上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TTF-1000-CBK-HTR-S 1000ul,适配Tecan、PerkinElmer机械臂滤芯吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TTF-1000-CBK-HTR-S 1000ul,适配Tecan、PerkinElmer机械臂滤芯吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TTF-1000-CBK-HTR-S 1000ul,适配Tecan、PerkinElmer机械臂滤芯吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TTF-1000-CBK-HTR-S 1000ul,适配Tecan、PerkinElmer机械臂滤芯吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
级别 :
|
超纯、高纯
|
含量 :
|
95%
|
产品规格 :
|
1g
|
CAS :
|
150810-69-8
|
品牌 :
|
AAT Bioquest
|
用途范围 :
|
AAT Bioquest生产的荧光染料
|
特色服务 :
|
包邮
|
简要概述
产品基本信息
货号:378
产品名称:6-TAMRA, SE [6-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯]
规格:1g
储存条件:-15℃干燥
保质期:12个月
产品物理化学光谱特性
分子量:527.53
外观:紫色固体
溶剂:DMSO或DMF
激发波长(nm):547
发射波长(nm):573
产品介绍
6-TAMRA,SE主要用于标记核苷酸和核酸。单个TAMRA异构体越来越优选用于标记肽和核苷酸,因为它们在缀合过程中经常需要的HPLC纯化中提供更好的分辨率。
上海金畔生物科技有限公司提供缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-07A 900mL/袋×2,可以访问官网了解更多产品信息。
缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-07A 900mL/袋×2
浓度 | |
规格 | 900mL/ 袋 ×2 |
保存 |
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR-S 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR-S 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
mFluor Red 700 酸 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯(SE)显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性,并形成羧酰胺键,其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色,荧光原位杂交,流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应(2×50μg蛋白质)的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单隆,多隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),只需两个简单的混合步骤。抗体标记试剂盒mFluor Red 700 酸是美国AAT Bioquest研发的产品。
点击查看光谱
产品说明书
标准操作规程(标记50μg蛋白质)
将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。
1.准备蛋白质溶液(溶液A):
为了标记50g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将5L(总反应体积的10%)的反应缓冲液(组分B)与50L目标蛋白质溶液混合。
注1.如果您的蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg蛋白质可用于标记反应。
注2:为了标记100g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。
注3:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(来自Millipore的cat#UFC501008)去除游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)广泛用于蛋白质沉淀。
注4:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。
注5:如果蛋白质浓度小于1 mg / mL,则结合效率显着降低。为获得标记效率,建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。
2.运行结合反应:
2.1将蛋白质溶液(溶液A)加入一瓶标记染料(组分A)中,通过反复移液几次将其混合均匀,或将小瓶涡旋几秒钟。
注意:使用标记染料的两个小瓶(组分A)通过将100μg蛋白质分成2×50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。
2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。
注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
3.停止共轭反应:
3.1添加5 L(对于50μg蛋白质)或10L(对于100μg蛋白质),其为TQ染色猝灭缓冲液(组分C)的总反应体积的10%到缀合反应混合物中(来自步骤2.2),将它们混合 好。
3.2在室温下孵育10分钟。
3.3标记的蛋白质(抗体)现在可以使用了。
上海金畔生物科技有限公司提供缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-07 90mL/袋×10,可以访问官网了解更多产品信息。
缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-07 90mL/袋×10
浓度 | |
规格 | 90mL/ 袋 ×10 |
保存 |
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR-36 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,Cardboard包装,2 盒 / 包,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR-36 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,Cardboard包装,2 盒 / 包
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
产品基本信息
货号:6014
产品名称:3’-(6-荧光素) CPG*1000 Å*
规格:1g
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:12个月
产品物理化学光谱特性
分子量:N/A
溶剂:MeCN
激发波长(nm):494
发射波长(nm):522
产品介绍
有许多方法标记寡聚核苷酸,使其带有荧光。依据其光谱需求,标记的选择多元化。5-荧光素-CE-亚磷酰胺,来源于6-羧基荧光素单一异构体。5’-六氯荧光素氨基磷酸酯(HEX)和5‘-四氯荧光素氨基磷酸酯都可以在5-位 的用于寡聚核苷酸标记。用荧光素标记多聚糖3~-位可以获得 4’-Fluorescein CPGs。使用任何这类产品的荧光素标记的寡核苷酸都可以在氢氧化铵标准裂解条件下去保护。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的3’-(6-荧光素) CPG*1000 Å*。
上海金畔生物科技有限公司提供缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-06 225mL/袋×10,可以访问官网了解更多产品信息。
缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-06 225mL/袋×10
浓度 | |
规格 | 225mL/ 袋 ×10 |
保存 |
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-50-CBK-HTR 50ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
产品基本信息
货号:7000
产品名称:ReadiCleave Cy5 NHS酯
规格:1mg
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:12个月
产品物理化学光谱特性
分子量:1204.42
外观:固体
激发波长(nm):646
发射波长(nm):662
产品介绍
ReadiCleave Cy5 NHS酯是美国AAT Bioquest生产的荧光探针,由于荧光检测的方法在灵敏度方面具有许多生物检测的优点,许多生物分子用荧光标签标记,用于荧光成像和流式细胞术分析。但是,大多数现有的荧光标签用于 性标记生物靶标,从中不能切割添加的荧光标记用于进一步的下游分析。AAT Bioquest的ReadiCleave 接头可以使荧光标签与生物寡头靶标结合,从而可以在需要时去除添加的荧光标签。该ReadiCleave Cy5含有叠氮甲基接头,可用TCEP切割以从靶分子中除去Cy5荧光团。可以通过添加100mM TCEP溶液(pH9.0),并在65℃下孵育20-30分钟来进行切割。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的ReadiCleave Cy5 NHS酯。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
Readilink™蛋白标记技术是制备用于荧光成像和流式细胞仪应用的荧光抗体缀合物的强大,方便的工具之一。ReadiLink™AF594抗体快速标记试剂盒为制造AlexaFluor®594标记的抗体缀合物提供了便捷的工具(AlexaFluor®是ThermoFisher Scientific的商标)。此ReadiLink™试剂盒中使用的AF594染料相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。该试剂盒具有用于标记〜2×50 ug抗体的所有基本组分。试剂盒中提供的两个AF594染料小瓶中的每一个均经过优化,可标记约50 µg抗体。制备的AF594缀合物(与试剂盒一起使用)无需进一步纯化即可直接用于荧光成像和流式细胞术。它提供了制备AF594标记抗体的便捷方法。
点击查看光谱
产品说明书
样品分析方案
工作溶液配制
蛋白质工作溶液(溶液A)
为了标记50 µg蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL),请将5 µL(反应总体积的10%)反应缓冲液(组分B)与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意:如果蛋白质浓度不同,请相应地调整蛋白质体积,以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意:要标记100 µg蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL),请将10 µL(反应总体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意:蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH 7.2-7.4;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,则必须使用1X PBS(pH 7.2-7.4)进行透析,或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜(密理博公司的产品目录UFC501008)去除游离的胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。
注意:抗体的纯度非常重要。
注意:为获得标记效率,建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。
重要:在打开之前,将所有组分加热并短暂离心小瓶,并在开始缀合之前立即准备所需的溶液。以下方案仅供参考。
操作步骤
进行缀合反应
将蛋白质工作溶液(溶液A)添加到一个小瓶标记染料(AF594-组分A)中,并通过将小瓶涡旋几秒钟将其充分混合。
注意:如果要标记100 µg的蛋白质,请使用两个小瓶(组分A),将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质,并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶,用于下一步。
将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
停止缀合反应
将5 µL(对于50 µg蛋白质)或10 µL(对于100 µg蛋白质)添加到结合反应混合物中,占TQ™染色猝灭缓冲液(组分C)总反应体积的10%;混合均匀。
在室温下孵育10分钟。标记的蛋白(抗体)现在可以使用了。
蛋白质结合物的储存
蛋白质缀合物应在载体蛋白(例如0.1%牛血清白蛋白)存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间,可以将蛋白质结合物冻干或分成单份使用,并存储在≤–20°C下。
图示
图1.分别用和不用小鼠抗微管蛋白染色的HeLa细胞,然后用ReadiLink™Rapid AF594抗体标记试剂盒(#1277)制备的Alpha Fluor™594山羊抗小鼠IgG结合物的免疫荧光分析。
上海金畔生物科技有限公司提供缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-05 9mL/支×20,可以访问官网了解更多产品信息。
缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,CM201-05 9mL/支×20
浓度 | |
规格 | 9mL/ 支 ×20 |
保存 |
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-20-CBK-HTR 20ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-20-CBK-HTR 20ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,未灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
货号 | 16930 | 存储条件 | f/l |
规格 | 100 ug | ||
Ex (nm) | 405 | Em (nm) | 444 |
分子量 | ~52000 | 溶剂 | Water |
产品详细介绍 |
简要概述
产品基本信息
货号:16930
产品名称:链霉亲和素偶联物 mFluor Violet 450-标记
规格:100ug
储存条件:-15℃避光防潮
保质期:12个月
产品物理化学光谱特性
分子量:N/A
溶剂:水
激发波长(nm):405
发射波长(nm):444
产品介绍
链霉亲和素偶联物 mFluor Violet 450-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素,链霉亲和素缀合物与生物素缀合物一起广泛用于特异性检测多种蛋白质,蛋白质基序,核酸和其他分子,因为链霉亲和素对生物素具有非常高的结合亲和力。该mFluor 紫罗兰色450-链霉亲和素偶联物包含链霉亲和素(作为生物素结合蛋白)和共价连接的mFluor 紫罗兰色450(作为荧光标记)。当与生物素化的一抗结合使用时,通常用作间接免疫荧光染色的 步试剂。对于使用配有405 nm激发光的流式细胞仪(例如,紫激光)进行基于生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试,它是非常有价值的工具。多种互补的生物素化试剂可从许多商业供应商处获得。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的链霉亲和素偶联物 mFluor Violet 450-标记。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂,以方便,可靠,特异的方式方便地定量测定血清,血浆和细胞培养上清液中的分析物。
ELISA测定原理
ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有(mAb)。样品中的分析物被包被的mAb捕获,并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP(SA-HRP)检测。
血清和血浆样品分析
ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液,一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中,也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。
所需材料
酶标仪可在450 nm读取
ELISA平板清洗器;自动或手动(例如,多移液管或喷射瓶)、精密移液管,吸头和量筒
用于标准和样品稀释的试管
蒸馏水或去离子水
安全信息
Stop溶液0.18 M H2SO4(<1%)对眼睛和皮肤有刺激性,应小心处理。由于不知道暴露的影响,因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG(0.002%),这是一种潜在的过敏原,可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息,请查阅我们网站上的《安全数据表》。
制备
在开始测定之前,让板和测定试剂达到室温(TMB底物除外,使用冷底物)。
计划板布局,使其一式两份,包括标准曲线,样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。
产品说明书
样品实验方案
储备溶液配制
1.洗涤缓冲液
将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中(足以完成1个板的所有洗涤步骤)。如果在20倍浓缩物中形成了晶体,则将其升至室温并轻轻混合以溶解。
2. Apo ELISA缓冲液
用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍,以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板,将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。
3.样品
所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释,应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。为防止不同的LDL粒径干扰,所有血清/血浆来源的样品均应在Triton X-100缓冲液中稀释2倍,然后涡旋振荡5秒钟。Triton X稀释对于细胞系产生的样品不是必需的,并且不会干扰其他载脂蛋白的分析。避免冻融循环,因为它会导致信号降低。
4.人血清/血浆稀释指南
根据对空腹健康受试者的反复分析,我们建议稀释系数为5000X。精确的移液非常重要,在稀释步骤之间更换吸头,并使用新鲜制成的稀释液。试剂的数量足以重复使用。
5. ELISA标准
apoB标准品是由50%甘油稳定的纯化LDL。浓度为125μg/ ml。无需分装标准液,因为高含量的甘油可使标准液保持液态。储存在-20°C。
6.编制标准曲线
如图所示,稀释标准储备溶液以创建标准曲线。试剂的数量足以重复使用。 后一个样品瓶用作测定背景对照,即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。
工作溶液配制
1.检测抗体
使用后15分钟内,将检测抗体在Apo ELISA缓冲液中稀释至1μg/ ml的浓度。对于每个板,在12 ml Apo ELISA缓冲液中稀释12μl检测抗体。
2.链霉亲和素
在使用后的15分钟内,将抗生蛋白链菌素-HRP用抗生蛋白链菌素-HRP稀释剂稀释1000倍。对于每块板,在12 ml的链霉亲和素-HRP稀释液中稀释12μl的链霉亲和素-HRP。
操作步骤
用洗涤缓冲液(300μl/孔)洗涤板5次。 后一次洗涤后,将其倒置并用吸水纸吸水。然后立即进行下一步。
添加样品(至少稀释2倍),标准液和测定背景对照(100μl/孔)。敲击板混合。用粘性板盖覆盖板,并在室温下孵育2小时。
如上所述清洗板。
添加检测抗体(100ul/孔)。盖好板并在室温下孵育1小时。
如上所述清洗板。
加入抗生蛋白链菌素-HRP(100μl/孔)。盖好板并在室温下孵育1小时。
如上所述清洗板。
添加TMB底物(100ul/孔)。在避开直射光的室温下孵育15分钟。
如上所述清洗板。
在15分钟内测量450 nm处的吸光度。如果可能,请使用能够减去570至650 nm参考波长的酶标仪。
上海金畔生物科技有限公司提供缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,GCM201-1K 颗粒剂型1000g,配制量50.0L,可以访问官网了解更多产品信息。
缓冲蛋白胨水(BPW,北京陆桥,GCM201-1K 颗粒剂型1000g,配制量50.0L
浓度 | 50.0L |
规格 | 1000g |
保存 |
上海金畔生物科技有限公司提供机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-200-CBK-HTR-S 200ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒,可以访问官网了解更多产品信息。
机械臂吸头(黑色),爱思进/Axygen,TT-200-CBK-HTR-S 200ul,适配Tecan机械臂吸头,液位感应,灭菌,96 Tips / 盒
产品展示
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
简要概述
即用型ABTS溶液是美国AAT Bioquest生产的ELISA检测试剂,辣根过氧化物酶(HRP)和HRP缀合物在过氧化氢存在下促进ABTS氧化,将ABTS转化为其蓝绿色氧化产物。该显色反应广泛用于ELISA测定中的HRP定量。氧化的ABTS产物具有420nm的吸收,可以用分光光度计容易地跟踪。ReadiUse™ABTS解决方案针对在微孔板或试管中使用HRP或HRP标记的缀合物和过氧化氢的ELISA测定进行了优化。我们的ABTS解决方案可以在一次添加中完成HRP反应。在过氧化氢存在下,当与HRP或HRP缀合物反应时,测定溶液将其颜色改变为浅绿色。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的即用型ABTS溶液。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 420nm |
推荐孔板: | 纯白色 |
产品说明书
样品实验方案
在HRP标记的试剂温育后洗涤测定板。
2.每孔加入100μLReadiUse ABTS溶液。
3.将板在室温下孵育15-30分钟。注意:孵育时间取决于测定条件。
4.用ELISA酶标仪测量415±10 nm(420 nm)的吸光度信号。注意:如果需要,可以通过向0.1M柠檬酸中加入等体积的1%SDS来终止反应。
上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒
货号 | 35003 | 存储条件 | 建议在低于-15℃温度下冷冻保存 |
规格 | 30ml | 价格 | 2750 |
Ex (nm) | Em (nm) | ||
分子量 | 600.47 | 溶剂 | Water |
产品详细介绍 |
简要概述
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是金畔生物生产的一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),SST-8 是一种类似于 MTT 的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜(formazan,参考图1)。SST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供的荧光探针。
CCK-8 细胞增殖与活性检测的专家
CCK-8 常见问题详解
产品特点
本试剂盒提供了一种灵敏度高,操作简便,使用安全的细胞增殖与活性检测方法。与传统的 MTT 实验相比具有明显的优势:
1.MTT实验生成的甲臜不是水溶性的,需要使用 DMSO 等有机溶剂溶解;而本方法产生的甲臜是水溶性的,不仅省去了溶解步骤,更因此而减少了该操作步骤带来的误差。
2.与 MTT 方法相比,本方法线性范围更宽,灵敏度更高。
3.本方法对细胞无毒性,可以多次测定,选取测定时间。
4.本方法所用试剂在培养基中比 MTT 更加稳定,实验结果重复性好。
5.MTT 具有毒性,同时其生成的甲臜需要有机溶剂溶解,会对操作人员身体造成危害。本试剂无毒,使用中无需有机溶剂,操作更加安全。
6.本试剂盒在 4°C 避光可长期保存,使用无需配制,即开即用。
本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验。本试剂盒使用方便,试剂盒包含一管已经配制好的含有 SST-8 的 CCK-8 溶液,即开即用,无需其他准备步骤。检测过程也无需采用额外的步骤去溶解甲臜,可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶标仪上检测,适合大规模,高通量的样品检测。
产品说明书
实验方案
1.在96 孔板中配置100μL的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入100μL2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100μL5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在37°C,5%CO2的条件下)预培养24 小时。
2.向培养板加入1-10μL 不同浓度的待测刺激。
3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或48 小时)。
4.每孔加入10μLCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD 值的读数)。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8溶液,其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的会干扰检测,需设置加了相应量细胞培养液、和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
5.在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。
7.如果暂时不测定OD 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉影响。当然影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入后的空白吸收即可。
注意事项:
1.由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发的问题。一方面,由于96孔板周围一圈容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加PBS,水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。
2.CCK-8检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。任何待测体系中存在还原剂,例如一些抗氧化剂会干扰检测,需设法去除。
3.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
4.建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK 试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加样,容易产生气泡,会干扰OD 值读数。
5.当使用标准96 孔板时,贴壁细胞的 小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基),且培养时间长一些。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
6.加入CCK -8溶液时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色已变化或pH值变化。建议换用新鲜的培养基。
7.如果没有450nm 的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片,但是450nm 滤光片的检测灵敏度 高。
8.酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
9.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。