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免洗Rhod4钙检测试剂盒 去除培养基 货号36331-AAT Bioquest荧光染料

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免洗Rhod4钙检测试剂盒 去除培养基 货号36331
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
10 Plate
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

简要概述

钙通量测定法是 发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的 亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞

  2. 除去生长培养基

  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）

  4. 在室温下孵育1小时

  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

工作溶液配制

Rhod-4 NW上色溶液：将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者，使细胞在含1-5％FBS的生长培养基中生长，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒（Cat.＃36334和Cat.＃36335）。

2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1-2小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。

图示

免洗Rhod4钙检测试剂盒 去除培养基 货号36331

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基，并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25

 

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119

简要概述

        钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4 常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能 化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有 激发和在〜520 nm处具有 发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的电池负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。

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产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的 终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的 小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
Rhod-2
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

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Product details

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067

简要概述

        钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。长波长Rhod-2 Ca2 +指示剂是Fluo-3的有价值的替代品，可用于在具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行实验。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐。

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067

产品说明书

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（ 终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM 货号21070-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-5N, AM 货号21070
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
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Product details

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM 货号21070

简要概述

        钙离子荧光探针Rhod-5N, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力（Kd =~320μM）低于任何其他基于BAPTA的指示剂，并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的，并且表现出强烈的荧光增强，在结合Ca2+时没有光谱移位。Rhod-5N AM是Rhod-5N的细胞渗透型。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-5N，AM原液。
2.1使用量的Rhod-5N，AM：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Rhod-5N，AM与432.93μL无水DMSO混合。

3.用含有10μMRhod-5N，AM 4的HHBS制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1 终孔内浓度为Rhod-5N，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度：0.04％
3.3 终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-5N，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议 终浓度为Rhod-5N，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度 终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的 终浓度调节至以下：5μM的Rhod-5N，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 551/577 nm运行实验。

钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000* 货号20451-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*

钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*

钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000* 货号20451 货号 20451 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 5244
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 ~11000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：20451

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：~11000

溶剂：水

激发波长(nm)：557

发射波长(nm)：579

 

产品介绍

葡聚糖偶联的钙指示剂稳定地保留在神经元内。结果，它们非常适合在生理温度下测量突触前钙。另外，右旋糖酐指示剂可用于在体内标记神经元及其突触前的按钮。这样就可以测量无法稳定加载其他类型指示剂的投射纤维突触前囊中的钙。Stephan D. Brenowitz和Wade G. Regehr报道了一种利用Rhod 2-dextran指示剂在活体内将攀登纤维投射物装载到小脑的技术，用于在脑切片中进行突触前钙成像。该技术适用于研究许多可以制备脑切片的物种的投射纤维。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Tuning the Color Palette of Fluorescent Copper Sensors through Systematic Heteroatom Substitution at Rhodol Cores
Authors: Shang Jia, Karla M Ramos-Torres, Safacan Kolemen, Cheri M Ackerman, Christopher J Chang
Journal: (2017)

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate Cat#20450

说明书
钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*.pdf

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 货号21118-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 货号21118 货号 21118 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 6564
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 815.64 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4最常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 Cat#21119

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21119 货号 21119 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 6564
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 880.07 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4最常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能最大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可改善细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有最大激发和在〜520 nm处具有最大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

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Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
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Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

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Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
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Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 Cat#21118

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21120-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21120 货号 21120 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 6564
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 1015.96 溶剂 DMSO
产品详细介绍

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产品基本信息

货号：21120

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-4, AM

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1015.96

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：524

发射波长(nm)：551

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

 

产品介绍

钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2最常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。AAT Bioquest提供Quest Rhod-4的多种包装大小，可满足您的特殊需求，例如1 mg；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, AM。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

A high-throughput Ca2+ flux assay to monitor cyclic nucleotide-gated channel activity and characterize achromatopsia mutant channel function
Authors: Marlene A Jacobson, Laura J Jones, Dennis J Colussi, Jacqueline C Tanaka
Journal: ACS chemical neuroscience (2019)

Central role of IP 3 R2-mediated Ca 2+ oscillation in self-renewal of liver cancer stem cells elucidated by high-signal ER sensor
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Journal: J Cell Sci (2019): jcs–224923

Manipulating energy migration within single lanthanide activator for switchable upconversion emissions towards bidirectional photoactivation
Authors: Qingsong Mei, Akshaya Bansal, Muthu Kumara Gnanasammandhan Jayakumar, Zhiming Zhang, Jing Zhang, Hua Huang, Dejie Yu, Chrishan JA Ramachandra, Derek J Hausenloy, Tuck Wah Soong
Journal: Nature Communications (2019): 1–11

Autocrine GABA signaling distinctively regulates phenotypic activation of mouse pulmonary macrophages
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Journal: Cellular Immunology (2018)

Three-dimensional model of intracellular and intercellular Ca2+ waves propagation in endothelial cells
Authors: Toshihiro Sera, Shingo Komine, Masataka Arai, Yasuhiro Sunaga, Hideo Yokota, Susumu Kudo
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2018)

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Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21121-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21121 货号 21121 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 1015.96 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-2最常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。Rhod-4 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM具有比Rhod-2 AM敏感10倍的细胞钙响应。AAT Bioquest提供多种包装尺寸的Quest Rhod-4，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-4 ，AM原液。
2.1使用量的Rhod-4 ，AM：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Rhod-4，AM与492.15μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMRhod-4 ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终井内浓度的Rhod-4 ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-4 ，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Rhod-4 的最终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127孔浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μM的Rhod-4 ，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 524/551 nm运行实验。

 

参考文献

Central role of IP 3 R2-mediated Ca 2+ oscillation in self-renewal of liver cancer stem cells elucidated by high-signal ER sensor
Authors: Cuiwei Sun, Bo Shui, Wei Zhao, Hui Liu, Wenwen Li, Jane C Lee, Robert Doran, Frank K Lee, Tao Sun, Qing Sunny Shen
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Three-dimensional model of intracellular and intercellular Ca2+ waves propagation in endothelial cells
Authors: Toshihiro Sera, Shingo Komine, Masataka Arai, Yasuhiro Sunaga, Hideo Yokota, Susumu Kudo
Journal: Biochemical and Biophysical Research Communications (2018)

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
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Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21122-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM

钙离子荧光探针Rhod-4, AM 货号21122 货号 21122 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 3924
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 1015.96 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21122

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-4, AM

规格：10x50ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1015.96

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：494

发射波长(nm)：517

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

 

产品介绍

钙离子荧光探针Rhod-4, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-2最常用于红色荧光钙指示剂中。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且具有非常小的细胞钙响应。Rhod-4 已被开发用于改善Rhod-2细胞负载和钙响应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM具有比Rhod-2 AM敏感10倍的细胞钙响应。AAT Bioquest提供多种包装尺寸的Quest Rhod-4，以满足您的特殊需求，例如1毫克; 10×50μg; 20×50μg; HTS包装，无需额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

说明书
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钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 货号21128-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 货号21128 货号 21128 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5×50 ug 价格 3924
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 815.64 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2最常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。AAT Bioquest提供Quest Rhod-4的多种包装大小，可满足您的特殊需求，例如1 mg；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 Cat#21119

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21129-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 货号21129 货号 21129 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5×50 ug 价格 3924
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 880.07 溶剂 Water
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钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。在红色荧光钙指示剂中，Rhod-2最常用。但是，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中呈中等荧光，并且细胞钙反应非常小。Rhod-4 的开发旨在改善Rhod-2细胞的负载和钙反应，同时保持Rhod-2的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4 AM的细胞钙反应敏感性比Rhod-2 AM高10倍。AAT Bioquest提供Quest Rhod-4的多种包装大小，可满足您的特殊需求，例如1 mg；10×50 µg；20×50 µg；HTS包装，不收取额外包装费用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。 

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钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

      AM酯是非极性酯，很容易穿过活细胞膜，并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须特别注意，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存，并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。

b）在实验当天，将固体的钙指示剂溶解在DMSO中，或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04％Pluronic®F-127的缓冲液（例如Hanks and Hepes缓冲液）中，准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影，建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。

c）如果您的细胞（例如CHO细胞）中含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2–5 mM）或亚砜吡嗪（0.2–0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1）丙磺舒为-2.5 mM，亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM，以减少去酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）添加到细胞板中。

e）在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟（尤其是Fluo-8 AM）至2小时，然后在室温下将板孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示器的分隔。

注2：将Cal-520 AM孵育2小时以上，对于某些细胞系会产生更好的信号强度。

f） 用HHBS或您选择的缓冲液（包含阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以除去过量的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下运行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 Cat#21118

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 货号21067 货号 21067 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 869.05 溶剂 Water
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简要概述

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。长波长Rhod-2 Ca2 +指示剂是Fluo-3的有价值的替代品，可用于在具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行实验。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐。

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钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Biomaterial Surface Can Modify HUVEC Morphology and Inflammatory Response by Regulating MicroRNA Expression
Authors: Shuangying Gu, Baoxiang Tian, Weicong Chen, Yue Zhou
Journal: Journal of Biosciences and Medicines (2017): 8

Csseverin inhibits apoptosis through mitochondria-mediated pathways triggered by Ca2+ dyshomeostasis in hepatocarcinoma PLC cells
Authors: M Shi, L Zhou, L Zhao, M Shang, T He, Z Tang
Journal: PLoS Negl Trop Dis (2017): e0006074

GluR3B Ab’s induced oligodendrocyte precursor cells excitotoxicity via mitochondrial dysfunction
Authors: Yi Liu, Yan Chen, Wan Tong Du, Xiu Xiang Wu, Fu Xing Dong, Xue Bin Qu, Hong Bin Fan, Rui Qin Yao
Journal: Brain Research Bulletin (2017)

Spatially Organized β-Cell Subpopulations Control Electrical Dynamics across Islets of Langerhans
Authors: Matthew J Westacott, Nurin WF Ludin, Richard KP Benninger
Journal: Biophysical Journal (2017): 1093–1108

ABT737 reverses cisplatin resistance by regulating ER-mitochondria Ca2+ signal transduction in human ovarian cancer cells
Authors: CHUNYAN YU, XIANRUI JIANG, YE XU, LIANKUN SUN
Journal: International Journal of Oncology (2016): 2507–2519

BAX inhibitor-1 is a Ca2&plus; channel critically important for immune cell function and survival
Authors: D Lisak, T Schacht, A Gawlitza, P Albrecht, O Aktas, B Koop, M Gliem, HH Hofstetter, K Zanger, Geert Bultynck
Journal: Cell Death & Differentiation (2016): 358–368

Calcium efflux from the endoplasmic reticulum regulates cisplatin-induced apoptosis in human cervical cancer HeLa cells
Authors: Luyan Shen, Naiyan Wen, Meihui Xia, Yu Zhang, Weimin Liu, Ye Xu, Liankun Sun
Journal: Oncology letters (2016): 2411–2419

Failure of Elevating Calcium Induces Oxidative Stress Tolerance and Imparts Cisplatin Resistance in Ovarian Cancer Cells
Authors: Liwei Ma, Hongjun Wang, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Lu Xu, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Ye Xu
Journal: Aging and Disease (2016): 254

Cardiac tissue slices: preparation, handling, and successful optical mapping
Authors: Ken Wang, Peter Lee, Gary R Mirams, Padmini Sarathchandra, Thomas K Borg, David J Gavaghan, Peter Kohl, Christian Bollensdorff
Journal: American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology (2015): H1112–H1125

Tolerance to endoplasmic reticulum stress mediates cisplatin resistance in human ovarian cancer cells by maintaining endoplasmic reticulum and mitochondrial homeostasis
Authors: Ye Xu, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Liwei Ma, Linchuan Zeng, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Zhixin Li
Journal: Oncology reports (2015): 3051–3060

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 Cat#21068
钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 Cat#21075

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 货号21068-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐

钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐

钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 货号21068 货号 21068 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 820.73 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-2, 三钾盐是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4™系列钙检测试剂是最亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590™具有最高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以最高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540m
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 货号21068

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 货号21068

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

 

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

W-5 and quin 2-AM reverse the inhibitory effect of insulin on lipolysis due to dibutyryl cAMP
Authors: Goko H, Matsuoka A.
Journal: Diabetes Res Clin Pract (1999): 101

Calcium chelator Quin-2 prevents crocidolite-induced DNA strand breakage in human white blood cells
Authors: Faux SP, Michelangeli F, Levy LS.
Journal: Mutat Res (1994): 209

Fluorescence lifetime imaging of intracellular calcium in COS cells using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Lederer WJ, Kirby MS, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1994): 7

Possible mechanisms of epinephrine actions in quin-2-loaded platelets refractory to arachidonic acid
Authors: Rao GH, Gerrard JM, Murthy M, White JG.
Journal: Biochem Med Metab Biol (1993): 322

Fluorescence lifetime imaging of calcium using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1992): 131

Involvement of calcium and iron in Quin 2 toxicity to isolated hepatocytes
Authors: Carpenter-Deyo L, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 747

Toxicity to isolated hepatocytes caused by the intracellular calcium indicator, Quin 2
Authors: Carpenter-Deyo L, Duimstra JR, Hedstrom O, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 739

Aspirin, prostaglandin E1 and Quin-2 AM-induced platelet dysfunction: restoration of function by noradrenalin
Authors: Rao GH, White JG.
Journal: Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids (1990): 141

Characterization of indo-1 and quin-2 as spectroscopic probes for Zn2(+)-protein interactions
Authors: Jefferson JR, Hunt JB, Ginsburg A.
Journal: Anal Biochem (1990): 328

Effect of Quin-2 on Ca2+ uptake mediated by Na+i/Ca2+o exchange and 45Ca2+ efflux in rat brain synaptosomes: a requirement for [Ca2+]i
Authors: Blanco P, Martinez-Serrano A, Bogonez E, Satrustegui J.
Journal: Cell Calcium (1990): 25

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

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钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076 货号 21076 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 891.00 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下，荧光探针显现出光谱响应，这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。 Rhod-FF 与 Ca2+ 结合能力较低，适合于测量 Ca2+浓度从 10 到 200 uM.像它的前体Rhod-2, Rhod-FF在不结合Ca2+时是没有荧光的，在结合Ca3+其产生强烈的绿色荧光。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21076

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

 

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

W-5 and quin 2-AM reverse the inhibitory effect of insulin on lipolysis due to dibutyryl cAMP
Authors: Goko H, Matsuoka A.
Journal: Diabetes Res Clin Pract (1999): 101

Calcium chelator Quin-2 prevents crocidolite-induced DNA strand breakage in human white blood cells
Authors: Faux SP, Michelangeli F, Levy LS.
Journal: Mutat Res (1994): 209

Fluorescence lifetime imaging of intracellular calcium in COS cells using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Lederer WJ, Kirby MS, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1994): 7

Possible mechanisms of epinephrine actions in quin-2-loaded platelets refractory to arachidonic acid
Authors: Rao GH, Gerrard JM, Murthy M, White JG.
Journal: Biochem Med Metab Biol (1993): 322

Fluorescence lifetime imaging of calcium using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1992): 131

Involvement of calcium and iron in Quin 2 toxicity to isolated hepatocytes
Authors: Carpenter-Deyo L, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 747

Toxicity to isolated hepatocytes caused by the intracellular calcium indicator, Quin 2
Authors: Carpenter-Deyo L, Duimstra JR, Hedstrom O, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 739

Aspirin, prostaglandin E1 and Quin-2 AM-induced platelet dysfunction: restoration of function by noradrenalin
Authors: Rao GH, White JG.
Journal: Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids (1990): 141

Characterization of indo-1 and quin-2 as spectroscopic probes for Zn2(+)-protein interactions
Authors: Jefferson JR, Hunt JB, Ginsburg A.
Journal: Anal Biochem (1990): 328

Effect of Quin-2 on Ca2+ uptake mediated by Na+i/Ca2+o exchange and 45Ca2+ efflux in rat brain synaptosomes: a requirement for [Ca2+]i
Authors: Blanco P, Martinez-Serrano A, Bogonez E, Satrustegui J.
Journal: Cell Calcium (1990): 25

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

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钙离子荧光探针Rhod-5N, AM 货号21070-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-5N, AM

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM 货号21070 货号 21070 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3264
Ex (nm) 557 Em (nm) 580
分子量 1154.92 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-5N, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力（Kd =~320μM）低于任何其他基于BAPTA的指示剂，并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的，并且表现出强烈的荧光增强，在结合Ca2+时没有光谱移位。Rhod-5N AM是Rhod-5N的细胞渗透型。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

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操作说明

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Rhod-5N，AM原液。
2.1使用量的Rhod-5N，AM：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Rhod-5N，AM与432.93μL无水DMSO混合。
 

3.用含有10μMRhod-5N，AM 4的HHBS制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1最终孔内浓度为Rhod-5N，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Rhod-5N，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议最终浓度为Rhod-5N，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μM的Rhod-5N，AM，0.04％Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 551/577 nm运行实验。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

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钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 货号21072-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 货号21072 货号 21072 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3264
Ex (nm) 557 Em (nm) 580
分子量 900.02 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，钙的测量对于许多生物学研究至关重要。荧光探针显示结合Ca2+后的光谱响应，使研究人员能够通过荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-5N对Ca2+的结合亲和力（Kd =~320μM）低于任何其他基于BAPTA的指示剂，并且适用于10μM至1mM的Ca2+测量。与Rhod-2指示剂一样，Rhod-5N在不存在二价阳离子的情况下基本上是非荧光的，并且表现出强烈的荧光增强，在结合Ca2+时没有光谱移位。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的最终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的最小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（最终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 货号21072

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 货号21072

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到最终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 Cat#21075
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

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钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21075-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐 货号21075 货号 21075 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 891.00 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2 +测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

 

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钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
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钙离子荧光探针Rhod-FF, AM 货号21077-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM 货号21077 货号 21077 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 1145.90 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21077

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1145.90

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：549

发射波长(nm)：578

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

 

产品介绍

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-FF AM具有细胞渗透性，并在细胞中酯酶水解后生成Rhod-FF。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2+测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, AM。 

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点击查看实验方案

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

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钙离子荧光探针Rhod-FF, AM 货号21078-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM 货号21078 货号 21078 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10×50 ug 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 1145.90 溶剂 DMSO
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简要概述

产品基本信息

货号：21078

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

规格：10×50 ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：1145.90

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：549

发射波长(nm)：578

 

适用仪器

荧光显微镜  
激发： TRITC
发射： TRITC
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射： 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

 

产品介绍

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-FF AM具有细胞渗透性，并在细胞中酯酶水解后生成Rhod-FF。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2+测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, AM。 

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

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