上海金畔生物科技有限公司提供RHOD Antibody,索莱宝,K004549P-50ul，可以访问官网了解更多产品信息。
RHOD Antibody,索莱宝,K004549P-50ul
| 浓度 | |
| 规格 | 50ul |
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上海金畔生物科技有限公司提供RHOD Antibody,索莱宝,K004549P-100ul，可以访问官网了解更多产品信息。
RHOD Antibody,索莱宝,K004549P-100ul
| 浓度 | |
| 规格 | 100ul |
| 保存 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
钙离子荧光探针Rhod-2, AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的 发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4™系列钙检测试剂是 亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590™具有 高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以 高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
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产品说明书
操作步骤
1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。
b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的 终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的 小探针浓度。
c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。
d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。
e）在所需的Ex / Em波长下进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。
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简要概述
钙通量测定法是 发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的 亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
准备细胞
除去生长培养基
添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
在室温下孵育1小时
检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。
2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。
工作溶液配制
Rhod-4 NW工作溶液：将20 µL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。
2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 注意：如果细胞在室温下能长时间正常工作，请在室温下孵育细胞板1-2小时。
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。
4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。
图示
图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到 终指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。 |
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简要概述
产品基本信息
货号：20451
产品名称：钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：~11000
溶剂：水
激发波长(nm)：557
发射波长(nm)：579
产品介绍
葡聚糖偶联的钙指示剂稳定地保留在神经元内。结果，它们非常适合在生理温度下测量突触前钙。另外，右旋糖酐指示剂可用于在体内标记神经元及其突触前的按钮。这样就可以测量无法稳定加载其他类型指示剂的投射纤维突触前囊中的钙。Stephan D. Brenowitz和Wade G. Regehr报道了一种利用Rhod 2-dextran指示剂在活体内将攀登纤维投射物装载到小脑的技术，用于在脑切片中进行突触前钙成像。该技术适用于研究许多可以制备脑切片的物种的投射纤维。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2 +测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐。
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产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。
b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。
注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。
c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（ 终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。
e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。
注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。
g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-2, AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的 发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是 亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590 具有 高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以 高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
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操作步骤
1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。
b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的 终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的 小探针浓度。
c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。
d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。
e）在所需的Ex / Em波长下进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力（Kd =~320μM）低于任何其他基于BAPTA的指示剂，并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的，并且表现出强烈的荧光增强，在结合Ca2+时没有光谱移位。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
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使用钙指示剂AM酯类
1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。
b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的 终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的 小探针浓度。
注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。
c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（ 终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。
e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。
注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。
g）在所需的Ex / Em波长下进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。
图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到 终指示的浓度。
使用钙指示剂盐
为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：
[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。
使用钙指示剂结合物
与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4 常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能 化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有 激发和在〜520 nm处具有 发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的电池负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。
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操作步骤
1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。
b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的 终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的 小探针浓度。
注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。
c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。
d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。
e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
钙通量测定法是发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
准备细胞
除去生长培养基
添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
在室温下孵育1小时
检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。
2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。
工作溶液配制
Rhod-4 NW上色溶液：将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.从细胞板中去除生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者，使细胞在含1-5％FBS的生长培养基中生长，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒（Cat.＃36334和Cat.＃36335）。
2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。
3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1-2小时。
4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。
图示
图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基，并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25 |
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简要概述
产品基本信息
货号：21120
产品名称：钙离子荧光探针Rhod-4, AM
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：1015.96
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：524
发射波长(nm)：551
产品介绍
钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2 常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。AAT Bioquest提供Quest Rhod-4的多种包装大小，可满足您的特殊需求，例如1 mg；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, AM。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2 常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。AAT Bioquest提供Quest Rhod-4的多种包装大小，可满足您的特殊需求，例如1 mg；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。
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产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯：
AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的 小探针浓度。
c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（ 终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。
e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。
注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。
g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
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简要概述
钙通量测定法是 发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的 亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
准备细胞
除去生长培养基
添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
在室温下孵育1小时
检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。
2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。
工作溶液配制
Rhod-4 NW上色溶液：将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.从细胞板中去除生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者，使细胞在含1-5％FBS的生长培养基中生长，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒（Cat.＃36334和Cat.＃36335）。
2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。
3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1-2小时。
4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。
5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。
图示
图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基，并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25 |
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简要概述
产品基本信息
货号：1062
产品名称：iFluor 488马来酰亚胺
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：12个月
产品物理化学光谱特性
分子量：881.76
溶剂：DMSO
激发波长（nm）：491
发射波长（nm）：516
CF280：0.11
CF260：0.21
量子产率：0.9
消光系数：75000
产品介绍
iFluor 488马来酰亚胺是美国AAT Bioquest生产的iFluor系列荧光探针，虽然FITC仍然是用于制备绿色荧光生物共轭物的流行的荧光标记染料，但是FITC存在某些限制，例如用于显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。与荧光素衍生物如FITC的缀合物相比，用iFluor 488染料制备的蛋白质缀合物要好得多。iFluor 488结合物比荧光素结合物明显更亮，并且光稳定性更高。此外，iFluor 488的荧光不受pH（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对荧光素的主要改进，荧光素仅在pH大于9时发出其荧光.iFluor 488马来酰亚胺相当稳定并且显示出与巯基的良好反应性和选择性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的iFluor 488马来酰亚胺。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-2 常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。Rhod-4 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM具有比Rhod-2 AM敏感10倍的细胞钙响应。AAT Bioquest提供多种包装尺寸的Quest Rhod-4，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
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产品说明书
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-4 ，AM原液。
2.1使用量的Rhod-4 ，AM：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Rhod-4，AM与492.15μL无水DMSO混合。
3.使用10μMRhod-4 ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1 终井内浓度的Rhod-4 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度：0.04％
3.3 终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-4 ，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Rhod-4 的 终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度 终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的 终浓度调节至以下：5μM的Rhod-4 ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 524/551 nm运行实验。
。
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2 +测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐。
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产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。
b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。
注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。
c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（ 终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。
e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。
注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。
g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
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钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的 中发现的优选方法。 Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Rhod-4 NW，其可以穿过细胞膜。 Rhod-4是可用于HTS筛选的 亮的红钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4™的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，产生带负电荷的荧光染料，其停留在细胞内，并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Rhod-4的荧光。其长波长，高灵敏度和> 250倍荧光增加的特性（当它与钙形成复合物时）使Rhod-4™成为测量细胞钙的理想指示剂。这个Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。
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简要概述
产品基本信息
货号：21122
产品名称：钙离子荧光探针Rhod-4, AM
规格：10x50ug
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：24个月
产品物理化学光谱特性
分子量：1015.96
溶剂：DMSO
激发波长(nm)：494
发射波长(nm)：517
产品介绍
钙离子荧光探针Fluo-2, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。Fluo-2是Fluo-3和Fluo-4的母体化合物。这些荧光钙指示剂具有钙依赖性荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-2, 钾盐。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
钙通量测定法是 发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的 亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
准备细胞
除去生长培养基
添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
在室温下孵育1小时
检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度
溶液配制
储备溶液配制
1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。
2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。
工作溶液配制
Rhod-4 NW工作溶液：将20 µL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。
实验步骤
1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。
2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 注意：如果细胞在室温下能长时间正常工作，请在室温下孵育细胞板1-2小时。
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。
4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。
图示
图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到 终指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。 |
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简要概述
钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-2 常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。Rhod-4 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM具有比Rhod-2 AM敏感10倍的细胞钙响应。AAT Bioquest提供多种包装尺寸的Quest Rhod-4，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。
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产品说明书
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-4 ，AM原液。
2.1使用量的Rhod-4 ，AM：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Rhod-4，AM与492.15μL无水DMSO混合。
3.使用10μMRhod-4 ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1 终井内浓度的Rhod-4 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度：0.04％
3.3 终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-4 ，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Rhod-4 的 终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度 终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的 终浓度调节至以下：5μM的Rhod-4 ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 524/551 nm运行实验。
