国产Alamar Blue质量好价格低

阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测试剂

产品简介 
    阿尔玛蓝（Alamar Blue ）也称刃天青（Resazurin）、天兰化钠，树脂天青）是一种安全，无毒的蓝色染料。加入培养液中，可作为氧分子电子传递链的受体，呈现由蓝向红转变的颜色变化，反映所研究的细胞或微生物对氧分子的消耗，因而常被用作氧化还原指示剂，以显示被观察细胞和细菌的代谢活动。阿尔玛蓝的颜色改变可用光度计测定。阿尔玛蓝的粉红色细胞代谢产物 也可用荧光检测，其激发光波长在530-560 nm之间，发射光波长为590 nm。实验可以在微孔板中进行，如果用酶标仪检测结果，不仅检测操作更加简便，快速，而且可以对细胞和细菌的数量进行定量分析以及药物高通量筛选（High Throughput Screening, HTS），因此是一种简便、快捷、敏感、、安全而又经济的检测方法,可广泛地用于细胞增殖代谢，药物的细胞毒作用的体外测定以及病原微生物的的快速检测与鉴定。
    与台盼兰、TTC、MTT、MTS等分析法相比，阿尔玛蓝法具有更多的优势。阿尔玛蓝法采用单一试剂，可以连续、快速地检测细胞的增生状态。由于阿尔玛蓝对细胞无毒、无害，不影响细胞的抗体合成与分泌等活性，因此可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察，因此有操作简便和几乎不干扰细胞正常代谢的特点。 
   阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒体外检测试剂（Alamar Blue Reagent），以进口试剂为原料，经过滤除菌，配制而成的单试剂溶液，贮存稳定使用方便，可广泛用于细胞与分子生物学，微生物学、药学，肿瘤学等领域。
包装清单

    -20℃避光保存
使用说明
    1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。  
    2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5×103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。  
    3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞毒药物；  
    4．培养结束后，取出阿尔玛蓝试剂，置室温融化混匀，于洁净工作台内按10微升/孔加入微孔板中，在细胞培养箱内继续孵育12－24小时，培养液颜色由蓝变为粉红（如采用荧光分光光度法，只需孵育5－8小时）；   
    5．在570nm测定吸光度，参考波长600nm。如无此滤光片， 可用565 nm 和 610 nm的滤光片替代。 
    6．也可用荧光分光光度法检测，激发光波长在530-560 nm之间，发射光波长为590 nm。检测时间可在结果以荧光强度表示。
 

Alamar Blue 阿尔玛蓝细胞增殖及毒性检测试剂说明书

Alamar Blue 阿尔玛蓝细胞增殖及毒性检测试剂说明书

产品详情

产品描述

    阿尔玛蓝（Alamar Blue）是一种细胞活力检测试剂，包含一种具细胞膜渗透性、无毒性且弱蓝色荧光的指示剂，即刃天青 （resazurin）。自从1993年开始刃天青就作为一种值得信赖和可靠的试剂被引用。阿尔玛蓝是MTT（噻唑兰）的有效且无毒 替代物。阿尔玛蓝能定量检测人、哺乳动物、细菌、真菌和支原体细胞的增殖情况，也能用于细胞因子生物活性、细胞活力分 析、体外细胞毒性确定以及细胞生长监测。

运输与保存方法

保存：4℃避光保存，至少一年有效。运输：冰袋运输。

工作原理

刃天青（resazurin）是一种氧化还原（REDOX）指示剂，根据细胞代谢还原情况发生颜色变化。氧化态的刃天青呈紫蓝色且基本无荧光，其还原态产物试卤灵（resorufin）转变为粉红色且高度荧光，产生的荧光强度与呼吸活细胞数量呈正比。通过检测 ，呼吸过程中氧化水平，阿尔玛蓝用作一种定量检测细胞活力和毒性的直接指示剂。阿尔玛蓝的颜色变化可通过普通分光光度计 检测吸光度变化，检测波长为570nm，参考波长为600nm；阿尔玛蓝的荧光变化可通过荧光光度计检测，激发波长在 530~560nm之间，发射波长为590nm。

操作说明

一、制作标准曲线（测定最佳孵育时间和细胞数量）

1. 每孔加入100微升细胞悬液（对数生长期细胞），对细胞计数。按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。注：设置阴性对照：细胞培养基中不加入细胞；阳性对照：100微升100%还原型Alamar Blue（不含细胞）。

2. 每孔加入10微升Alamar Blue，阳性对照孔中加入10微升无菌的超纯水。

3. 放入细胞培养箱内培养（37℃,5% CO2）一定时间，培养基的颜色由靛青蓝开始变成粉红色就可以进入下一步。

4. 推荐用荧光分光光度计检测，激发光波长在530-560 nm之间，发射光波长为590 nm。

5. 普通分光光度计在570nm测定吸光度，参考波长600nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

6. 绘制标准曲线。以细胞数量或孵育时间为横坐标（X轴），Alamar Blue还原率为纵坐标（Y轴）。根据此标准曲线可以测定出适合的细胞数量或孵育时间（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致）。

 a）公式 1：通过吸光值来计算还原率

Alamar Blue 还原率（％）=[（E600×A570）–（E570×A600）]/[(E570′×C600)-（E600′×C570）] ×100；

E600=氧化态 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数；

E570=氧化型 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数；

A600=检测孔在 600nm 波长的吸光值；

A570=检测孔在 570nm 波长的吸光值；

E570′=还原态 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数；

E600′=还原态 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数；

C570=阴性对照孔在 570nm 波长的吸光值（不加细胞的培养基+Alamar Blue）；

C600=阴性对照孔在 600nm 波长的吸光值（不加细胞的培养基+Alamar Blue）；

b）公式 2：通过荧光值来计算还原率

Alamar Blue 还原率（％）=（实验组 FI 590-阴性对照组 FI 590）/（100%还原态 Alamar Blue 阳性对照 FI 590-阴性对照组 FI 590）×100

FI 590=590nm 发射波长（560nm 激发波长）下的荧光强度；

6. 绘制在每个特定细胞密度或孵育时间 Alamar Blue 的还原率。

a）对确定最佳细胞密度的实验，以细胞密度的对数（log）为 x 坐标，Alamar Blue 还原率为纵坐标；

b）对确定最佳孵育时间的实验，以孵育时间为 x 坐标，Alamar Blue 还原率为纵坐标；

c）根据以上曲线图来确定最佳细胞密度或孵育时间。

二、细胞毒性和细胞增殖检测

1. 每孔加入100微升细胞悬液（对数生长期细胞），对细胞计数。建议细胞数量为104/ml，具体每孔需要的细胞数量，需根据细胞类型决定。

2. 细胞中加入待检测药物，为检测药物对细胞增殖的作用，请设置合适的对照组，包括刺激细胞和非刺激细胞。

3. 混匀，放入细胞培养箱内孵育（37℃,5% CO2）一段时间。

4. 每孔加入10微升Alamar Blue。阳性对照孔中加入10微升无菌的超纯水。

5. 放入细胞培养箱内孵育（37℃,5% CO2）4-8h，最佳孵育时间取决于细胞类型。培养基的颜色由靛青蓝开始变成粉红色就可以进入下一步。

6. 推荐用荧光分光光度计检测，激发光波长在530-560 nm之间，发射光波长为590 nm。

7. 普通分光光度计在570nm测定吸光度，参考波长600nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

a）公式 3：通过吸光值来计算还原度的变化百分比

Alamar Blue 还原度变化百分比（％）=[（E600×A570）-（E570×A600）]/[( E600×P570)-（E570×P600）] ×100

E600=氧化态 Alamar Blue 在 600nm 波长的消光系数；

E570=氧化态 Alamar Blue 在 570nm 波长的消光系数；

A600=检测孔在 600nm 波长的吸光值；

A570=检测孔在 570nm 波长的吸光值；

P570=阳性对照孔在 570nm 波长的吸光值（不含待测药物的细胞+ Alamar Blue）

P600=阳性对照孔在 600nm 波长的吸光值（不含待测药物的细胞+ Alamar Blue）

结果判断：假如 Alamar Blue 还原度变化百分比（％）=62%，说明相对于对照孔，检测孔 Alamar Blue 的还原变化值为 62%，换句话而言，相对于对照孔，38%的检测孔细胞生长受到抑制。

b）公式 4：通过荧光值来计算还原度的变化百分比

Alamar Blue 还原度变化百分比（％）=（实验组 FI 590/阴性对照组 FI 590）×100 FI 590=590nm 发射波长（560nm 激发波长）下的荧光强度；

结果判断：假如 Alamar Blue 还原度变化百分比（％）=25%，说明相对于对照孔，检测孔 Alamar Blue 的 还原变化值为 25%，换句话而言，相对于对照孔，75%的检测孔细胞生长受到抑制。

注意事项

1） 还原态的 Alamar Blue 在水或水溶性缓冲液如 PBS 中很不稳定，但在培养基内非常稳定。为了确定特定实验还原态 Alamar Blue 的吸光度/荧光值，需准备 100%还原态 Alamar Blue 试剂：将 Alamar Blue与细胞培养基（含血清）按照 1:10 的比例混合，121℃高压灭菌 15min 即可。由于荧光值定义比较随意，仪器不同荧光值都可能发生变化，因此，测定 100%还原态 Alamar Blue 荧光值时必须要和样本测定使用相同的仪器和培养基。

2） 适宜的细胞密度能够增加检测灵敏度。对于 96 孔板，建议每孔接种 100μl 细胞，细胞浓度范围：贴壁细胞为 100-10,000 个/孔，悬浮细胞在 2,000-50,000 个/孔，以培养基为空白对照。对于 384 孔板，细胞浓度和接种量均减半。

3） 影响细胞对 Alamar Blue 反应的两大变量为孵育时间和铺板密度，建议实验前需先摸索优化这两个因素。细胞密度过高或孵育时间过长都会导致继发性还原反应，红色产物停止增加并开始衰减，导致吸光度/荧光水平明显下跌并伴随红色消失。

4） 微生物污染会还原 Alamar Blue。因此对被污染细胞使用 Alamar Blue 检测会引起错误结果。

5） Alamar Blue 可以用分光光度计或荧光计检测，但荧光灵敏度高，实验误差小，推荐荧光检测。

6） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。