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- 产品货号:
- BN12022
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- 中文名称:
- DNA 纯化回收试剂盒
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- 英文名称:
- Universal DNA Gel / PCR Purification Kit
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- 品牌:
- Biorigin
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货号
产品规格
售价
备注
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BN12022-100T
100T
¥350.00
常用生化试剂
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BN12022-250T
250T
¥850.00
常用生化试剂
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BN12022-50T
50T
¥190.00
常用生化试剂
产品描述
产品货号:BN12022
产品规格:50T, 100T
应用范围:DNA胶回收,PCR or 酶切产物纯化
产品简介
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中快速、可靠地回收DNA,从PCR、RFLP、磷酸化、标记、连接、杂交及其他酶促反应中纯化DNA 片段。100bp至20kb的DNA片段可通过Mini Column可纯化得到,回收率在50~90%。
产品构成
要点
DNA Wash Buffer:使用前将60 mL 96-100% 乙醇加入至每个 DNA Wash Buffer 瓶内。
100 mg 的凝胶相当于 100 µL 体积。
Buffer GC-A/B:低温易产生沉淀,使用前请于 37℃水浴加热至沉淀完全溶解。
65℃预热 Elution Buffer 或 ddH2O。
所有操作步骤(包括离心)均在室温下进行。
产品贮存及稳定性
本试剂盒自购买之日起可保存 12 个月。所有试剂及用品可保存于室温(15-25℃)。
实验前需准备的材料
小型台式离心机和 1.5 mL 离心管
55~65℃水浴锅
负压装置
96~100%乙醇
异丙醇(对于 200 bp 以下片段的回收)
操作步骤(离心法)
1.琼脂糖凝胶产物纯化:从凝胶上割下带有目的片段的凝胶到一个 1.5 mL 或 2.0 mL 离心管(称量估算凝胶的体积,确保加入不少于 1 倍体积的 Buffer GC-A),加入 1 倍体积的 Buffer GC-A,置于 55~60℃水浴 8~10 min,期间颠倒混匀 几次,直至凝胶完全融化,冷却离心管至室温。
PCR 产物纯化:加入 2 倍体积的 Buffer GC-B (如 100 μ L 的 PCR 反应液,加入 200 μ L Buffer GC-B),混合均匀,瞬时离心,将溶液收集到管底。
注:纯化 200 bp 以下的 PCR 产物,加入 5 倍体积的 Buffer GC-A/B 到 1 倍体积的 PCR 反应液。100 mg 的凝胶相 当于 100 μ L。200 bp 以下片段的纯化,请加入 1 倍体积的异丙醇。
2.转移上述混合液(每次不超过 700 μ L)至一个 Mini Column(自带 2 mL Collection Tube)),12,000 rpm 离心 1 min, 弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。重复此步骤至所有样品通过。
3.加入 600 μ L DNA Wash Buffer,12,000 rpm 离心 30 s,弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。
4.重复步骤 3。
注:确保使用前按要求加入乙醇至 DNA Wash Buffer 瓶内。
5.可选:琼脂糖凝胶产物纯化:加入 600 μ L 无水乙醇,12,000 rpm 离心 30 s,弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。
注:如果纯化的 DNA 产物用于对盐敏感的应用(如测序、平末端连接), 建议采用此步骤。
6.打开 Mini Column 盖子,12,000 rpm 离心 2 min,去除残留的乙醇。
注:开盖离心更有利于乙醇的去除。
7.转移 Mini Column 至一个 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer ( 65 ℃ 预热) 或 ddH2O (pH 在7.0~8.5),静置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。
可选:将洗脱下来的液体重新上柱,二次洗脱。
注:将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热,或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱,将会显著提高 DNA 回收率。
注:对于 8 kb 以上的片段,加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min。
注:第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。
操作步骤(负压/离心法)
1. 按照离心法中步骤 1 操作。瞬时离心以收集所有液体至管底。
2. 根据制造商指南安装负压设备,将 Mini Column 连接到负压装置上。
3. 小心转移混合液至 Mini Column 中,打开负压装置,允许液体通过柱子。
4. 加入 600 μ L DNA Wash Buffer,打开负压装置 1 min。
5. 重复步骤 4。
6. 可选:琼脂糖凝胶产物纯化:加入 600 μ L 无水乙醇,12,000 rpm 离心30 s,弃滤液,将Mini Column 放回2 mL Collection Tube。
7. 打开负压装置,干燥空柱子 5 min。 8. 将 Mini Column 转移至一个 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer 或 ddH2O,静置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。
注:将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热,或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱,将会显著提高 DNA 回收率。
注:第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。
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