特别是非粘附细胞）在800 rpm下2分钟。

数据分析

参考文献

Angiopoietins Modulate Survival, Migration, and the Components of the Ang-Tie2 Pathway of Chronic Lymphocytic Leukaemia (CLL) Cells In Vitro
Authors: Luis Mario Aguirre Palma, Hanna Flamme, Iris Gerke, Karl-Anton Kreuzer
Journal: Cancer Microenvironment (2016): 13–26

Hypoxia regulates TRAIL sensitivity of colorectal cancer cells through mitochondrial autophagy.
Authors: Gertrud Knoll, Sebastian Bittner, Maria Kurz, Jonathan Jantsch, Martin Ehrenschwender
Journal: Oncotarget (2016)

microRNA-186 inhibits cell proliferation and induces apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma by targeting SKP2
Authors: Wei He, Jianfang Feng, Yan Zhang, Yuanyuan Wang, Wenqiao Zang, Guoqiang Zhao
Journal: Laboratory Investigation (2016): 317–324

Promotion of osteointegration under diabetic conditions by tantalum coating-based surface modification on 3-dimensional printed porous titanium implants
Authors: Lin Wang, Xiaofan Hu, Xiangyu Ma, Zhensheng Ma, Yang Zhang, Yizhao Lu, Xiang Li, Wei Lei, Yafei Feng
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2016): 440–452

Role of delta-like ligand-4 in chemoresistance against docetaxel in MCF-7 cells
Authors: Q Wang, Y Shi, HJ Butler, J Xue, G Wang, P Duan, H Zheng
Journal: Human & Experimental Toxicology (2016): 0960327116650006

Glucose promotes cell proliferation, glucose uptake and invasion in endometrial cancer cells via AMPK/mTOR/S6 and MAPK signaling
Authors: Jianjun Han, Lu Zhang, Hui Guo, Weiya Z Wysham, Dario R Roque, Adam K Willson, Xiugui Sheng, Chunxiao Zhou, Victoria L Bae-Jump
Journal: Gynecologic oncology (2015): 668–675

IL-7 abrogates the immunosuppressive function of human double-negative T cells by activating Akt/mTOR signaling
Authors: Andrea Allgäuer, Elisabeth Schreiner, Fulvia Ferrazzi, Arif B Ekici, Armin Gerbitz, Andreas Mackensen, Simon Völkl
Journal: The Journal of Immunology (2015): 3139–3148

Insulin improves osteogenesis of titanium implants under diabetic conditions by inhibiting reactive oxygen species overproduction via the PI3K-Akt pathway
Authors: Lin Wang, Xiong Zhao, Bo-yuan Wei, Yi Liu, Xiang-yu Ma, Jian Wang, Peng-chong Cao, Yang Zhang, Ya-bo Yan, Wei Lei
Journal: Biochimie (2015): 85–93

LGL1 modulates proliferation, apoptosis, and migration of human fetal lung fibroblasts
Authors: Hui Zhang, Neil B Sweezey, Feige Kaplan
Journal: American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology (2015): L391–L402

t-BHQ Provides Protection against Lead Neurotoxicity via Nrf2/HO-1 Pathway
Authors: Fang Ye, Xiaoyi Li, Lili Li, Jing Yuan, Jun Chen
Journal: Oxidative medicine and cellular longevity (2015)

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Cell Meter 荧光细胞脂质过氧化测定试剂盒

	货号	22906	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	581	Em (nm)	591
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

脂质过氧化是细胞脂质被活性氧（ROS）氧化降解的过程。 该过程不仅可以导致细胞膜完整性的破坏，而且可以使膜结合受体失活。 它是自由基介导的细胞损伤的主要原因之一。 Cell Meter 荧光细胞脂质过氧化测定试剂盒提供了一种检测脂质过氧化的灵敏方法。该试剂盒使用我们敏感的比例脂质过氧化指示剂Lipoxite R590 / G520，当细胞中的ROS被过氧化时，它的红色荧光从红色变为绿色，这种依赖于过氧化的转变使得可以进行脂质过氧化的比例测量。我们的试剂盒包括过氧化氢，作为诱导脂质过氧化的阳性对照治疗方法。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 荧光细胞脂质过氧化测定试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 处理平板细胞。
2. 用目标化合物处理孵育细胞。
3. 添加Lipoxite R590 / G525。
4. 除去介质，并用PBS洗涤。
5. 通过FITC / TRITC或FITC / PE通道通过荧光显微镜或流式细胞仪分析样品。

 

溶液配制 

工作溶液配制

通过将500X Lipoxite R590 / G525（组分A）以1:50稀释到HHBS（组分B）中，制备Lipoxite R590 / G525的10X工作溶液。

 

实验步骤

1.以所需的密度培养细胞，并在37°C含5％CO₂的潮湿箱中孵育过夜。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。 注意：对于阳性对照，以约250 µM（1X）的终浓度向细胞中添加过氧化氢（组分C）30分钟。

3.向细胞中添加10X Lipoxite R590 / G525，终浓度为1X（例如，向90uL细胞中添加10uL）。

4.将细胞在5％CO₂细胞培养箱中于37°C孵育30分钟。

5.除去培养基，并用HHBS（组分B）或DPBS洗涤细胞三遍。

6.在染色后2小时内，使用荧光显微镜或流式细胞仪通过FITC/TRITC或FITC/PE通道检测细胞的荧光。

 

图示

图1. HeLa细胞在37°C的完全生长培养基中用1X Lipoxite R590 / G525染色30分钟。 对于H2O2处理，将约250 µM H2O2添加到细胞中并孵育30分钟。 然后将细胞与1X Lipoxite R590 / G525孵育，并在孵育的最后10分钟内用Hoechst 33342染色。 用HHBS洗涤细胞3次，并用Keyence荧光显微镜成像。 用H2O2处理，观察到红色到绿色的荧光信号明显转移。

图2. Jurkat细胞在37°C的完全生长培养基中用1X Lipoxite R590 / G525染色30分钟。 对于H2O2处理，将约250 µM H2O2添加到细胞中并孵育30分钟。 然后将细胞与1X Lipoxite R590 / G525孵育，并用流式细胞仪通过FITC（488/530 nm）和PE（488/572 nm）通道进行分析。 数据表示为红色（PE）/绿色（FITC）荧光强度的比率。 在H2O2处理的细胞中，红色/绿色的比率降低，表明存在H2O2诱导的脂质过氧化。

 

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光

	货号	15296	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	6564
	Ex (nm)	593	Em (nm)	655
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种优秀的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。 

产品说明书

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5  –  1×10⁶细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.使用APC通道用流式细胞仪分析细胞

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中，密度为1×105至1×10⁶个细胞/ mL。

注意1：应对每个细胞系进行单独测评，以确定最佳细胞密度。 对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也兼容。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。 优化每个实验的孵育时间。

3.将1μL JJ1902NAD（P）H探针（组分A）加入0.5 mL细胞悬浮液中。在37℃下孵育30-60分钟。

注意对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共温育30分钟。 详细信息请参见说明书中的图1。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪监测APC通道的荧光强度。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或50μL/孔/ 384孔板）制备细胞
2.添加1/5体积的分析溶液（组分A）
3.将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育1-24小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（底部读取模式）（截止= 570 nm）

操作步骤

1.在具有黑色壁和透明底部的组织培养微孔板中每孔100至10,000个细胞。 将测试化合物添加到细胞中，并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。 对于96孔板，建议的总体积为100μL，对于384孔板，建议的总体积为50μL。

Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 蓝色荧光

	货号	22785	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
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	分子量		溶剂
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	产品详细介绍

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