Cell Meter 比色法WST-8细胞定量试剂盒

简要概述

我们的Cell Meter™检测试剂盒是一套用于监测细胞生存力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。 Cell Meter™比色WST-8细胞定量试剂盒使用水溶性WST-8四唑盐来定量活细胞的数量。水溶性WST-8四唑鎓盐在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸盐存在下进行生物还原后可生成水溶性橙色甲maz染料。该套件既方便又强大，具有混合读取格式。 WST-8溶液直接添加到测试池中，不需要预先混合组分。 WST-8四唑盐被细胞脱氢酶还原为橙色的甲maz产物，可溶于组织培养基。通过监测460 nm处的吸光度增加，甲maz的产生量与活细胞数量成正比。 WST-8溶液的出色稳定性和极小的细胞毒性使该试剂盒可用于需要长时间孵育（例如24至48小时）的测定。 Cell Meter™比色WST-8细胞定量试剂盒提供了一种灵敏的比色测定法，可用于测定增殖和细胞毒性测定中的活细胞数量。检测灵敏度高于任何其他基于四唑盐的检测方法，例如MTT，XTT或MTS等。

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产品说明书

简要概述

1. 在96孔板中制备细胞（100 µL /孔）

2. 每空加入10ul WST-8^TM溶液

3. 在37°C孵育1-4小时

4. 监测OD = 460 nm处的吸光度

如果将WST-8^TM溶液保存在4°C并避光，其稳定性可超过一年。 将其存放在<-20°C的温度下以便更长的存储时间。

操作步骤

细胞增殖和细胞毒性检测

1. 在具有透明底部的组织培养微孔板中培养细胞（5000到10,000个细胞/孔板）。

2. 将测试化合物添加到细胞中，并在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育，所需的时间根据具体实验而定（例如24、48或96小时）。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的测试化合物。 对于96孔板，建议的总体积为100 µL，对于384孔板，建议的总体积为50 µL。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定增殖或细胞毒性诱导的细胞密度。 对于增殖测定，使用较少的细胞； 对于细胞毒性测定，请使用更多的细胞。

3. 向每个孔中加入10 µL /孔（96孔板）或5 µL /孔（384孔板）的WST-8^TM溶液。

4. 将板在37°C下孵育1-4小时，避光。 注意：孵育时间可能从30分钟到过夜，具体取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

5. 用吸光度板酶标仪在OD = 460 nm处监测吸光度的增加。

细胞计数检测

1. 在具有透明底部的组织培养微孔板中准备细胞培养物。 对于96孔板，建议的总体积为100 µL；对于384孔板，建议的总体积为50 µL。 注意：我们在透明的底部96孔板中使用了连续稀释的HeLa和Jurkat细胞悬浮液进行测定。

2. 向每个孔中加入10 µL /孔（96孔板）或5 µL /孔（384孔板）的WST-8^TM溶液。

3. 将板在37°C下孵育1-4小时，避光。 注意：孵育时间可能从30分钟到过夜，具体取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4. 使用吸光度板读数器在OD = 460 nm处监测吸光度的增加。

数据分析

从空白标准孔获得的读数（Abs（460 nm））用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。 然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。 该方程式可用于计算细胞数/孔样品。 我们建议您使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下网址找到：https://www.aatbio.com/tools/linear-logarithmic-semi-log-regression-online-calculator