Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 绿色荧光

简要概述

        Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于ROS检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些 的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。活性氧分子（ROS）是氧正常代谢过程的固有副产品，在细胞信号及转导过程中扮演着重要的角色。然而，在氧化应激阶段，ROS水平显著增加。ROS的积聚导致细胞结构的重大破坏。氧化应激通常在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松，中风，炎症以及许多神经变性疾病和癌症中被被发现。ROS的测定能帮助我们理解氧化应激如何调节改变的胞内途径。Amplite ROS荧光法检测试剂盒使用我们独特的ROS指示器在活细胞中测定ROS。Amplite ROS Green是细胞通透的，当它与ROS反应时能产生绿色的荧光。本试剂盒具备优化的即用配制，能与高通量筛选的液体控制设备相配。Amplite ROS荧光法检测试剂盒能提供敏感的、一步荧光实验来检测活细胞中胞内的ROS，仅需一小时的孵育。本实验能在96孔或者384孔微孔板中进行，可以实现自动化无需分离步骤。它的信号能轻松被荧光酶标仪或者荧光显微镜读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.添加Amplite ROS绿色工作溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）
3.将细胞在37℃下染色60分钟
4.用测试化合物处理细胞以诱导ROS
5.在Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）或带有FITC滤光片组的荧光显微镜下监测荧光增加（底部读取模式）

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1Amplite ROS Green原液（500X）：
将40μLDMSO（组分C）加入到Amplite ROS Green（组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X Amplite  ROS Green原液。 避光。 注意：20μL的500X Amplite ROS Green原液足以容纳1个平板。 

2.制备工作溶液

将20μL500XAmplite ROS Green储备溶液加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成Amplite ROS Green工作溶液。 注意：此Amplite ROS Green工作溶液在室温下稳定至少2小时。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Amplite ROS Green工作溶液加入细胞板中。

2.将细胞在5％CO₂,37℃培养箱中孵育1小时。

3.用所需缓冲液（如PBS或HHBS）中的20μL11X测试化合物（96孔板）或10μL6X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

4.为了诱导ROS，将细胞板在室温下或在5％CO₂,37℃培养箱中孵育至少15分钟或所需的一段时间（对于用1mM H₂O₂处理的Hela细胞30分钟）。

5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）监测荧光增加，或使用具有FITC滤光器组的荧光显微镜观察细胞。

数据分析