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mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

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mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
包邮

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Product details

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160

货号                    1160                     存储条件 f/l
规格 1 mg
Ex (nm) 552 Em (nm) 564
分子量 1838.37 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

        mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料，mFluor 染料是一系列 的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用 小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

        琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：当使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前，还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，对于特定的标记反应，可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意：该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率显着降低。为获得标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到mFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合之前准备染料储备溶液（溶液B）及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。 避免冻融循环。

3.确定染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比率的蛋白质结合物会降低灵敏度。 我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2进行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1; 分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，以确定染料/蛋白质比例，以扩大您的标记反应。

4.运行结合反应：

4.1在有效摇动下，将适量的染料储备溶液（溶液B）加入到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中。

注意：溶液B /溶液摩尔比由步骤3.6确定。 如果跳过步骤3，我们建议使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在树脂顶部表面下方运行后立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21506-AAT Bioquest荧光染料

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Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21506
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

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Product details

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21506

；  2849036341

简要概述

产品基本信息

货号：21506

产品名称：Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：331.28

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：335

发射波长(nm)：460

产品介绍

        Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Thiolite Blue是用于测量硫醇化合物的 灵敏的传感器之一。与硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反应后，会生成蓝色荧光加合物。它可用于定量蛋白质上的半胱氨酸数量。我们用它来荧光测量谷胱甘肽。与含硫醇的化合物反应后，其荧光增强> 200倍。Thiolite Blue由于具有相似的光谱特性，因此是mBBr（单溴双马胺）的替代品。与mBBr相比，Thiolite Blue的硫醇加合物比mBBr具有更稳定的荧光和吸收，使其比溴比马胺灵敏得多。Thiolite Blue经过优化，可用于细胞内硫醇检测。它是无荧光的外部细胞，省去了洗涤步骤并减少了测定背景。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针。 

链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记 货号16935-AAT Bioquest荧光染料

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链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记 货号16935
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
100 ug
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

 

链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记

链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记 货号16935

货号 16935 存储条件                     f/l
规格                      100 ug                                    
Ex (nm) 552 Em (nm) 564
分子量 ~52000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：16935

产品名称：链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记

规格：100ug

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：505

发射波长(nm)：564

产品介绍

        链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素，链霉亲和素缀合物与生物素缀合物一起广泛用于特异性检测多种蛋白质，蛋白质基序，核酸和其他分子，因为链霉亲和素对生物素具有非常高的结合亲和力。该mFluor Blue 570-链霉亲和素偶联物包含链霉亲和素（作为生物素结合蛋白）和共价连接的mFluor Blue 570（作为荧光标记）。当与生物素化的一抗结合使用时，通常用作间接免疫荧光染色的 步试剂。对于使用配备了488 nm激发的流式细胞仪（例如，Blue Laser）进行基于生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试，它是非常有价值的工具。多种互补的生物素化试剂可从许多商业供应商处获得。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的链霉亲和素偶联物 mFluor Blue 570-标记。

荧光染料Forte Blue DHPE 货号23303-AAT Bioquest荧光染料

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荧光染料Forte Blue DHPE 货号23303
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

荧光染料Forte Blue DHPE

荧光染料Forte Blue DHPE 货号23303

简要概述

产品基本信息

货号：23303

产品名称：荧光染料Forte Blue  DHPE

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：944.13

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：356

发射波长(nm)：456

产品介绍

Forte Blue  DHPE是一种磷脂，在头部用明亮的蓝色荧光标记。Forte Blue  DHPE用强的365nm汞弧光灯/UV激光谱线对DHPE进行了激发，并在460nm附近表现出明亮的蓝色荧光。值得注意的是，这种新开发的7-羟基香豆素衍生物的低pKa值比7-羟基香豆素类似物低2“3个对数单位。Forte Blue  DHPE在膜中甚至在中性pH下都有强烈的荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的荧光染料Forte Blue  DHPE。 

mFluor Blue 570 酸 货号1143-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Blue 570 酸 货号1143
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
5mg
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

mFluor Blue 570 酸

mFluor Blue 570 酸 货号1143

简要概述

      mFluor bule 540 酸 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的 便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯（SE）显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性，并形成羧酰胺键，其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色，荧光原位杂交，流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应（2×50μg蛋白质）的所有必需成分。。抗体标记试剂盒mFluor blue 540 酸是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

      将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

为了标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将5L（总反应体积的10％）的反应缓冲液（组分B）与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2：为了标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（来自Millipore的cat＃UFC501008）去除游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）广泛用于蛋白质沉淀。

注4：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。

注5：如果蛋白质浓度小于1 mg / mL，则结合效率显着降低。为获得标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

2.运行结合反应：

2.1将蛋白质溶液（溶液A）加入一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注意：使用标记染料的两个小瓶（组分A）通过将100μg蛋白质分成2×50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

3.停止共轭反应：

3.1添加5 L（对于50μg蛋白质）或10L（对于100μg蛋白质），其为TQ染色猝灭缓冲液（组分C）的总反应体积的10％到缀合反应混合物中（来自步骤2.2），将它们混合 好。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质（抗体）现在可以使用了。

mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161* 货号104310T0-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

货号 104310T0 存储条件
规格 100 tests 价格 2880
Ex (nm) 553 Em (nm) 565
分子量 N/A 溶剂
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：104310T0

产品名称：mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

规格：100 tests

 

产品介绍

HI161 单克隆抗体与人 CD43 反应，CD43 是一种 95 – 135 kD 的跨膜蛋白，通常位于浆细胞、胸腺细胞、中性粒细胞、骨髓瘤和 T 细胞的表面。在一些生物体中，CD43在下调细胞粘附、促进肿瘤坏死因子的生物合成过程和负调节T细胞增殖方面发挥作用。从研究的角度来看，由于它与重要的大分子/配体（如 EZR）相关，因此具有生物学意义。 CD43 是一种相当少见的抗体靶标，在过去十年中发表的文章仅仅 5000 篇。尽管如此，CD43 已广泛用于免疫学研究，在流式细胞仪应用中经常用作区分细胞类型的表型标记。该抗体通过亲和层析纯化，并与 mFluor™ Blue 570 (ex/em = 553/565 nm) 偶联。它与 561 nm 光和 582/15 nm 带通滤光片兼容（例如，在 BD FACSMelody™ 中）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*。 

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mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161* 货号104310T1-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

货号 104310T1 存储条件
规格 500 tests 价格 10800
Ex (nm) 553 Em (nm) 565
分子量 N/A 溶剂
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：104310T1

产品名称：mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*

规格：500 tests

 

产品介绍

HI161 单克隆抗体与人 CD43 反应，CD43 是一种 95 – 135 kD 的跨膜蛋白，通常位于浆细胞、胸腺细胞、中性粒细胞、骨髓瘤和 T 细胞的表面。在一些生物体中，CD43在下调细胞粘附、促进肿瘤坏死因子的生物合成过程和负调节T细胞增殖方面发挥作用。从研究的角度来看，由于它与重要的大分子/配体（如 EZR）相关，因此具有生物学意义。 CD43 是一种相当少见的抗体靶标，在过去十年中发表的文章仅仅 5000 篇。尽管如此，CD43 已广泛用于免疫学研究，在流式细胞仪应用中经常用作区分细胞类型的表型标记。该抗体通过亲和层析纯化，并与 mFluor™ Blue 570 (ex/em = 553/565 nm) 偶联。它与 561 nm 光和 582/15 nm 带通滤光片兼容（例如，在 BD FACSMelody™ 中）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供mFluor Blue 570 抗人 CD43 抗体 *HI161*。 

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Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21507-AAT Bioquest荧光染料

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Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21507
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
5mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针

简要概述

产品基本信息

货号：21507

产品名称：Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：289.24

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：335

发射波长(nm)：460

产品介绍

        Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Thiolite Blue是用于测量硫醇化合物的 灵敏的传感器之一。与硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反应后，会生成蓝色荧光加合物。它可用于定量蛋白质上的半胱氨酸数量。我们用它来荧光测量谷胱甘肽。与含硫醇的化合物反应后，其荧光增强> 200倍。Thiolite Blue由于具有相似的光谱特性，因此是mBBr（单溴双马胺）的替代品。与mBBr相比，Thiolite Blue的硫醇加合物比mBBr具有更稳定的荧光和吸收，使其比溴比马胺灵敏得多。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针。 

Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21507

mFluor Blue 620琥珀酰亚胺酯 货号1163-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

mFluor Blue 620琥珀酰亚胺酯 货号1163
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

简要概述

产品基本信息

货号：1163

产品名称：mFluor 蓝色 620 SE

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：1743.06

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：589

发射波长(nm)：616

产品介绍

mFluor Blue 620染料可以用488 nm的蓝色激光充分激发。它具有很大的斯托克斯位移，发射波长约为620 nm。 mFluor Blue 620染料是水溶性的，用mFluor Blue 620染料制备的蛋白偶联物在488 nm处被激发，产生红色荧光。 mFluor Blue 620染料和结合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色激光试剂。与RPE相比，mFluor Blue 620染料具有更高的光稳定性，使其易于用于荧光成像应用，而由于RPE共轭物的快速光漂白，很难将RPE共轭物用于荧光成像应用。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料，因为很少有具有这种光谱特征的现有染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的mFluor 蓝色620 SE。

mFluor Blue 620琥珀酰亚胺酯 货号1163

Forte Blue DHPE 货号23303-AAT Bioquest荧光染料

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Forte Blue DHPE 货号23303
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
1mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

荧光染料Forte Blue DHPE

Forte Blue DHPE 货号23303

简要概述

产品基本信息

货号：23303

产品名称：荧光染料Forte Blue  DHPE

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：944.13

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：356

发射波长(nm)：456

产品介绍

Forte Blue  DHPE是一种磷脂，在头部用明亮的蓝色荧光标记。Forte Blue  DHPE用强的365nm汞弧光灯/UV激光谱线对DHPE进行了激发，并在460nm附近表现出明亮的蓝色荧光。值得注意的是，这种新开发的7-羟基香豆素衍生物的低pKa值比7-羟基香豆素类似物低2“3个对数单位。Forte Blue  DHPE在膜中甚至在中性pH下都有强烈的荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的荧光染料Forte Blue  DHPE。 

ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 *200X* 货号17300-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 *200X*

ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 *200X*

货号 17300 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 1140
Ex (nm) Em (nm)
分子量 N/A 溶剂
产品详细介绍

简要概述

产品介绍

ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 是一种 200X 浓缩的即用型惰性染料，可增强实时 PCR 反应的可见性，从而实现准确的移液和板装载。当按照指示使用时，染料的存在不会对 PCR 反应的性能产生不利影响，并且不会干扰 Helixyte Green-、SYBR® Green- 或其他探针的检测。它针对各种实时 PCR 混合物和试剂盒进行了优化，包括含有 ROX 的混合物以及用于 FAST 和常规反应时间的混合物。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 *200X*。 

产品说明书

样品分析方案 

操作步骤

以下方案仅作为指导，开始实验前，ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料必须完全解冻至室温。

1.在主混合物中添加染料：

1.1 将 1 µL ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料与包含引物、TaqMan 探针或 DNA 染料的 100 µL TAQuest qPCR Master Mix（2X master mix）混合。

1.2 彻底混合各组分，然后短暂离心以将溶液收集在管底。 储存在冰上，避光。

1.3对于 20 μL PCR 反应，将 10 μL 的 qPCR 主混合物与 10 μL 的 DNA 样本混合。 建议放在白色背景上以提高可见度。

注意ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料也可能与各种预混液兼容，但应由用户验证以获得性能。

 

2.在 DNA 或 RNA 样品中添加染料：

2.1 将 1 µL ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料与100 µL 含有 DNA 或 RNA 的样品混合

2.2 彻底混合各组分，然后短暂离心以将溶液收集在管底。 储存在冰上，避光。

2.3 对于 20 μL PCR 反应，将 10 μL 的 qPCR 主混合物与 10 μL 的 DNA 或 RNA 样品混合。 建议放在白色背景上以提高可见度。

  

参考文献

SYBR® Green RT-qPCR for the Universal Detection of Citrus Viroids.
Authors: Vidalakis, Georgios and Wang, Jinbo and Dang, Tyler and Rucker, Tavia and Bodaghi, Sohrab and Tan, Shi-Hua and Lavagi-Craddock, Irene and Syed, Alexandra and Uribe, Gerardo and Hsieh, Yi and Carbajal-Moreno, Joana
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2022): 211-217
[Typing of Leishmania Species Causing Cutaneous Leishmaniasis by Sybr Green Based ITS-1 Real Time Polymerase Chain Reaction Method].
Authors: Gürses, Gülcan and Yentür Doni, Nebiye and Yıldız Zeyrek, Fadile and Yiğin, Akın
Journal: Mikrobiyoloji bulteni (2022): 326-338
Development and validation of multiplex SYBR Green real-time PCR assays for detection and molecular surveillance of four tick-borne canine haemoparasites.
Authors: Padmaja, M and Singh, Harkirat and Panwar, Harsh and Jyoti, and Singh, Niraj Kumar and Singh, Nirbhay Kumar
Journal: Ticks and tick-borne diseases (2022): 101937
Comparison of analytical sensitivity and efficiency for SARS-CoV-2 primer sets by TaqMan-based and SYBR Green-based RT-qPCR.
Authors: Tao, Yile and Yue, Yang and Qiu, Guangyu and Ji, Zheng and Spillman, Martin and Gai, Zhibo and Chen, Qingfa and Bielecki, Michel and Huber, Michael and Trkola, Alexandra and Wang, Qiyuan and Cao, Junji and Wang, Jing
Journal: Applied microbiology and biotechnology (2022): 2207-2218
Establishment of SYBR green I-based quantitative real-time polymerase chain reaction for the rapid detection of a novel Chaphamaparvovirus in cats.
Authors: Liu, Xunbi and Li, Shuyan and Liu, Xuan and Wang, Run and Xie, Xiangyu and Wu, Haiqiang and Wang, Yong
Journal: 3 Biotech (2022): 91
Multiplex SYBR Green real-time PCR for Lactobacillus acidophilus group species targeting biomarker genes revealed by a pangenome approach.
Authors: Kim, Eiseul and Kim, Dayoung and Yang, Seung-Min and Kim, Hae-Yeong
Journal: Microbiological research (2022): 127013
A SYBR Green-based real-time RT-PCR assay to differentiate the H1N1 influenza virus lineages.
Authors: Cong, Yulin and Sun, Yixue and Deng, Xiaoyu and Yu, Haiying and Lian, Xiaohuan and Cong, Yanlong
Journal: Journal of virological methods (2022): 114387
One-step SYBR green-based real-time RT-PCR assay for detection of foot-and-mouth disease virus circulating in India.
Authors: Biswal, Jitendra K and Jena, Biswa Ranjan and Ali, Syed Zeeshan and Ranjan, Rajeev and Mohapatra, Jajati K and Singh, Rabindra Prasad
Journal: Virus genes (2022): 113-121
Development and validation of cost-effective one-step multiplex RT-PCR assay for detecting the SARS-CoV-2 infection using SYBR Green melting curve analysis.
Authors: Sarkar, Shovon Lal and Alam, A S M Rubayet Ul and Das, Prosanto Kumar and Pramanik, Md Hasan Ali and Al-Emran, Hassan M and Jahid, Iqbal Kabir and Hossain, M Anwar
Journal: Scientific reports (2022): 6501
Development and application of SYBR Green Ⅰ real-time quantitative reverse transcription PCR assay for detection of swine Getah virus.
Authors: Xia, Yin-He and Shi, Zi-Cong and Wang, Xin-Wei and Li, Yong-Tao and Wang, Zeng and Chang, Hong-Tao and Liu, Hong-Ying and Chen, Lu and Wang, Chuan-Qing and Yang, Xia
Journal: Molecular and cellular probes (2021): 101730

说明书
ReadiView Blue 实时荧光定量 PCR 可视化染料 *200X*.pdf

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160 货号 1160 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 553 Em (nm) 565
分子量 1834.25 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料，mFluor 染料是一系列的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺表现出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：当使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前，还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，对于特定的标记反应，可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意：该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml）混合至100μL，以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记，叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显著降低。为获得标记效率，建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）。

3.6检测上述4种结合物，确定的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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产品名称 货号
mFluor Blue 570 酸 Cat#1143

说明书
mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯.pdf

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21506-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针

Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21506 货号 21506 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 1272
Ex (nm) 335 Em (nm) 460
分子量 331.28 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21506

产品名称：Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：331.28

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：335

发射波长(nm)：460

 

适用仪器

流式细胞仪  
激发： 350nm or 405nm 激光
发射： 450/40nm滤波片
通道： Pacific Blue通道
荧光显微镜  
激发： DAPI
发射： DAPI
推荐孔板： 黑色透明
荧光酶标仪  
激发： 340nm
发射： 460nm
cutoff: 420nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式

 

产品介绍

Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Thiolite Blue是用于测量硫醇化合物的最灵敏的传感器之一。与硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反应后，会生成蓝色荧光加合物。它可用于定量蛋白质上的半胱氨酸数量。我们用它来荧光测量谷胱甘肽。与含硫醇的化合物反应后，其荧光增强> 200倍。Thiolite Blue由于具有相似的光谱特性，因此是mBBr（单溴双马胺）的绝佳替代品。与mBBr相比，Thiolite Blue的硫醇加合物比mBBr具有更稳定的荧光和吸收，使其比溴比马胺灵敏得多。Thiolite Blue经过优化，可用于细胞内硫醇检测。它是无荧光的外部细胞，省去了洗涤步骤并减少了测定背景。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Thiolite  Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针。 

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参考文献

Gas Chromatography/Mass Spectrometry-Based Metabolomic Profiling Reveals Alterations in Mouse Plasma and Liver in Response to Fava Beans
Authors: Man Xiao, Guankui Du, Guobing Zhong, Dongjing Yan, Huazong Zeng, Wangwei Cai
Journal: PloS one (2016): e0151103

Virus-like particles with removable cyclodextrins enable glutathione-triggered drug release in cells
Authors: Kenichi Niikura, Naotoshi Sugimura, Yusuke Musashi, Shintaro Mikuni, Yasutaka Matsuo, Shintaro Kobayashi, Keita Nagakawa, Shuko Takahara, Chie Takeuchi, Hirofumi Sawa
Journal: Molecular biosystems (2013): 501–507

说明书
Thiolite Blue, AM硫醇化合物蓝色荧光探针.pdf

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯 货号1180-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯 货号1180 货号 1180 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 481 Em (nm) 663
分子量 747.91 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：1180

产品名称：mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

规格：1mg

储存条件：-15℃干燥

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：747.91

外观：固体

溶剂：DMSO

 

产品介绍

mFluor Blue 660染料可用488 nm的蓝色激发光充分激发。它具有巨大的斯托克斯位移，发射波长约为660 nm。mFluor™Blue 660染料是水溶性的，用mFluor™Blue 660染料制备的蛋白质结合物在488 nm处被激发，产生红色荧光。mFluor™Blue 660染料和缀合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色荧光试剂。与RPE相比，mFluor™Blue 660染料具有更高的光稳定性，使其易于用于荧光成像应用，而由于RPE缀合物的快速光漂白，很难将RPE缀合物用于荧光成像应用。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料，因为很少有具有这种特殊光谱特征的现有染料。

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参考文献

A Comprehensive Workflow for Applying Single-Cell Clustering and Pseudotime Analysis to Flow Cytometry Data.
Authors: Melsen, Janine E and van Ostaijen-Ten Dam, Monique M and Lankester, Arjan C and Schilham, Marco W and van den Akker, Erik B
Journal: Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) (2020)

Acquisition of High-Quality Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Fox, Amy and Dutt, Taru S and Karger, Burton and Obregón-Henao, Andrés and Anderson, G Brooke and Henao-Tamayo, Marcela
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e74

HTLV infected individuals have increased B-cell activation and proinflammatory regulatory T-cells.
Authors: Kjerulff, Bertram and Petersen, Mikkel Steen and Rodrigues, Candida Medina and da Silva Té, David and Christiansen, Mette and Erikstrup, Christian and Hønge, Bo Langhoff
Journal: Immunobiology (2020): 151878

High-Dimensional Data Analysis Algorithms Yield Comparable Results for Mass Cytometry and Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mayer, Johannes U and Old, Samuel and Hermans, Ian F and Irish, Jonathan and Price, Kylie M
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

High-dimensional analysis of intestinal immune cells during helminth infection.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mehta, Palak and Harmos, Phoebe and Schmidt, Alfonso J and Chappell, Sally and Price, Kylie M and Hermans, Ian F and Ronchese, Franca and le Gros, Graham and Mayer, Johannes U
Journal: eLife (2020)

Multispectral Flow Cytometry: Unaddressed Issues and Recommendations for Improvement.
Authors: Parks, David R
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Panel Design and Optimization for High-Dimensional Immunophenotyping Assays Using Spectral Flow Cytometry.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Pellefigues, Christophe and Mayer, Johannes U and Small, Sam J and Jaimes, Maria C and Price, Kylie M
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e70

Phenotypic Analysis of the Mouse Hematopoietic Hierarchy Using Spectral Cytometry: From Stem Cell Subsets to Early Progenitor Compartments.
Authors: Solomon, Michael and DeLay, Monica and Reynaud, Damien
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Spectral flow cytometry-Quo vadimus?
Authors: Robinson, J Paul
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 823-824

Time-Delayed Integration-Spectral Flow Cytometer (TDI-SFC) for Low-Abundance-Cell Immunophenotyping.
Authors: Hu, Wenting and Soper, Steven A and Jackson, J Matt
Journal: Analytical chemistry (2019): 4656-4664

说明书
mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯.pdf

Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针 货号21507-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针

Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针

货号 21507 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1272
Ex (nm) 335 Em (nm) 460
分子量 289.24 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21507

产品名称：Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：289.24

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：335

发射波长(nm)：460

 

产品介绍

Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Thiolite Blue是用于测量硫醇化合物的最灵敏的传感器之一。与硫醇化合物（例如GSH和半胱氨酸）反应后，会生成蓝色荧光加合物。它可用于定量蛋白质上的半胱氨酸数量。我们用它来荧光测量谷胱甘肽。与含硫醇的化合物反应后，其荧光增强> 200倍。Thiolite Blue由于具有相似的光谱特性，因此是mBBr（单溴双马胺）的绝佳替代品。与mBBr相比，Thiolite Blue的硫醇加合物比mBBr具有更稳定的荧光和吸收，使其比溴比马胺灵敏得多。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Thiolite  Blue硫醇化合物蓝色荧光探针。 

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参考文献

Gas Chromatography/Mass Spectrometry-Based Metabolomic Profiling Reveals Alterations in Mouse Plasma and Liver in Response to Fava Beans
Authors: Man Xiao, Guankui Du, Guobing Zhong, Dongjing Yan, Huazong Zeng, Wangwei Cai
Journal: PloS one (2016): e0151103

Virus-like particles with removable cyclodextrins enable glutathione-triggered drug release in cells
Authors: Kenichi Niikura, Naotoshi Sugimura, Yusuke Musashi, Shintaro Mikuni, Yasutaka Matsuo, Shintaro Kobayashi, Keita Nagakawa, Shuko Takahara, Chie Takeuchi, Hirofumi Sawa
Journal: Molecular biosystems (2013): 501–507

说明书
Thiolite Blue硫醇化合物蓝色荧光探针.pdf

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯 货号1178-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯 货号1178 货号 1178 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 485 Em (nm) 580
分子量 832.98 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

光谱流式细胞仪的进步已经超越了常规流式细胞仪的应用范围和功能。现在，借助光谱流式细胞仪分析，研究人员和科学家们可以研究越来越多的目标分子。然而，荧光标记和读数的可用性严重限制了光谱流式细胞术的潜力。AAT Bioquest的mFluor™染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发，尤其是用于光谱荧光流式细胞仪。mFluor™Blue 580染料可以用488 nm的蓝色激光充分激发。它具有巨大的斯托克斯位移，发射波长约为580 nm。mFluor™Blue 580染料是水溶性的，用mFluor™Blue 580染料制备的蛋白质偶联物在488 nm处被激发，产生红色荧光。mFluor™Blue 580染料和结合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色荧光试剂。与RPE相比，mFluor™Blue 580染料具有更高的光稳定性，使其易于用于荧光成像应用，而由于RPE共轭物的快速光漂白，很难将RPE共轭物用于荧光成像应用。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料，因为很少有具有这种光谱特征的现有染料。

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产品说明书

样品分析方案 

储备溶液配制

1.蛋白质储备液（溶液A）

将100 µL反应缓冲液（例如1 M碳酸钠溶液或pH值为9.0的1 M磷酸盐缓冲液）与900 µL目标蛋白溶液（例如抗体，如果可能，蛋白浓度> 2 mg / mL）混合，得到1 mL蛋白质标记储备液。
注意：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，请使用1 M碳酸氢钠溶液或1 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整为8.0-9.0。
注意：蛋白质应溶于pH 7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果将蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须使用pH 7.2-7.4的1X PBS进行透析，以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注意：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，结合效率会大大降低。为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.染料原液（溶液B）

在mFluor™蓝色580 SE小瓶中加入无水DMSO，制成10-20 mM的储备溶液。通过轻柔移液或涡旋混合均匀。
注意：开始缀合之前，请准备染料储备溶液（溶液B）。立即使用。染料储备溶液的长时间储存​​可能会降低染料活性。避免冻融循环。
注意：收到后，mFluor™蓝色580 SE应储存在<-15°C的环境中，并远离光线和湿气。
注意：重新配制的mFluor™染料SE的DMSO储备溶液可以在<-15°C下保存长达4周。
注意：所需的蛋白质偶联物应在载体蛋白质（例如0.1％牛血清白蛋白）存在的情况下以> 0.5 mg / mL的浓度保存。当在2 mM叠氮化钠存在下存储时，结合物溶液可以在4°C下存储两个月而无明显变化。为了更长的存储时间，可以将蛋白结合物冻干或分成单份使用，并保存在≤-60°C下，并避光。

 

操作步骤

该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor™蓝色580 SE的缀合物而开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

确定最佳的染料/蛋白质比率（可选）

每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比率，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您使用一系列不同量的标记染料溶液，通过实验确定最佳的染料/蛋白质比率。通常，大多数染料-蛋白质结合物推荐使用4-6种染料/蛋白质。

  1. 以溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的10：1摩尔比为起点：将5 µL染料储备溶液（溶液B，假定染料储备溶液为10 mM）添加到蛋白质瓶中。溶液（95 µL溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10 mg / mL，蛋白质的分子量为〜200KD，则蛋白质的浓度约为0.05 mM。
    注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应小于10％。
  2. 进行缀合反应。
  3. 重复步骤2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1；15：1和20：1。
  4. 使用预制的旋转柱纯化所需的结合物。
  5. 计算上述4种结合物的染料/蛋白质比率（DOS）。
  6. 对以上4种结合物进行功能测试，以确定最佳的染料/蛋白质比率，以扩大标记反应的范围。 
运行缀合反应
  1. 在有效摇动下，将适量的染料储备溶液（溶液B）添加到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中。
    注意：溶液B /溶液的最佳摩尔比由上述步骤确定。如果跳过该步骤（本节：确定最佳的染料/蛋白质比），我们建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10：1。
  2. 在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟。 
纯化

以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化染料-蛋白质偶联物的示例。

  1. 准备Sephadex G-25色谱柱。
  2. 将反应混合物（进行共轭反应后的混合物）加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
  3. 样品刚好在顶部树脂表面下方流动时，立即添加PBS（pH 7.2-7.4）。
  4. 向所需样品中添加更多PBS（pH 7.2-7.4），以完成柱纯化。
    注意：为了立即使用，染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并分装多次使用。
    注意：为了长期保存，染料-蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。 

 

参考文献

A Comprehensive Workflow for Applying Single-Cell Clustering and Pseudotime Analysis to Flow Cytometry Data.
Authors: Melsen, Janine E and van Ostaijen-Ten Dam, Monique M and Lankester, Arjan C and Schilham, Marco W and van den Akker, Erik B
Journal: Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) (2020)

Acquisition of High-Quality Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Fox, Amy and Dutt, Taru S and Karger, Burton and Obregón-Henao, Andrés and Anderson, G Brooke and Henao-Tamayo, Marcela
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e74

HTLV infected individuals have increased B-cell activation and proinflammatory regulatory T-cells.
Authors: Kjerulff, Bertram and Petersen, Mikkel Steen and Rodrigues, Candida Medina and da Silva Té, David and Christiansen, Mette and Erikstrup, Christian and Hønge, Bo Langhoff
Journal: Immunobiology (2020): 151878

High-Dimensional Data Analysis Algorithms Yield Comparable Results for Mass Cytometry and Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mayer, Johannes U and Old, Samuel and Hermans, Ian F and Irish, Jonathan and Price, Kylie M
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

High-dimensional analysis of intestinal immune cells during helminth infection.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mehta, Palak and Harmos, Phoebe and Schmidt, Alfonso J and Chappell, Sally and Price, Kylie M and Hermans, Ian F and Ronchese, Franca and le Gros, Graham and Mayer, Johannes U
Journal: eLife (2020)

Multispectral Flow Cytometry: Unaddressed Issues and Recommendations for Improvement.
Authors: Parks, David R
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Panel Design and Optimization for High-Dimensional Immunophenotyping Assays Using Spectral Flow Cytometry.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Pellefigues, Christophe and Mayer, Johannes U and Small, Sam J and Jaimes, Maria C and Price, Kylie M
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e70

Phenotypic Analysis of the Mouse Hematopoietic Hierarchy Using Spectral Cytometry: From Stem Cell Subsets to Early Progenitor Compartments.
Authors: Solomon, Michael and DeLay, Monica and Reynaud, Damien
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Spectral flow cytometry-Quo vadimus?
Authors: Robinson, J Paul
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 823-824

Time-Delayed Integration-Spectral Flow Cytometer (TDI-SFC) for Low-Abundance-Cell Immunophenotyping.
Authors: Hu, Wenting and Soper, Steven A and Jackson, J Matt
Journal: Analytical chemistry (2019): 4656-4664

说明书
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