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- 产品货号:
- M4973
-
- 中文名称:
- BAPTA-AM
-
- 英文名称:
- BAPTA-AM
-
- CAS号:
- 126150-97-8
-
- 品牌:
- Abmole
-
货号
产品规格
售价
备注
-
M4973-10mg
10mg
¥765.00
0.9909
-
M4973-50mg
50mg
¥2655.00
0.9909
产品描述
货号
产品规格
售价
备注
M4973-10mg
10mg
¥765.00
0.9909
M4973-50mg
50mg
¥2655.00
0.9909
产品描述
货号
产品规格
售价
备注
M4944-50mg
50mg
¥450.00
0.9974
M4944-100mg
100mg
¥540.00
0.9974
M4944-200mg
200mg
¥810.00
0.9974
产品描述
上海金畔生物科技有限公司提供BAPTA, AM 胞内钙掩蔽BAPTA, AM,索莱宝,S1102-25mg CAS : 126150-97-8,可以访问官网了解更多产品信息。
BAPTA, AM 胞内钙掩蔽BAPTA, AM,索莱宝,S1102-25mg CAS : 126150-97-8
浓度 | |
规格 | 25mg |
保存 | -20°C干燥避光保存 ,保质期12个月 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
关键参数
分子量:764.68
溶剂:DMSO
消光系数:N/A
产品介绍
钙离子指示剂BAPTA,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂,BAPTA AM是BAPTA的细胞渗透型,细胞可渗透的钙螯合剂。该BAPTA衍生物用于调节细胞和组织中的钙浓度。BAPTA是钙特异性氨基多羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛灵活性对钙和其他金属离子的配位至关重要。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子指示剂BAPTA,AM。
点击查看实验方案
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *储备液。
2.1BAPTA的量,AM * CAS 126150-97-8 *使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。
3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2mM丙磺舒的2X工作溶液。
3.1 终孔内浓度BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *:5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度:0.04%
3.3 终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议BAPTA的 终浓度,AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度 终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的 终浓度调节至以下:5μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
产品基本信息
货号:20507
产品名称:钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,六钾盐
规格:10×50 ug
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:24个月
产品物理化学光谱特性
分子量:1258.07
溶剂:DMSO
激发波长(nm):494
发射波长(nm):523
产品介绍
钙离子荧光探针Fluo-2, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。Fluo-2是Fluo-3和Fluo-4的母体化合物。这些荧光钙指示剂具有钙依赖性荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针Fluo-2, AM。
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简要概述
BAPTA是一种水溶性且细胞不可渗透的钙螯合剂。它对钙具有高选择性。BAPTA是钙特异性的氨基聚羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛柔韧性对于钙和其他金属离子的配位至关重要。
产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯:
AM酯是非极性酯,很容易穿过活细胞膜,并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须特别注意,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存,并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。
a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b)在实验当天,将固体的钙指示剂溶解在DMSO中,或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04%Pluronic®F-127的缓冲液(例如Hanks and Hepes缓冲液)中,准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影,建议使用可以产生足够信号强度的 小探针浓度。
c)如果您的细胞(例如CHO细胞)中含有有机阴离子转运蛋白,则可以将丙磺舒(2–5 mM)或亚砜吡嗪(0.2–0.5 mM)添加到染料工作溶液中( 终孔浓度为1)丙磺舒为-2.5 mM,亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM,以减少去酯化指示剂的泄漏。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)添加到细胞板中。
e)在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟(尤其是Fluo-8 AM)至2小时,然后在室温下将板孵育30分钟。
注1:降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2:将Cal-520 AM孵育2小时以上,对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f) 用HHBS或您选择的缓冲液(包含阴离子转运蛋白抑制剂,如1 mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以除去过量的探针。
g)在所需的Ex / Em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应:
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
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简要概述
BAPTA是一种水溶性且细胞不可渗透的钙螯合剂。它对钙具有高选择性。BAPTA是钙特异性的氨基聚羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛柔韧性对于钙和其他金属离子的配位至关重要。
产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯:
AM酯是非极性酯,很容易穿过活细胞膜,并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须特别注意,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存,并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。
a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b)在实验当天,将固体的钙指示剂溶解在DMSO中,或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04%Pluronic®F-127的缓冲液(例如Hanks and Hepes缓冲液)中,准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影,建议使用可以产生足够信号强度的 小探针浓度。
c)如果您的细胞(例如CHO细胞)中含有有机阴离子转运蛋白,则可以将丙磺舒(2–5 mM)或亚砜吡嗪(0.2–0.5 mM)添加到染料工作溶液中( 终孔浓度为1)丙磺舒为-2.5 mM,亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM,以减少去酯化指示剂的泄漏。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)添加到细胞板中。
e)在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟(尤其是Fluo-8 AM)至2小时,然后在室温下将板孵育30分钟。
注1:降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2:将Cal-520 AM孵育2小时以上,对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f) 用HHBS或您选择的缓冲液(包含阴离子转运蛋白抑制剂,如1 mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以除去过量的探针。
g)在所需的Ex / Em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应:
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
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简要概述
关键参数
分子量:764.68
溶剂:DMSO
消光系数:N/A
Kd:nM
产品介绍
钙离子指示剂BAPTA,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂,BAPTA AM是BAPTA的细胞渗透型,细胞可渗透的钙螯合剂。该BAPTA衍生物用于调节细胞和组织中的钙浓度。BAPTA是钙特异性氨基多羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛灵活性对钙和其他金属离子的配位至关重要。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的钙离子指示剂BAPTA,AM。
点击查看实验方案
产品说明书
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *储备液。
2.1BAPTA的量,AM * CAS 126150-97-8 *使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。
3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2mM丙磺舒的2X工作溶液。
3.1 终孔内浓度BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *:5μM
3.2Pluronic®F-127的 终井内浓度:0.04%
3.3 终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议BAPTA的 终浓度,AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度 终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的 终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的 终浓度调节至以下:5μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。
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货号 | 20506 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 500 ug | 价格 | 2604 | |
Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 522 | |
分子量 | 1114.28 | 溶剂 | Water | |
产品详细介绍 |
简要概述
产品基本信息
货号:20506
产品名称:钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,六钾盐
规格:500ug
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:12个月
产品物理化学光谱特性
分子量:1114.28
溶剂:水
激发波长(nm):493
发射波长(nm):522
产品介绍
钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,六钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,OG488 BAPTA -1与Oregon Green 488 BAPTA-1的分子相同。 它是一种可见光可激发的钙指示剂,通常与FITC过滤器组配合使用。 OG 488 BAPTA-1的激发和发射分别为494和523 nm。 结合钙离子后其荧光强度增加~14倍。 这种水溶性盐形式可用于通过显微注射或从贴片移液管输注的细胞内负载。 也可获得指示剂的细胞渗透性AM酯形式(#20507)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,六钾盐。 金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光素。
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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
参考文献
Norepinephrine-induced calcium signaling in astrocytes in the respiratory network of the ventrolateral medulla
Authors: Schnell C, Negm M, Driehaus J, Scheller A, Hulsmann S.
Journal: Respir Physiol Neurobiol (2016): 18
Optical electrocorticogram (OECoG) using wide-field calcium imaging reveals the divergence of neuronal and glial activity during acute rodent seizures
Authors: Daniel AG, Laffont P, Zhao M, Ma H, Schwartz TH.
Journal: Epilepsy Behav (2015): 61
Two-Photon Processor and SeNeCA: a freely available software package to process data from two-photon calcium imaging at speeds down to several milliseconds per frame
Authors: Tomek J, Novak O, Syka J.
Journal: J Neurophysiol (2013): 243
Calcium buffering and clearance in spider mechanosensory neurons
Authors: Schmitz J, Hoger U, Torkkeli PH, French AS.
Journal: J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol (2012): 477
Post hoc immunostaining of GABAergic neuronal subtypes following in vivo two-photon calcium imaging in mouse neocortex
Authors: Langer D, Helmchen F.
Journal: Pflugers Arch (2012): 339
Astrocyte calcium signaling transforms cholinergic modulation to cortical plasticity in vivo
Authors: Takata N, Mishima T, Hisatsune C, Nagai T, Ebisui E, Mikoshiba K, Hirase H.
Journal: J Neurosci (2011): 18155
Microscopic imaging of intracellular calcium in live cells using lifetime-based ratiometric measurements of Oregon Green BAPTA-1
Authors: Lattarulo C, Thyssen D, Kuchibholta KV, Hyman BT, Bacskaiq BJ.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 377
Multifocal animated imaging of changes in cellular oxygen and calcium concentrations and membrane potential within the intact adult mouse carotid body ex vivo
Authors: Wotzlaw C, Bernardini A, Berchner-Pfannschmidt U, Papkovsky D, Acker H, F and rey J.
Journal: Am J Physiol Cell Physiol (2011): C266
Somatic depolarization enhances GABA release in cerebellar interneurons via a calcium/protein kinase C pathway
Authors: Bouhours B, Trigo FF, Marty A.
Journal: J Neurosci (2011): 5804
Mitochondrial DNA mutations affect calcium handling in differentiated neurons
Authors: Trevelyan AJ, Kirby DM, Smulders-Srinivasan TK, Nooteboom M, Acin-Perez R, Enriquez JA, Whittington MA, Lightowlers RN, Turnbull DM.
Journal: Brain (2010): 787
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货号 | 20507 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 10×50 ug | 价格 | 2604 | |
Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 522 | |
分子量 | 1258.07 | 溶剂 | DMSO | |
产品详细介绍 |
简要概述
产品基本信息
货号:20507
产品名称:钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,AM
规格:10×50 ug
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:24个月
产品物理化学光谱特性
分子量:1258.07
溶剂:DMSO
激发波长(nm):494
发射波长(nm):523
适用仪器
流式细胞仪 | |
激发: | 488nm激光 |
发射: | 530/30nm滤波片 |
通道: | FITC通道 |
荧光显微镜 | |
激发: | FITC |
发射: | FITC |
推荐孔板: | 黑色透明 |
荧光酶标仪 | |
激发: | 490nm |
发射: | 525nm |
cutoff: | 515nm |
推荐孔板: | 黑色透明 |
读取模式: | 底读模式 |
产品介绍
OG488 BAPTA -1 AM 与 Oregon Green 488 BAPTA-1 AM 酯的分子相同。它是一种细胞渗透性和可见光可激发的钙指示剂,通常与 FITC 滤光片组一起使用。通过将溶解的指示剂直接添加到含有培养细胞的培养皿中,可以为细胞加载 OG488 BAPTA -1 AM。来自这些细胞的荧光信号通常使用荧光显微镜、荧光微孔板测定或流式细胞术测量。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针Oregon Green 488 BAPTA-1,AM。
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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
参考文献
Norepinephrine-induced calcium signaling in astrocytes in the respiratory network of the ventrolateral medulla
Authors: Schnell C, Negm M, Driehaus J, Scheller A, Hulsmann S.
Journal: Respir Physiol Neurobiol (2016): 18
Optical electrocorticogram (OECoG) using wide-field calcium imaging reveals the divergence of neuronal and glial activity during acute rodent seizures
Authors: Daniel AG, Laffont P, Zhao M, Ma H, Schwartz TH.
Journal: Epilepsy Behav (2015): 61
A highly sensitive fluorescent indicator dye for calcium imaging of neural activity in vitro and in vivo
Authors: Tada M, Takeuchi A, Hashizume M, Kitamura K, Kano M.
Journal: Eur J Neurosci (2014): 1720
Two-Photon Processor and SeNeCA: a freely available software package to process data from two-photon calcium imaging at speeds down to several milliseconds per frame
Authors: Tomek J, Novak O, Syka J.
Journal: J Neurophysiol (2013): 243
Calcium buffering and clearance in spider mechanosensory neurons
Authors: Schmitz J, Hoger U, Torkkeli PH, French AS.
Journal: J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol (2012): 477
Post hoc immunostaining of GABAergic neuronal subtypes following in vivo two-photon calcium imaging in mouse neocortex
Authors: Langer D, Helmchen F.
Journal: Pflugers Arch (2012): 339
Astrocyte calcium signaling transforms cholinergic modulation to cortical plasticity in vivo
Authors: Takata N, Mishima T, Hisatsune C, Nagai T, Ebisui E, Mikoshiba K, Hirase H.
Journal: J Neurosci (2011): 18155
Microscopic imaging of intracellular calcium in live cells using lifetime-based ratiometric measurements of Oregon Green BAPTA-1
Authors: Lattarulo C, Thyssen D, Kuchibholta KV, Hyman BT, Bacskaiq BJ.
Journal: Methods Mol Biol (2011): 377
Multifocal animated imaging of changes in cellular oxygen and calcium concentrations and membrane potential within the intact adult mouse carotid body ex vivo
Authors: Wotzlaw C, Bernardini A, Berchner-Pfannschmidt U, Papkovsky D, Acker H, Fandrey J.
Journal: Am J Physiol Cell Physiol (2011): C266
Somatic depolarization enhances GABA release in cerebellar interneurons via a calcium/protein kinase C pathway
Authors: Bouhours B, Trigo FF, Marty A.
Journal: J Neurosci (2011): 5804
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
货号 | 21004 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 100 mg | 价格 | 1008 | |
Ex (nm) | Em (nm) | |||
分子量 | 564.36 | 溶剂 | Water | |
产品详细介绍 |
简要概述
BAPTA(1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N’,N’-四乙酸)是一种水溶性且细胞不可渗透的钙螯合剂。它对钙具有高选择性。BAPTA是钙特异性的氨基聚羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛柔韧性对于钙和其他金属离子的配位至关重要。
钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
产品说明书
钙指示剂AM Esters的使用
1.带有钙指示剂AM酯:
AM酯是非极性酯,很容易穿过活细胞膜,并被活细胞内的细胞酯酶迅速水解。AM酯被广泛用于无创地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须特别注意,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)进行重构。DMSO储备溶液应在-20°C的干燥环境中保存,并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该协议仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。
a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯储备溶液。
b)在实验当天,将固体的钙指示剂溶解在DMSO中,或将等分的指示剂储备溶液解冻至室温。在您选择的含0.04%Pluronic®F-127的缓冲液(例如Hanks and Hepes缓冲液)中,准备2至20 µM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。必须根据经验确定细胞加载所需指示剂的确切浓度。为避免因过载和潜在的染料毒性而导致的任何伪影,建议使用可以产生足够信号强度的最小探针浓度。
c)如果您的细胞(例如CHO细胞)中含有有机阴离子转运蛋白,则可以将丙磺舒(2–5 mM)或亚砜吡嗪(0.2–0.5 mM)添加到染料工作溶液中(最终孔浓度为1)丙磺舒为-2.5 mM,亚磺酰吡嗪为0.1 -0.25 mM,以减少去酯化指示剂的泄漏。
d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)添加到细胞板中。
e)在温度或37°C下将染料加载板室孵育20分钟(尤其是Fluo-8 AM)至2小时,然后在室温下将板孵育30分钟。
注1:降低加载温度可能会减少指示器的分隔。
注2:将Cal-520 AM孵育2小时以上,对于某些细胞系会产生更好的信号强度。
f) 用HHBS或您选择的缓冲液(包含阴离子转运蛋白抑制剂,如1 mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以除去过量的探针。
g)在所需的Ex / Em波长下运行实验。
2.测量细胞内钙响应:
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
参考文献
Helicobacter pylori induces IL-1β protein through the inflammasome activation in differentiated macrophagic cells
Authors: Shoichiro Kameoka, Takeshi Kameyama, Takaya Hayashi, Seiichi Sato, Naomi Ohnishi, Takeru Hayashi, Naoko Murata-Kamiya, Hideaki Higashi, Masanori Hatakeyama, Akinori Takaoka
Journal: Biomedical Research (2016): 21–27
Licochalcone A induces T24 bladder cancer cell apoptosis by increasing intracellular calcium levels
Authors: Xinhui Yang, Jiangtao Jiang, Xinyan Yang, Jichun Han, Qiusheng Zheng
Journal: Molecular medicine reports (2016): 911–919
Spautin-1 Ameliorates Acute Pancreatitis via Inhibiting Impaired Autophagy and Alleviating Calcium Overload
Authors: Juan Xiao, Xueping Feng, Xiao-Ying Huang, Zhongshi Huang, Yanqiang Huang, Chaogan Li, Genliang Li, Song Nong, Ruoshi Wu, Yongzhi Huang
Journal: Molecular Medicine (2016): 643
Delayed administration of the nucleic acid analog 2Cl-C. OXT-A attenuates brain damage and enhances functional recovery after ischemic stroke
Authors: Naohiko Okabe, Emi Nakamura, Naoyuki Himi, Kazuhiko Narita, Ikuko Tsukamoto, Tokumi Maruyama, Norikazu Sakakibara, Takehiro Nakamura, Toshifumi Itano, Osamu Miyamoto
Journal: Brain research (2013): 115–131
Ras guanyl nucleotide releasing protein 2 affects cell viability and cell–matrix adhesion in ECV304 endothelial cells
Authors: Junichi Takino, Kentaro Nagamine, Takamitsu Hori
Journal: Cell adhesion & migration (2013): 262–266
Involvement of thioredoxin-binding protein 2 in the antitumor activity of CD437
Authors: Saori Matsuoka, Hiroyuki Tsuchiya, Tomohiko Sakabe, Yumi Watanabe, Yoshiko Hoshikawa, Akihiro Kurimasa, Hiroaki Itamochi, Tasuku Harada, Naoki Terakawa, Hiroshi Masutani
Journal: Cancer science (2008): 2485–2490
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
货号 | 21001 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 25 mg | 价格 | 1008 | |
Ex (nm) | Em (nm) | |||
分子量 | 764.68 | 溶剂 | DMSO | |
产品详细介绍 |
简要概述
关键参数
分子量:764.68
CAS:126150-97-8
溶剂:DMSO
消光系数:N/A
Kd:nM
产品介绍
钙离子指示剂BAPTA,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂,BAPTA AM是BAPTA(1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N’,N’-四乙酸)的细胞渗透型,细胞可渗透的钙螯合剂。该BAPTA衍生物用于调节细胞和组织中的钙浓度。BAPTA是钙特异性氨基多羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛灵活性对钙和其他金属离子的配位至关重要。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子指示剂BAPTA,AM。
点击查看实验方案
钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
产品说明书
操作步骤
1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *储备液。
2.1BAPTA的量,AM * CAS 126150-97-8 *使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。
3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2mM丙磺舒的2X工作溶液。
3.1最终孔内浓度BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *:5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议BAPTA的最终浓度,AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,0.04%Pluronic F-127,1mM丙磺舒。
5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。
参考文献
Helicobacter pylori induces IL-1β protein through the inflammasome activation in differentiated macrophagic cells
Authors: Shoichiro Kameoka, Takeshi Kameyama, Takaya Hayashi, Seiichi Sato, Naomi Ohnishi, Takeru Hayashi, Naoko Murata-Kamiya, Hideaki Higashi, Masanori Hatakeyama, Akinori Takaoka
Journal: Biomedical Research (2016): 21–27
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Authors: Junichi Takino, Kentaro Nagamine, Takamitsu Hori
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Authors: Saori Matsuoka, Hiroyuki Tsuchiya, Tomohiko Sakabe, Yumi Watanabe, Yoshiko Hoshikawa, Akihiro Kurimasa, Hiroaki Itamochi, Tasuku Harada, Naoki Terakawa, Hiroshi Masutani
Journal: Cancer science (2008): 2485–2490
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产品名称 | 货号 |
钙离子指示剂BAPTA,AM 超纯级 | Cat#21002 |
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
货号 | 21002 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 25 mg | 价格 | 1272 | |
Ex (nm) | Em (nm) | |||
分子量 | 764.68 | 溶剂 | DMSO | |
产品详细介绍 |
简要概述
关键参数
分子量:764.68
CAS:126150-97-8
溶剂:DMSO
消光系数:N/A
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钙离子指示剂BAPTA,AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子指示剂,BAPTA AM是BAPTA(1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N’,N’-四乙酸)的细胞渗透型,细胞可渗透的钙螯合剂。该BAPTA衍生物用于调节细胞和组织中的钙浓度。BAPTA是钙特异性氨基多羧酸。四个羧酸官能团的存在使得两个钙离子的结合成为可能。羧酸盐配体的广泛灵活性对钙和其他金属离子的配位至关重要。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子指示剂BAPTA,AM。
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1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *储备液。
2.1BAPTA的量,AM * CAS 126150-97-8 *使用量:1毫克
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg BAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *与653.87μL无水DMSO混合。
3.在HHBS中制备含有10μMBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 * 4,0.08%Pluronic®F-127和2mM丙磺舒的2X工作溶液。
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3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLBAPTA,AM * CAS 126150-97-8 *,25.6μL10%Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议BAPTA的最终浓度,AM * CAS 126150-97-8 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
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5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
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Licochalcone A induces T24 bladder cancer cell apoptosis by increasing intracellular calcium levels
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Spautin-1 Ameliorates Acute Pancreatitis via Inhibiting Impaired Autophagy and Alleviating Calcium Overload
Authors: Juan Xiao, Xueping Feng, Xiao-Ying Huang, Zhongshi Huang, Yanqiang Huang, Chaogan Li, Genliang Li, Song Nong, Ruoshi Wu, Yongzhi Huang
Journal: Molecular Medicine (2016): 643
Delayed administration of the nucleic acid analog 2Cl-C. OXT-A attenuates brain damage and enhances functional recovery after ischemic stroke
Authors: Naohiko Okabe, Emi Nakamura, Naoyuki Himi, Kazuhiko Narita, Ikuko Tsukamoto, Tokumi Maruyama, Norikazu Sakakibara, Takehiro Nakamura, Toshifumi Itano, Osamu Miyamoto
Journal: Brain research (2013): 115–131
Ras guanyl nucleotide releasing protein 2 affects cell viability and cell–matrix adhesion in ECV304 endothelial cells
Authors: Junichi Takino, Kentaro Nagamine, Takamitsu Hori
Journal: Cell adhesion & migration (2013): 262–266
Involvement of thioredoxin-binding protein 2 in the antitumor activity of CD437
Authors: Saori Matsuoka, Hiroyuki Tsuchiya, Tomohiko Sakabe, Yumi Watanabe, Yoshiko Hoshikawa, Akihiro Kurimasa, Hiroaki Itamochi, Tasuku Harada, Naoki Terakawa, Hiroshi Masutani
Journal: Cancer science (2008): 2485–2490
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钙离子指示剂BAPTA,AM | Cat#21001 |