ReadiLink™AF750抗体快速标记试剂盒

简要概述

Readilink™蛋白标记技术是制备用于荧光成像和流式细胞仪应用的荧光抗体缀合物的强大，方便的工具之一。ReadiLink™AF750抗体快速标记试剂盒为制造AlexaFluor®750标记的抗体缀合物提供了便捷的工具（AlexaFluor®是ThermoFisher Scientific的商标）。此ReadiLink™试剂盒中使用的AF750染料相当稳定，并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。该试剂盒具有用于标记〜2×50 ug抗体的所有基本组分。试剂盒中提供的两个AF750染料小瓶中的每一个均经过优化，可标记约50 µg抗体。制备的AF750缀合物（与试剂盒一起使用）无需进一步纯化即可直接用于荧光成像和流式细胞术。它提供了制备AF750标记抗体的便捷方法。

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产品说明书

样品分析方案 

工作溶液配制

蛋白质工作溶液（溶液A）
为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须使用1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜（密理博公司的产品目录UFC501008）去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注意：抗体的纯度非常重要。
注意：为获得标记效率，建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。
重要：在打开之前，将所有组分加热并短暂离心小瓶，并在开始缀合之前立即准备所需的溶液。以下方案仅供参考。

操作步骤

进行缀合反应

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶标记染料（AF750-组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将其充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。

2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

停止缀合反应

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到结合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。

2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）现在可以使用了。 

蛋白质结合物的储存
蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质结合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。
 
图示

图1.HeLa细胞的免疫荧光分析，先用ReadiLink™快速AF750抗体标记试剂盒（＃1279）制备，然后用或不用小鼠抗微管蛋白染色，然后用Alpha Fluor™750山羊抗小鼠IgG缀合物染色。

AF 514 酸

	货号	1793	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	5 mg
	Ex (nm)	518	Em (nm)	543
	分子量	730.64	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：1793

产品名称：AF 514 酸

规格：5mg

储存条件：保存在冰箱-15℃干燥

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：730.64

外观：固体

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：518

发射波长(nm)：543

产品介绍

AF 514 由 AAT Bioquest研发生产的高水溶性染料，与 Alexa Fluor® 514 具有相同的化学结构（Alexa Fluor® 是 ThermoFisher 的商标）。 它是一种亮黄色荧光染料，可用于替代罗丹明 6G。 AF514 染料是水溶性的，并且在 pH 4 到 pH 10 范围内不敏感。AF514 酸是 Alexa Fluor® 514 与肽结合的 经济的胺反应形式染料。

链霉亲和素偶联物 AF350标记

简要概述

产品基本信息

货号：16890

产品名称：链霉亲和素偶联物 AF350标记

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：343

发射波长(nm)：441

产品介绍

        链霉亲和素偶联物 AF350标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素，链霉亲和素的结合物通常与生物素结合物一起使用，用于在蛋白质印迹，流式细胞仪，成像和显微镜以及微孔板检测中特异性检测多种蛋白质，蛋白质基序，核酸和其他生物分子。AF350-链霉抗生物素蛋白缀合物等效于AlexaFluor®350链霉抗生物素蛋白，其包含共价附接到AlexaFluor®350的生物素结合链霉亲和素（AlexaFluor®是ThermoFisher Scientific的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的链霉亲和素偶联物 AF350标记。 

AF488 酪胺

简要概述

        AF488酪胺是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，对于许多免疫组织化学（IHC）应用，传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是，有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明，酪胺信号放大（TSA）是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术，具有更高的检测灵敏度。TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力，该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现 IHC检测，酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中，源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号，并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。AF488酪胺含有明亮的AlexaFluor®488，可以使用标准FITC过滤器套件轻松检测（AlexaFluor®是ThermoFisher的商标）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF488酪胺。 

产品说明书

染色样品示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液，室温下在细胞或组织中5-10分钟

操作步骤

        在没有额外说明的情况下，所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

1.Tyramide原液（200X）：
将100μLDMSO加入小瓶中并充分混合。
注意：未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存。

2.Tyramide工作溶液（1X）：
将100μLTyramide原液加入20 mL含有0.003％H₂O₂的缓冲液中。
注意：Tris Buffer，pH = 7.4可用于获得性能。
注意：Tyramide工作溶液应立即使用。
注意：20 mL溶液适用于200次测试。

3.细胞固定和透化
3.1在室温下用PBS中的3.7％甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1％Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。

4.过氧化物酶标记
4.1任选：通过在过氧化物酶猝灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性。 在室温下用PBS冲洗两次。
4.2可选：如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白，建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液（例如含有1％BSA的PBS）在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液，加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次，每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液，在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次，每次5分钟。

5.Tyramide标记
5.1为每个样品准备并应用100μLTyramide工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。
注意：如果您观察到非特异性信号，可以缩短Tyramide的孵育时间。 您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。 或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Tyramide。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像
6.1根据需要对细胞或组织样本进行计数。 AAT提供了一系列细胞核复染试剂，如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
6.2使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
6.3使用适当的过滤器组可视化来自Tyramide标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

AF488-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

简要概述

产品基本信息

货号：16398

产品名称：AF488-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)

规格：1mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

产品物理化学光谱特性

分子量：N/A

溶剂：水

激发波长(nm)：494

发射波长(nm)：517

产品介绍

        AF488-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)是美国AAT Bioquest生产的荧光标记二抗，在偶联之前，我们的山羊抗兔IgG完整抗体已针对人IgG和人血清交叉吸附，以 程度地减少交叉反应。AF488标记山羊抗兔IgG偶联物是通过交叉吸附的山羊抗兔IgG整体抗体与AF594 NHS酯（与AlexaFluor®488 NHS酯相同的分子）反应而制备的（Alexa Fluor是ThermoFisher的商标） 。每个缀合物通常每个IgG分子具有4-6个荧光团。荧光二抗偶联物可用于检测，分选或纯化其指定的靶标，是荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜，流式细胞仪和荧光蛋白检测的理想选择。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的AF488-羊抗兔免疫球蛋白(H+L)。