Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒 橙色荧光,适合酶标仪检测

简要概述

Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来检测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用我们专有的橙色荧光Apopxin PS传感器，该传感器特异性结合PS，其亲和力远高于Annexin V（Kd <10 nM）。该试剂盒中使用的PS传感器与膜PS结合后具有橙色荧光。它的光谱性质几乎与Cy3®或AlexaFluor®555的光谱性质相同，使其易于用配备有Cy3®或AlexaFluor®555光源和滤光片的普通荧光仪器（Cy3®或AlexaFluor®555分别是GE Healthcare和Invitrogen的商标）进行实验。由于它对PS的亲和力大大增强，因此该试剂盒比仅与显微镜或流式细胞仪平台一起使用的其他基于膜联蛋白V的商业化凋亡试剂盒更为强大。除显微镜和流式细胞仪平台外，该试剂盒还可与荧光酶标仪一起使用。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物制备细胞（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

2. 加入等量的Apopxin Orange工作溶液

3. 在室温下孵育1小时

4. 在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）或使用Cy3滤光片的荧光显微镜下检测荧光强度（底部读取模式）

溶液配制

工作溶液配制

将10μL的100X Apopxin 橙色（组分A）添加到1 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成Apopxin Orange工作溶液。 注意： 100μLApopxin Orange工作溶液足以用于一个孔。现用现配避免长时间放置。

操作步骤

1.通过向PBS或所需的缓冲液中加入10ul /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的10X测试化合物储备溶液来处理细胞。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5％CO₂、37°C的培养箱中孵育（对于喜树碱处理过的Jurkat细胞，需要4-6小时）以诱导凋亡。

3.在每个孔中添加100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Apopxin Orange工作溶液。

4.在避光条件下，于室温下孵育细胞板至少1小时。

5.以800 rpm的速度离心细胞板（特别是非贴壁细胞）2分钟（制动）。

6.使用荧光酶标仪（Ext / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm））或使用带有Cy3®滤光片的荧光显微镜对图像进行荧光强度检测。

图示

图1.用Cell Meter 磷脂酰丝氨酸细胞凋亡检测试剂盒染色的Costar黑色96孔板中Jurkat细胞的荧光图像。 不使用（左）/使用20 µM喜树碱（右）处理Jurkat细胞5小时。 使用具有通道的荧光显微镜测量荧光强度。