DNA残留检测试剂盒

DNA残留检测试剂盒

简要描述:对所使用的疫苗,我们Z关心的是疫苗的效果和其安全性。

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疫苗DNA残留对人体的潜在危害

对所使用的疫苗,我们zui关心的是疫苗的效果和其安全性。现在很多疫苗是细胞培养疫苗,比如重组(CHO细胞)乙肝疫苗,Vero细胞狂犬病疫苗等大多数疫苗都是用细胞培养的方法生产,而对疫苗的纯化是关键问题,我们要尽可能的去除宿主细胞DNA和宿主蛋白。假若宿主细胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人体将会产生不可预料的后果。就以疫苗DNA残留为例,疫苗DNA残留可能造成插入突变﹑导致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等,zui终造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA残留的相关法规

由于有如此潜在的危险性,所以许多机构对疫苗DNA残留制定了相关标准,1986年世界卫生组织规定用细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过100 pg /支 ,而在1998年世界卫生组织认为细胞系生产的疫苗DNA残留不能超过10 ng /支,而在1997年美国药品食品卫生监督局规定在美国使用的细胞系疫苗DNA残留不能超过10 pg /支,中国规定的细胞系疫苗DNA残留不能超过100 pg /支。

所以在疫苗生产中要随时对DNA残留进行检测,以便知道每个过程除掉DNA残留的能力。在每一批产品中我们必须检测DNA残留,所以我们必须运用敏感且行之有效的对DNA残留定量的检测方法。通常规定每支疫苗DNA残留不能超过100 pg,也就大约等同于17个甚至更少CHO细胞基因组DNA的含量,对如此微量的DNA残留进行检测,所用的技术方法就必须相当敏感和稳定,现在对DNA残留定量的方法主要有以下三种:
1、分子杂交技术检测DNA残留
2、基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® immunoassay)检测DNA残留
3、实时定量PCR法检测DNA残留

 

分子杂交技术检测DNA残留的原理和方法

分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝-酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝–酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,zui后可用不同的检测方式进行检测,发光检测和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下(表 1  三种DNA残留检测方法的比较)。

 

基于DNA结合蛋白的方法(Threshold® Immunoassay)检测DNA残留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的单抗与变性的宿主细胞DNA结合zui终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝–酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,zui后放于有尿素溶液的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

实时定量PCR法检测DNA残留的原理和方法

荧光定量PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测DNA残留含量的目的。

 

三种检测DNA残留方法的比较

3种方法用来检测疫苗DNA残留都要对样品进行相应的处理,这对zui终的结果的准确性至关重要。而杂交相对对样品DNA的损失小,而用Q-PCR需要提取样品的DNA,损失较大。在我们选择那种方法时我们要考虑它的稳定性,敏感性,成本等以至找到*的性价比的方法(表 1),从表1 我们不难发现使用分子杂交的方法是一种比较可行经济实用的方法,目前国内也主要是用此方法。

表 1  三种DNA残留检测方法的比较

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特异性

物种特异性

无特异性

序列特异性

检测的zui小序列长度(bp)

50

600

150

抗干扰性和稳定性

++

+

+

所需时间(h)

48

6

2

敏感性(pg)

10

6

<1

初期花费($)

1200

>40000

>70000

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II试剂盒产品简介

产品中文名称:高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II

罗氏应用科学部(Roche Applied Science)是zui早致力于向用户提供非放射标记技术的公司之一,让更多的科研工作者们可以避免使用危险的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II(第二代)是由罗氏公司研发,并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(*代)的基础上优化升级的,具有更高的准确性、更好的灵敏度、操作时间更短等特点。自1995年地高辛产品上市以来,尽管有定量PCR技术的应用,DIG系统仍然是非放射性高效标记—检测技术的*,被广泛地应用各种膜杂交及原位杂交技术中。

 

高效DNA地高辛标记和检测试剂盒II 图片

 

欲了解详细信息请咨询 

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II检测原理

该产品是用地高辛(地高辛:英文名Digoxigenin,简称DIG;又称异羟基洋地黄毒甙元,是一种类固醇半抗原分子)标记的DNA探针,应用于分子杂交和随后的化学发光检测。检测主要分三阶段进行:1. DNA标记:根据随机引物标记技术,生成DIG地高辛标记的DNA探针。 2. 杂交:按照标准杂交方法进行,将地高辛标记的DNA探针用于核酸点杂交,可选择带正电的尼龙膜或纯硝–酸纤维素膜作为杂交膜。 3. 免疫学检测:首先将标记有AP的地高辛抗体与杂交探针免疫结合;然后在477 nm波长下,通过检测碱性磷酸酶与CSPD底物产生的化学发光反应的数值,从而达到免疫检测的目的。

 

罗氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的显著特点

★ Accurate and fast—–使用预混合的高效地高辛(DIG)标记的随机引物可以缩短标记DNA探针的操作时间,提高标记物的产量。
★ Sensitive—–在人类DNA的复合物和植物基因组中,可以检测到单个拷贝的基因。
★ Time-saving—–地高辛(DIG)标记的探针可以储存一年以上,杂交液可以反复使用3~5次(具体要根据每次杂交过程中标记探针产生信号的强弱来确定)。

 

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           蛋白酶K

 

11745832910

Product Quantity  Cat. No.
Qubit® 2.0 Fluorometer Each Q32866
Qubit® Quantitation Starter Kit Each Q32871
Qubit® Quantitation Lab Starter Kit Each Q32872
Qubit® dsDNA BR Assay Kit 100 assays, 2–1000 ng
500 assays, 2–1000 ng
Q32850
Q32853
Qubit® dsDNA HS Assay Kit 100 assays, 0.2–100 ng
500 assays, 0.2–100 ng
Q32851
Q32854
Qubit® ssDNA Assay Kit 100 assays, 1–200 ng Q10212
Qubit® RNA Assay Kit 100 assays, 5–100 ng
500 assays, 5–100 ng
Q32852
Q32855
Qubit® RNA BR Assay Kit 100 assays, 20–1000 ng
500 assays, 20–1000 ng
Q10210
Q10211
Qubit® Protein Assay Kit 100 assays, 0.25–5 μg
500 assays, 0.25–5 μg
Q33211
Q33212
Qubit® Assay Tubes Set of 500 Q32856