支原体基因组DNA提取试剂盒(离心柱法)说明书

支原体基因组DNA提取试剂盒(离心柱法)说明书

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产品详情

货号

规格

价格

78EA10019-50T

50T

1200.00

产品描述

《支原体基因组 DNA 提取试剂盒》(离心柱法)(Mycoplasma Genomic DNA Extraction Kit with Columns)的操作方法和试剂配方已经针对支原体的特点做了优化,专门用于从体外培养的细胞、细胞上 清、血清、血浆、全血、生物制品等样品中提取支原体基因组 DNA。提取的支原体基因组 DNA 可用于《一 步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR 法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》。

支原体基因组 DNA 的提取有两个作用:

1)可以去除所有可能抑制 PCR 扩增的成分或者干扰《一步法 恒温支原体检测试剂盒》显色的成分,保证后续 PCR 扩增的正常进行或者《一步法恒温支原体检测试剂盒》 的显色不被干扰;

2)具有浓缩支原体 DNA 的作用,可以提高相对检测灵敏度 10-100 倍。

产品组分

蛋白酶 K 溶液:Proteinase K(20 mg/mL) 1 mL

溶液 GR:Buffer GR 15 mL

溶液 GL:Buffer GL 15 mL

清洗液 GW1:Buffer GW1(Concentrate) 13 mL

清洗液 GW2:Buffer GW2(Concentrate) 15 mL

洗脱液 EB:Elution Buffer EB 15 mL

吸附柱:Spin Columns DM 50 个

收集管:Collection Tube 50 个

使用方法

使用方法

1.实验前准备及重要注意事项

1) Buffer GW1 和 Buffer GW2 的配制:第一次使用前,应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇,并在试剂瓶标签中做好标记。

2) 使用前请检查 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将 Buffer GL 于 56˚C 水 浴孵育重新溶解。

2. 样品处理:本试剂盒优选体外培养的细胞上清(贴壁细胞直接取细胞培养上清、悬浮培养细胞取低速 离心后的离心上清)、血清、血浆、溶液型生物制品作为提取支原体基因组 DNA 的样品。如果是粉末 型样品,需用水溶解后,再进行后续操作。

1:体外培养的贴壁细胞培养上清或悬浮细胞,经 1200 rpm(约 150 g)低速离心 5 分钟后(切 记:此步骤离心力不能太大,否则支原体会被离心去除了!),取离心后上清进行检测。

2:如果初始样品是加了抗凝剂的全血,经 1200 rpm(约 150 g)低速离心 10 分钟后(切记: 此步骤离心力不能太大,否则支原体会被离心去除了!),取上层血浆进行检测。

3:如果初始样品是未加抗凝剂的全血,待血液凝固后,取血清进行检测。

3. 取上述细胞上清、血清、血浆、生物制品等样品 200 μL,用移液枪吹吸均匀后,进行后续操作。

1:当样品量小于 200 μL 时,加入 Buffer GR 补足至 200 μl,再进行下一步实验。

2:如果预期待测样品支原体含量较少(比如长期低温保存的血清、血浆、胰酶、生物制品等), 可以取上述样品 1 mL,加入 1.5 mL 离心管内,13000 rpm(约 16000 g)高速离心 5 分钟。吸走 离心后的上清 800 μL,剩余 200 μL 用移液枪吹吸均匀后,进行后续操作。此步骤起浓缩支原体的 作用,从而提高支原体检测的相对灵敏度。如果需要,上述样品的体积可以进一步放大,经过多 次高速离心后,剩余 200 μL 用于后续操作(比如,如果初始体积是 5 mL,经 5 次高速离心,取剩 余的 200 μL 进行后续操作,最终用 50 μL 洗脱液进行洗脱,则支原体 DNA 大约浓缩了 100 倍,支 原体检测的相对灵敏度也大约提高了 100 倍。)

4. 向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K(20 mg/mL)溶液,混匀。

5. 加入 200 μL Buffer GL(如果室温较低,使用前请检查 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶 或者沉淀,请将 Buffer GL 于 56˚C 水浴孵育重新溶解),用吸头充分吹吸均匀或用 Vortex 充分震荡。

注意:不要将 Proteinase K 和 Buffer GL 进行预混,否则 Proteinase K 可能失活。

6. 将离心管放置 56˚C 水浴,孵育 15 分钟。

注意:此步骤不能省略!

7. 加入 2 μL 支原体 qPCR 内参质粒 mycoIC2(注意:内参质粒 mycoIC2 请吹吸均匀后,再加入。内参质粒 mycoIC2 只在本公司《探针法支原体检测试剂盒》内含有,如果使用其他支原体检测方法,本步骤可以 跳过!)。

1:此步骤只有使用本公司《探针法支原体检测试剂盒》时,需要加入支原体 qPCR 内参质粒 mycoIC2。

2:加入的内参质粒 mycoIC2 用于监控支原体 DNA 的提取和后续支原体 qPCR 的扩增是否有效。

8. 加入 200 μL 无水乙醇,上下颠倒混匀数次。 l 注意:此处不能高速离心!如果需要(一般不需要离心),只能 1000 rpm(约 100 g)低速短暂 离心(20 Sec),使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

9. 用 1 mL 吸头将所得溶液全部(含管壁和盖子上溶液)加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM) 中。12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

10.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇!),盖上盖子,将吸附柱快速颠倒 一次(目的:清洗管壁和盖子中的杂质),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱 重新放回收集管中。

11.向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇!),盖上盖子,将吸附柱快速颠 倒一次(目的:清洗管壁和盖子中的杂质),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附 柱重新放回收集管中。

12.再次清洗:向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇!),盖上盖子,将吸附柱快速颠倒一次(目的:清洗管壁和盖子中的杂质),12,000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废 液,将吸附柱重新放回收集管中。

13.继续 12,000 rpm 离心 2 分钟。离心后,在亮光下,仔细检查吸附柱内部吸附膜上方的塑料垫圈四周是 否有液体残留。如果发现吸附柱内部塑料垫圈四周有液体残留,可以将吸附柱放回收集管内,将有液 体残留的一侧放在离心力内侧,继续 12,000 rpm 离心 1 分钟。

14.离心后,经仔细检查,如果确认吸附柱内部塑料垫圈四周没有液体残留,则可以丢弃收集管,将吸附柱 置于一个新的 1.5 mL 离心管(自备)中,打开吸附柱盖子,置于 50-65℃的烘箱内放置至少 15 分钟, 以让吸附膜中的乙醇挥发干净(请务必放在 50-65℃的烘箱内放置!如果室温放置,不仅时间需要 延长,还不排除有些样品由于乙醇挥发不干净,影响后续 PCR 扩增效率,甚至失败)。

注意:打开吸附柱盖子,将吸附柱放在 50-65℃的烘箱内至少 15 分钟,此步骤非常关键!如果没 有烘箱,强烈建议购买一个。这一步的目的是将吸附膜中残余的乙醇去除,乙醇的残留会严 重影响后续的酶促反应(如:酶切、PCR 扩增等),甚至可能导致后续的 PCR 失败。

15.向吸附柱的中间部位悬空加入 50 μL Elution Buffer EB,室温放置 3 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟, 收集 DNA 溶液,-20℃保存。

运输及保存方法

该产品常温运输,室温保存(收货后,其中的 Proteinase K 放-20˚C 保存)。该条件下,至少 3 年内有 效。Proteinase K 溶液可以在室温保存 2-3 个月,长期保存需要放-20˚C。

全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法),索莱宝,D1800-100T

上海金畔生物科技有限公司提供全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法),索莱宝,D1800-100T,可以访问官网了解更多产品信息。
全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法),索莱宝,D1800-100T

询价
索莱宝

·  英文名称 : Blood Genomic DNA Extraction Kit (Spin column)

·  储存条件 : RNase A、蛋白酶K-20 ℃保存;其它试剂室温(15-25) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。

·  单位 : 盒

 

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

浓度
规格 100T
保存 RNase A、蛋白酶K于-20 ℃保存;其它试剂室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。

全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法),索莱宝,D1800-50T

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全血基因组DNA提取试剂盒(吸附柱法),索莱宝,D1800-50T

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索莱宝

·  英文名称 : Blood Genomic DNA Extraction Kit (Spin column)

·  储存条件 : RNase A、蛋白酶K-20 ℃保存;其它试剂室温(15-25) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。

·  单位 : 盒

 

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

浓度
规格 50T
保存 RNase A、蛋白酶K于-20 ℃保存;其它试剂室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。