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mRNA体外转录原料

发表于由

mRNA体外转录原料

简要描述：mRNA疫苗的研发与生产需要一系列酶的参与：mRNAT7聚合酶、无机焦磷酸酶、RnaseInhibitor、加帽酶以及2′O-甲基转移酶、Poly(A)聚合酶和DNAase等主要7种酶。

金畔生物提供全线mRNA体外转录原料

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产品咨询

 

mRNA疫苗相关产品-金畔生物

金畔生物提供mRNA 核苷和酶原料 mRNA合成技术服务助力核酸药物，向世界产品看齐。

关键词  mRNA 核苷 ，mRNA核心原料，高产量T7酶 ，高产率mRNA, mRNA合成，mRNA疫苗，mRNA药物，mRNA解决方案，mRNA定制，mRNA CRO，N1-UTP（甲基假尿苷），P-UTP，Pseudo-UTP（假尿苷）

一 mRN药物简介

基于mRNA的治疗，简单来讲就是利用化学修饰后的mRNA分子进入细胞质中，利用细胞质内的自有核苷酸进行转录表达，生成机体所需要的蛋白质。上世纪90年代，mRNA药效被初步证实，之后大量的精力投入到了mRNA药物的研发中。

mRNA药物开发的主要技术门槛在于稳定性和递送，若相关难点能够得以解决，mRNA药物就可作为蛋白质补充或替代疗法治疗相关疾病。尤其是随着癌症基因测序和抗原表位发现等技术的发展，mRNA药物也可用于针对肿瘤患者的个性化治疗，并具有巨大的应用潜力。目前在mRNA肿瘤药物开发领域进展较快的企业主要是Moderna、BioNTech和CureVac。

二、mRNA合成过程所需原料

（一）国内外mRNA X冠疫苗的合成工艺

BioNTech/辉瑞、Moderna和艾博生物mRNA疫苗的合成工艺如下：

1）BNT162b2–BioNTech/辉瑞

三核苷酸cap1类似物（（m27,3′-O）Gppp（m2'-O）ApG）（TriLink）和N1-甲基假尿苷-5′-三磷酸（m1ψTP）（ThermoFisherScientific）取代尿苷-5′-三磷酸（UTP）的存在下，通过T7RNA聚合酶对DNA进行纯化和体外转录。

总结：转录采用一步法，帽子类似物作引物；甲基假尿苷取代尿苷。

2）mRNA-1273–Moderna

利用优化的T7RNA聚合酶介导的转录反应在体外合成了编码序列优化的mRNA，尿苷被N1-甲基假尿苷*取代。转录后，使用牛痘苗封盖酶（新英格兰生物实验室）和痘苗2′O-甲基转移酶（新英格兰生物实验室）将Cap1结构添加到5’端。通过oligodT亲和纯化纯化mRNA，通过切向流过滤将缓冲液交换到pH为5.0的醋酸钠中，无菌过滤，并在-20°C下冷冻，直到进一步使用。

总结：转录采用两步法，需要加帽酶的参与，甲基假尿苷取代尿苷。

3）ARCoV-艾博生物

该mRNA在体外使用T7RNA聚合酶介导的转录从质粒ABOP-028（GENEWIZ）的线性化DNA模板中产生，该质粒编码SARS-CoV-2的密码子优化RBD区域，并包含5’和3‘的未翻译区域（UTR）和一条poly-a尾巴，以未修饰的NTP作为原料和T7聚合酶体外进行mRNA的合成，使用了牛痘加帽系统（VacciniaCappingSystem）(Novoprotein)进行加帽。

总结：转录采用两步法，需要加帽酶的参与。

（二）mRNA制备过程原料

mRNA制备过程需要用到的主要原料包括质粒DNA模板、一系列酶（主要为7种酶）以及底物核苷酸等;

1、模板DNA所需原料：质粒

DNA模板生产，主要是质粒的生产。编码抗原的DNA模板，通过质粒转染到大肠杆菌大规模体内表达，最后提取和纯化携带目的序列的质粒，即得到DNA模板。目前质粒的生产提取和纯化工艺很成熟，可以自建生产线或者外包出去，例如辉瑞自建质粒生产工厂，大部分mRNA企业外包，Moderna和国内企业目前是外包。

制备mRNA质粒的要求：质粒用于制备mRNA，这类DNA本身不属于API，DNA需要按照GMP规范进行，GMP质粒要求生产设备必须是专用的、符合GMP规范且配备洁净间

2、mRNA体外转录所需原料：一系列酶+核苷酸底物

mRNA疫苗的研发与生产需要一系列酶的参与：mRNAT7聚合酶、无机焦磷酸酶、RnaseInhibitor、加帽酶以及2′O-甲基转移酶、Poly(A)聚合酶和DNAase等主要7种酶。

金畔生物提供全线mRNA体外转录原料 如下表：

产品编号

产品名称

品牌

78MRNA-1001

ATP – Solution (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1002

CTP – Solution (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1003

GTP – Solution (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1004

UTP – Solution (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1005

NTP Bundle  (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1101

N1-Methyl-Pseudo-UTP (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1102

Pseudo-UTP (100 mM)

Jinpan

78MRNA-1103

RNase Inhibitor – recombinant (40000 U/mL)

Jinpan

78DA10001

Recombinant RNase Inhibitor（Porcine）(40000 U/mL)

Jinpan

78MRNA-1104

T7 RNA Polymerase (1 KU/μL)

Jinpan

78MRNA-1105

Vaccinia Capping Enzyme (10 KU/mL)

Jinpan

78MRNA-1106

mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase (50 U/μL)

Jinpan

78MRNA-1107

EGFP mRNA (Pseudouridine, Ψ)

Jinpan

78MRNA-1109

Pyrophosphatase,Inorganic

Jinpan

78MRNA-1110

Deoxyribonuclease I (DNase I)

Jinpan

78MRNA-1111

S-adenosylmethionine (SAM)（32mM）

Jinpan

78MRNA-1112

5-Methyl-CTP (100mM)  

Jinpan

78MRNA-1113

5-Methoxy-UTP (100mM)

Jinpan

78MRNA-1114

BsaI (20 U/μL)

Jinpan

78MRNA-1115

2'OMe-ATP（100mM）

Jinpan

2.1转录过程所需要的酶

RNA聚合酶体系：RNA聚合酶是体外转录mRNA的关键酶。

T3、T7和SP6RNA聚合酶分别对T3、T7和SP6噬菌体启动子具有高度的特异性。将目的基因序列克隆到T7和SP6启动子下游的多克隆位点中，以克隆的DNA为模板体外合成相应的RNA。

T7RNAPolymerase（T7RNA聚合酶）【78MRNA-1104】高度特异识别T7启动子序列，以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以核甘酸（NTP）为底物，合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

无机焦磷酸酶【78MRNA-1109】：加入无机焦磷酸酶，增加RNA产量。无机焦磷酸酶（PPase）可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐，可以为蛋白、RNA和DNA的生物合成反应提供动力，促进产物的生成。在工业化生产mRNA疫苗的时候会产生大量的无机焦磷酸盐，为了保证mRNA疫苗高效生产，可以添加无机焦磷酸酶，可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。

RNase抑制剂【78MRNA-1103/78DA10001】：防止RNA的降解。少量RNase在RNA制备过程中引入，会导致RNA的降解，污染可能通过实验过程中使用的枪头、试管（离心管）和其他试剂引入。通常使用RNase抑制剂作为减少和控制此类污染物的预防措施。

RNase抑制剂能与RNaseA形成1:1复合体，抑制RNase活性，在mRNA疫苗研发和生产过程需要保持mRNA的稳定性以保证疫苗高质量的生产。

2、转录所需材料–核苷酸和修饰核苷酸

mRNA疫苗研发中常进行假尿嘧啶化修饰，尿嘧啶修饰是丰富的RNA修饰，一般由尿苷的异构化产生，mRNA的假尿嘧啶化修饰主要有三个功能：改变密码子、增强转录本稳定性和应激反应应答。

3、加帽和加尾：共转录加帽/模板加尾，转录后加帽/加尾

真核生物体内会对转录形成的mRNA进行加帽，即在mRNA的5’端添加一个甲基化的鸟苷酸帽子（m7GPPPN结构），从而保护mRNA免遭核酸外切酶的攻击以增加mRNA的稳定性，并且协助mRNA与核糖体的结合以促进翻译起始。生物体内的帽子结构有cap0，cap1，cap2三种形式，牛痘病毒加帽酶能够在mRNA的5’端添加cap0帽子，再使用甲基转移酶处理即可得到cap1帽子。

此外，5'帽子还参加mRNA前体的剪接，参与mRNA3'末端多聚腺苷酸化，保证mRNA在细胞质中的稳定运输。

加帽需要的酶：牛痘病毒加帽酶

可以将7-甲基鸟苷帽结构（m7Gppp，Cap0）加到RNA的5末端，大幅提高mRNA的稳定性和启动mRNA的翻译。牛痘病毒加帽酶能够在一小时之内对mRNA进行加帽，效率接近100%。

在mRNA疫苗研发生产过程中，mRNA加帽效率和加帽mRNA稳定表达的效率对疫苗的工业化生产有重大的影响。牛痘病毒加帽酶体系加帽的mRNA在细胞内的表达效率大于帽子类似物mRNA的表达效率。

加尾酶：Poly(A)聚合酶

Poly(A)聚合酶可以催化ATP以AMP的形式依次掺入到RNA的3末端，即在RNA的3末端加多聚A尾。Poly(A)尾巴能够增强mRNA的稳定性、提高翻译起始效率、引导mRNA出核。

主要用到的酶：

1）牛痘病毒加帽酶【78MRNA-1105】：

2）痘苗2′O-甲基转移酶【78MRNA-1106】

3）Poly(A)聚合酶

加帽酶非常昂贵，如何替代加帽酶？

一步法合成mRNA疫苗产品的加帽可以在mRNA的体外转录过程中通过掺入“帽子序列“实现，这种加帽技术会将加帽序列反向加在mRNA上，在反应体系中加入5’帽类似物，可以省一个加帽酶，以及减少纯化步骤，一定程度上降低成本（尤其是节省了昂贵的加帽酶成本），但相对应地，产量较之两步法（加帽酶参与）减少，因为加帽酶的加帽效率更高。

4、消除DNA模板：需要DNA酶【78MRNA-1110】

合成后的产物可能会有DNA残留，在疫苗开发阶段，残留的去除是关键的步骤，以减少下游纯化难度并增加产品的纯度。需要用DNA酶（DNAase将残留的DNA模板进行消除，在mRNA疫苗生产的过程中对DNA的残留控制非常严格格。

三、mRNA高品质

3.1 修饰核苷酸/核苷酸质量标准

依据国际标准进行质量检测和质量控制：

  • 良好品质：产品纯度可达99%以上，且批次间质量稳定；

  • 无动物源成分：合成过程中不引入动物源成分，降低病毒污染风险；

  • 无污染：每批次产品均通过DNA酶、RNA酶及内毒素检测，确保产品合成过程未引入外源无污染；

  • 表达效率保证：产品经过转录测试和表达测试，转录活性和表达活性优于同类产品；

  • 工业级产能：修饰核苷酸产能可满足工业级应用，满足核酸药物从药物开发到工业级生产的不同需求。

    金畔Pseudo-UTP纯度： 99.2%

 


Me-Pseudo-UTP纯度纯度99.8%

 

3.2 酶质量标准

  • mRNA合成酶系列产品，依据国际标准进行质量检测和质量控制：

  • 良好品质：产品纯度可达95%以上，质控精度优于国产同类产品；

  • 定量检测：采用定量检测方法检测DNA酶、RNA酶残留，精准定量微量残留；

  • 杂质控制：每批次产品均通过DNA酶、RNA酶残留检测，检测精度可达百万分之一酶活单位；

  • 严防污染：生产过程中不引入动物源成分，每批次产品均通过HIV、HBV、HCV检测；

  • 活性保证：产品经过酶活测试，酶活达到行业标准。

    RNA酶抑制剂纯度100%

     

     

    牛痘加帽酶纯度99.99%

     

    T7聚合酶酶纯度100%

     

    二氧甲基转移酶纯度99.46%

 

 

cellscript mRNA产品

发表于由

cellscript mRNA产品

 

 

cellscript mRNA产品

mRNA产品
T7脚本™ 标准mRNA生产系统（PDF）
简单的体外制造mRNA的方法。结合了高产量转录的好处与转录后封顶和跟踪所有在一个工具包。参见本页的T7 FlashScribe转录试剂盒、ScriptCap m7G封盖系统、ScriptCap 2'-O-甲基转移酶试剂盒和A-加聚（A）聚合酶跟踪试剂盒。
C-MSC11610 10反应$320
C-MSC100625 25反应$702
体外转录
T7闪光划线器™ 转录工具包（PDF）
用T7 RNA聚合酶和典型（GAUC）NTPs体外转录RNA。一个反应从1微克DNA中产生180微克RNA
30分钟。
C-ASF3507 50反应$286
T7划线器™ 标准RNA-IVT试剂盒（PDF）
用T7 RNA聚合酶和典型（GAUC）NTPs体外转录RNA。一个反应在2小时内从1微克DNA中产生150微克RNA。
C-AS3107 50反应$267
SP6划线器™ 标准RNA-IVT试剂盒（PDF）
用SP6 RNA聚合酶和典型（GAUC）NTPs体外转录RNA。一个反应在2小时内从1微克DNA中产生90微克RNA。
C-AS3106 50反应$267
转录后封顶
脚本™ m7G封顶系统（PDF）
利用ScriptCap封盖酶对体外转录的RNA进行转录后封盖，可以构建GTP和SAM.Cap 0（N7-甲基-G）封盖，效率接近100%。这不能通过共转录封顶方法来实现。与ScriptCap 2'-O-甲基转移酶一起使用，以产生，在大多数真核生物的mrna上发现的。
C-SCCE0625 25反应$436
脚本™ 2'-O-甲基转移酶试剂盒（PDF）
用于将含有Cap 0-caps的RNA转化为含有Cap 1-caps的RNA，这种RNA存在于大多数真核mrna中。可与ScriptCap m7G封盖系统同时使用，在单一反应中产生几乎100%的Cap 1封盖RNA。
C-SCMT0625 25反应$219
脚本™ 第1章封顶系统（PDF）
用ScriptCap封盖酶、ScriptCap 2'-O-甲基转移酶、GTP和SAM对体外转录的RNA进行转录后封盖。可以构建Cap 0或Cap 1封盖，效率接近100%。这不能通过共转录封顶方法来实现。
C-SCCS1710 10反应$211
共转录限制
消息大值™ T7 ARCA封顶信息转录工具包（PDF）
用T7 RNA聚合酶和反转录cap类似物（ARCA）对IVT-RNA进行共转录封端。一个反应在30分钟内从1微克DNA中产生60微克RNA。反应产物80%正确封端，20%未封端。
C-MMA60710反应$323
大振幅™ T7高收益信息制作工具包（PDF）
用T7 RNA聚合酶和标准cap类似物对IVT-RNA进行共转录封端。一个反应在30分钟内从1微克DNA中产生60微克RNA。反应产物40%正确封盖，40%错误封盖，20%未封盖。
C-ACM04037 25反应$368
放大倍数™ SP6高收益消息生成器工具包（PDF）
用SP6 RNA聚合酶和标准cap类似物对IVT-RNA进行共转录封端。一个反应在2小时内从1微克DNA中产生35微克RNA。反应产物40%正确封盖，40%错误封盖，20%未封盖。
C-AC0706 25反应$368
转录后跟踪
A+™ 聚（A）聚合酶拖尾试剂盒（PDF）
用于rna转录后的多（A）尾加成。允许跟踪mrna
在体外，长度等于或大于自然界中发现的长度。这不能通过共转录跟踪方法来实现。
C-PAP5104H 50反应$219

Baseclick mRNA转染试剂盒

发表于由

Baseclick mRNA转染试剂盒

 

Baseclick由巴斯夫风险投资公司和LMU慕尼黑于2008年成立，此后为的公司，实验室和科研机构提供了用于生命科学和点击试剂的高质量产品。我们位于德国慕尼黑附近。

Baseclick是您生命科学创新解决方案的专家。我们提供基于点击化学的产品，可对核酸进行高效，灵敏和模块化的标记。当前的应用领域包括：

 
核酸标记的创新技术
无论您要使用EdU细胞增殖测定，PCR标记试剂盒，FISH探针，（高度）修饰的寡核苷酸，还是仅用于点击化学的试剂，baseclick都是要引用的地址。凭借基于点击化学的专有方法，Baseclick提供了市场上有效，可靠的标签技术。除了提供成功完成点击反应的化学药品和试剂盒外，我们将很高兴为您的研发提供支持。 自发现这一点以来，
 
我们一直致力于核酸点击化学修饰领域

高性能技术，我们的使命不仅是推进基于DNA的技术的研究，而且是大程度地降低客户成本并提供高质量的产品。
我们在这一领域的专业知识已导致与制药，生命科学和生物技术领域的*公司以及学术实验室进行研发合作。
 
质量管理
我们致力于在高质量原则下经营我们的公司，因此坚持遵循符合标准ISO9001：2015 的质量管理体系的纪律和控制。当然，提供不妥协的质量还取决于我们的诚实反馈客户，我们非常感谢您为此以及您一直以来的支持与合作。
尽管我们已经通过ISO认证以及我们的经营理念和道德标准来正确执行质量标准，但我们仍在不断根据我们的信条进一步改善我们的产品和服务：我们相信质量并提供相同的

Baseclick mRNA转染试剂盒

 

BCK-transfect

-15％*

BCK转染

1套

仅供研究使用！

文本：

对于10种单独的mRNA 体外转染

，mRNA Transfection Kit设计用于使用少量的mRNA和试剂在各种哺乳动物细胞系中递送mRNA。在难以转染的细胞（例如原代细胞和干细胞）中，可以实现高的mRNA转染效率。所述mRNA的转染试剂盒是与血清和抗生素的存在兼容。
该基因转染试剂盒包含基因稀释优化的无菌缓冲。确保使用此缓冲液进行有效的mRNA复合物形成和随后的转染。
 
 

图片：

储存条件：
储存于2-8°C

保质期：
12个月

产品编号

BCK-transfect

-15％*

BCK-transfect

1套

 

CELLSCRIPT mRNA Production 说明书

发表于由

CELLSCRIPT mRNA Production 说明书

世界*实验材料供应商 CELLSCRIPT 上海金畔生物为其中国代理， CELLSCRIPT 在一直是行业的*,一直为广大科研客户提供zui为的产品和服务,上海金畔生物一直秉承为中国科研客户带来的产品，的服务， CELLSCRIPT 就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们zui大的收获

 CELLSCRIPT 中国代理, CELLSCRIPT 上海代理， CELLSCRIPT 北京代理，CELLSCRIPT 广东代理，CELLSCRIPT 江苏代理CELLSCRIPT 湖北代理,CELLSCRIPT 天津,CELLSCRIPT 黑龙江代理,CELLSCRIPT 内蒙古代理,CELLSCRIPT 吉林代理,CELLSCRIPT 福建代理, CELLSCRIPT 江苏代理, CELLSCRIPT 浙江代理, CELLSCRIPT 四川代理,

 

CELLSCRIPT™的使命 是为临床研究和治疗学提供用于制备和使用RNA翻译细胞的*产品和技术。

目前的产品包括用于体外转录的试剂盒，使用盖类似物或封端酶的5'RNA封端和3'RNA多聚腺苷酸化，以及用于制备用于翻译的封端，聚（A） – 尾mRNA的一体化试剂盒在细胞中。

CELLSCRIPT™ zui近引入了INCOGNITO™RNA转录试剂盒，用于体外合成含有修饰核苷的RNA，例如伪嘌呤（Ψ）和/或5-甲基胞苷（m5C）代替相应的U或C正常核苷（图1） 。这些试剂盒是如此命名的，因为封闭的多聚腺苷酸化和核苷修饰的RNA产物（称为“INCOGNITO mRNA”）被伪装，因此当转染到表达的哺乳动物细胞中时，它们不会与相应的未修饰的mRNA相同程度地诱导先天免疫应答各种RNA传感器。

 

mRNA Production

T7 mScript™ Standard mRNA Production System 

Simply the best way to make in vitro mRNA. Combines the benefits of high-yield transcription with those of post-transcriptional capping and tailing all in one kit. See T7-FlashScribe Transcription Kit, ScriptCap m7G Capping System, ScriptCap 2'-O-Methyltransferase Kit and A-Plus Poly(A) Polymerase Tailing Kit on this page.
C-MSC11610 10 reactions
C-MSC100625 25 reactions

 

ADS Biotec ——核酸（MRNA）纯化*

发表于由

ADS Biotec ——核酸（MRNA）纯化*

 

 

ADS Biotec ——核酸（MRNA）纯化*

 

 

 

 

色谱柱订购信息
产品描述 货号 规格 应用
RNASep™ Prep Column RNA
–
99
–
3810 7.8 x 50 mm RNA分子的分离纯化及质量 控制
RNASep™ Semi–Prep Column RPC
–
99
–
2110 21.2 x 100 mm 用于中间放大的RNA纯化 RNASep
™
Semi–Prep II Column RPC
–
99
–
3015 30.0 x 150 mm 大规模放大的RNA纯化
DNASep™ Column DNA
–
99
–
3510 4.6 x 50 mm 高分辨率ds/ssRNA与DNA分析
高分辨率RNA分析

缓冲液订购信息
产品描述 货号 规格 应用
Triethylammonium Acetate Buffer A(0.1 M TEAA in water)
553421 4 x 2.5 L  Phase for Nucleic Acid
Analysis
Triethylammonium Acetate Buffer A(0.1 M TEAA in water)
553421
–
L4 4 x 4 L
Triethylammonium Acetate
Buffer B (0.1 M TEAA in 25 % Acetonitrile)
553422 4 x 2.5L  Phase for Nucleic Acid
Analysis
Triethylammonium Acetate Buffer B (0.1 M TEAA in 25 % Acetonitrile)
553422
–
L4 4 x 4 L
HPLC Column Wash Solution D
(75 % acetonitrile)
553423 4 x 2.5 L
HPLC Column Wash Solution D
(75 % acetonitrile)
553423
–
L4 4 x 4 L

 

对标竞品
货号 品名 对标货号 对标品牌 品名 规格
SP5890 2 M TEAA Solution
(6*200ml )
400613 Invitrogen 三乙胺乙酸 (TEAA)
2.0 M
200ml
69372
–
250ML
sigma Triethylammoniu
m acetate (TEAA)
（0.98–1.02 M 250 mL/瓶
（￥ 1800）

 

 

 

ozbiosciences mRNA产品简介

发表于由

ozbiosciences mRNA产品简介


mRNA HIGH QUALITY PRODUCTS & CUSTOM SERVICE 

优点#1：它不需要核摄取来表达，因为mRNA的翻译发生在细胞质中。事实上，核递送（通过核膜）是转染慢细胞或非分裂细胞的主要途径之一，因此，mRNA转染对这一目的特别有吸引力。

优点2：这种方法不是综合性的。与pDNA相反，mRNA不能导致遗传

优点#3：非常适合难以转染的细胞。mRNA比DNA有几个优点，可以更容易地对原代和难以转染的细胞进行基因修饰。除了mRNA没有整合到宿主基因组中的风险之外，mRNA转染是细胞周期独立的，特别适合于缓慢分裂的细胞，如内皮细胞或树突状细胞1。

mRNA的益处

-无需核摄取-蛋白质直接在细胞质中表达

–

比DNA转染更快的蛋白质表达

-无基因组整合

-非常适合转染慢细胞或非分裂细胞

-以启动子独立的方式表达蛋白质

-瞬时转染：基于mRNA的蛋白质表达持续时间

5’ Cap

这种帽结构保护mRNA免受降解，并招募加工和翻译因子。在mam-

mals，主要形式是7-甲基鸟苷（Cap 0），通过5'至5'三磷酸桥连接到

在核糖O-2位甲基化的第一转录核苷酸（Cap 1）。

5'非翻译区（5'UTR）

5'UTR是一个非编码区，直接位于转录后启动密码子的上游-

通过调节mRNA稳定性、转运、亚细胞定位和翻译效率因此允许精细控制蛋白质产物。该区域GC含量高几个次级结构，包括Kozak序列（GCCGCCRCUAUGG）在翻译过程的启动中发挥作用。

开放阅读框架（ORF）

真核细胞mRNA的这个内部区域被翻译成蛋白质。ORF以蛋氨酸密码子开始（AUG）并以终止密码子结束。

3'非翻译区（3'UTR）

3'UTR是mRNA中紧接着翻译终止密码子的部分。此区域播放通过影响基因表达的定位、稳定性、输出和翻译效率mRNA。

Poly(A) tail

聚（A）尾是腺嘌呤核苷酸的长序列（0-250个核苷酸，中间长度为50-100

在HeLa和NIH-3T3细胞中）2添加到前mRNA的3’端。

聚（A）尾部含有聚（A）结合蛋白（PABPs）的结合位点，PABPs在出口中起主要作用

从细胞核、翻译和保护降解。它的长度是反式的重要决定因素-

关系效率和mRNA稳定性。这是一个重要因素，因为它的缺失或移除通常会导致

核酸外切酶介导的mRNA降解。

OZ Biosciences mRNAs for mRNA Vaccine:

OVA mRNA 

– ref# MRNA41 (moU)

– ref# MRNA42 (Unmodified)

Designed to produce high expression level of Ovalbumin Protein. That 

is a commonly used antigen for immunization and biochemical studies.

Spike SARS-CoV-2 mRNA

– ref #MRNA35 (moU)

– ref #MRNA34 (Unmodified)

Designed to produce high expression level of Spike Protein of SARS-

COV-2 virus. That is a commonly used antigen for immunization and 

biochemical studies.

Spike DELTA mRNA

– ref #MRNA37 (moU)

– ref #MRNA36 (Unmodified)

Designed to produce high expression level of DELTA Mutant Spike 

Protein of SARS-CoV-2 virus.

Spike OMICRON mRNA

– ref #MRNA39 (moU)

Designed to produce high expression level of OMICRON Mutant Spike 

Protein of SARS-CoV-2 virus.

adsbiotec mRNA聚（A）尾蛋白中的磷酸二酯修饰简介

发表于由

 

adsbiotec mRNA聚（A）尾蛋白中的磷酸二酯修饰简介


不影响蛋白质表达的去烯基化

 

多米尼卡·斯特泽莱卡，1,3米罗斯劳·斯米坦斯基，2,3帕维尔·J·西科尔斯基，2马辛·沃明斯基，1
1岁的乔安娜·科瓦尔斯卡和2岁的雅切克·杰米利特
1
波兰华沙02-093华沙大学物理系实验物理研究所生物物理系
2
华沙大学新技术中心，波兰华沙02-097
摘要化学修饰使mRNAs的制备具有更高的稳定性和翻译活性。在本研究中，我们探索了mRNA体和聚（A）尾中5′、3′磷酸二酯键的化学修饰如何影响真核mRNA的生物学特性。为了获得修饰和未修饰的体外转录mRNAs，我们使用ATP和
在α-磷酸（包含O-to-S或O-to-BH3替换）和三种不同的RNA聚合酶-SP6、T7和聚（A）聚合酶处修饰的ATP类似物。为了验证ATP类似物在ATP存在下的掺入效率，我们开发了一种液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，用于基于转录物*降解为5′-单核苷酸的定量评估修饰频率。该方法还估计了平均聚（A）尾长度，因此为建立mRNA的结构-生物学特性关系提供了一个通用工具。我们发现，与未修饰的mRNA相比，在聚（A）尾中含有硫代磷酸基团的mRNA更不易被3′-dedenylase降解，并在培养细胞中有效表达，这使它们成为有用的研究工具和未来基于mRNA的疗法发展的潜在候选。
关键词：去烯基化；mRNA修饰；抵抗；转录；翻译

 

 

由于应用分析方法的分辨率差，导致ITE长度增加，这又因多聚（A）尾异质性而变得复杂（Jalkanen等人，2014年）。最高分辨率测序方法，如TAIL-seq（Chang等人。
PAlso-seq（Subtelny等人2014年；Liu等人2019年）和FLAM-seq（Legnini等人2019年）提供了关于核苷酸序列、聚（A）尾长度和腺嘌呤修饰存在的信息。质谱分析
通过直接注入分析或结合色谱技术成功地用于RNA（包括mRNA）分析（Kowalak等人，1993年；
Gong和McCullagh 2014；Rose等人，2015年；韦策尔和林巴赫2016；Studzinska等人，2017年；Beverly等人，2018年；Lobue等人，2019年；Calderisi等人，2020年）。这种强有力的技术提供了有关RNA结构和功能的信息
组成，包括聚（A）尾长。尽管这是一种高分辨率和敏感的方法，但由于多电荷态和相关光谱的复杂性，长mRNA的分析可能很困难（Muddiman）
等人，1996年）。
在这项研究中，为了能够分析P-mod mRNA，我们开发了一种新的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法，该方法能够同时量化修饰的磷酸化核糖核酸的数量-
双酯键和mRNA中聚（A）尾平均长度的估计（图1）。随后，我们应用该方法对携带硫代磷酸或磷酸硼砂修饰的IVT P-mod RNA进行了表征-
三种不同的RNA聚合酶可以使细胞大小不同。最后，对LC–MS/MS表征的P-mod mRNA进行了体外研究，以评估其对酶促脱烯基化的敏感性，并在培养细胞中评估磷酸二酯修饰对蛋白质表达的影响。我们瞥见了P-mod RNA的合成孔径雷达，并确定了与高效蛋白质表达兼容的修饰模式。

 

 

CleanCap™ Cas9 mRNA

发表于由

trilink 

CleanCap™  Cas9 mRNA

CleanCapTM CRISPR 相关蛋白 9 mRNA

目录号trilink L-7606

CleanCap Cas9 mRNA

Cas9 mRNA 表达一个版本的酿脓链球菌 SF370 Cas9 蛋白 (CRISPR Associated protein 9)。Cas9 作为 CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 基因组编辑系统的一部分发挥作用。在 CRISPR 系统中，一个 RNA 引导序列靶向目标位点，Cas9 蛋白被用来进行双链 DNA 切割。

Cas9 mRNA 编码具有 N 和 C 末端核定位信号 (NLS) 的 Cas9 蛋白。mRNA 内两个 NLS 信号的掺入

增加了传递到细胞核的频率，从而增加了 DNA 剪切的速度。此外，C 末端 HA 表位标签有助于 Cas9 蛋白的检测、分离和纯化。

L-7606-20 (20µg)

L-7606-100 (100µg)

L-7606-1000 (1 mg)

L-7606-BK（原液量）

1.0 mg/mL，溶于 1 mM 柠檬酸钠 (pH 6.4) mRNA 长度：4521 个核苷酸

储存于-40 °C 或以下

QC 分析

鉴别和纯度琼脂糖凝胶迁移率；通过浓度：±6%；通过

产品详情

使用 CleanCap™，TriLink 专有的共转录加盖方法对该 mRNA 加盖，从而得到天然存在的 Cap 1 结构，具有较高的加盖效率。多聚腺苷酸化，并针对哺乳动物系统进行了优化。它模拟了一个*加工的成熟 mRNA。

 

处理

 

在-40 °C 或更低温度下储存。在冰上解冻并处理 mRNA。*使用后，打开前脉冲旋转，并等分至一次性使用部分。请勿涡旋。仅使用经过认证的无 RNase 试剂和具有适当无 RNase 技术的耗材。建议使用屏障。避免冻融循环。不得与含血清的培养基混合，除非首先与稳定转染试剂络合。

 

在 Broad、MIT、Harvard、Iowa、UTokyo 和 Rockefeller（分别称为“研究机构”，统称为“机构”）和 TriLink BioTechnologies LLC (“TriLink”) 向产品买方（“有限被许可方”）授予的有限许可下，提供 Cas9/CRISPR 产品和/或其中包含的技术（“产品”），向有限被许可方传达不可转让的权利，即在有限被许可方按照以下要求开展的内部研究中使用所购买的产品金额：

 

i. 有限被许可方不得向任何其他人士或实体出售或以其他方式转让产品（包括但不限于包含全部或部分产品的任何材料），或为任何其他人士或实体的利益使用产品履行服务，

 

ii. 有限被许可方应仅使用从公司采购的协议产品的采购金额，并应仅将协议产品和协议产品的组分用于其内部研究，但以下情形除外：(a) 任何人类或临床用途，包括但不限于对人类的任何管理或任何诊断或预后用途；(b) 任何人类生殖系修饰，包括对以下各项进行修改：  人类胚胎或人类生殖细胞的 DNA；(c) 任何体内兽医或牲畜使用；(d) 为人类或动物开发、生产、分销、进口、出口、运输、销售、提供销售、营销、推广或其他专有权利或产品的开发或使用，或作为人类或动物的检测服务、治疗或诊断；(e) 根据 1938 年《联邦食品、药品和化妆品法案》第 505 节（经修订）、1944 年《公共健康服务法案》第 351 节（经修订）或任何后续法律或美国以外辖区的同等法律或法规，提供营养益处并由监管机构监管为药物或生物制品的产品；(f) 任何农业用途，包括但不限于使用或

在烟草产品的种植、生长、生产、出口或生产中的应用；及 (g) 任何与基因驱动有关的使用或应用（下称“领域”），但有限被许可方获得机构单独许可在领域外使用产品，而非用于任何商业目的的情况除外，

 

iii. 有限被许可方应按照所有适用法律法规（包括但不限于适用的人类健康和动物福利法律法规）使用产品，

 

  • 机构不得就知识产权或产品向有限被许可方提供任何类型的保证（法定或暗示），包括但不限于产品质量、条件、描述、适销性、特定用途的适合性、不侵犯知识产权或不存在潜在或其他缺陷，并且在此明确否认所有此类保证。

 

v. 研究机构应明确放弃对通过使用产品获得的结果的任何保证，包括但不限于对不准确、无效或不完整结果的任何索赔，

vi. 机构及其董事、受托人、管理人员、雇员、代理人、教员、关联研究者和学生不承担责任

向有限被许可方，包括但不限于任何使用或利润损失、业务中断或任何间接损害赔偿、附带损害赔偿、特殊损害赔偿或其他类型的间接损害赔偿，无论该等损害赔偿是如何造成的，也无论该等损害赔偿是由合同、侵权行为、严格产品责任还是其他行为引起的，

 

vii. 有限被许可方应赔偿、保护 TriLink、各研究机构及其现任和前任受托人、董事、管理人员、教员、附属研究者、学生、雇员和代理人以及其各自的继任者、继承人和受让人，使其免受因行使根据有限许可向有限被许可方授予的任何权利或违反有限许可而产生或施加的任何索赔、诉讼、调查、诉讼、要求或判决所产生的任何责任、损害、损失或费用（包括但不限于合理的律师费和费用）的损害。

该等有限被许可方的许可，但前提是，在法律不允许的范围内，该等有限被许可方同意，在法律允许的范围内，其（而非受偿方）应负责因行使根据有限许可向有限被许可方授予的任何权利或因有限被许可方违反有限许可而产生的或与之相关的任何责任、损害、损失或支出，以及

 

viii. 产品及其使用可能涉及一项或多项已专有技术或一项或多项未决专有技术申请，或  更多机构和产品的购买并未根据前述专有技术申请中针对产品或其使用、生产或商业化提出的任何要求传达许可，除非有限许可中明确规定。

 

Helixyte mRNA转染试剂 货号60031-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

Helixyte mRNA转染试剂 货号60031
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
5ml
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Helixyte mRNA转染试剂

货号 60031 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格                              5ml
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Helixyte mRNA 转染试剂是一种功能强大且用途广泛的转染试剂，它是将更多的 mRNA 引入真核细胞，或更具体地说，引入动物细胞。 它在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高转染效率，包括难以转染的细胞。不需要核摄取，这导致比 DNA 转染更快的蛋白质表达，而没有基因组整合的风险。 Helixyte mRNA转染试剂的低毒性可提高转染细胞的生存能力。 Helixyte mRNA 转染试剂不需要特殊培养基，与大多数商业转染试剂相比更易于使用。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备转染细胞
2.制备 Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物
3.将 Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养细胞
5.用合适的方法分析转染效率

细胞准备

1.在转染时将细胞培养至 ~ 90% 汇合。
2.转染前更换新鲜培养基。例如，6 孔板每孔更换 2 mL 培养基，10 cm 板更换 6 mL 培养基。

工作溶液配制

1.Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物
2.将 2.5 µg mRNA 与 200 µL 无血清培养基混合。
3.在步骤 1 中加入 7.5 µL Helixyte mRNA 转染试剂。
4.混匀并在室温下孵育 20 分钟。
注意：Helixyte mRNA 转染试剂与 mRNA 的比例需要针对不同的细胞系进行优化。 通常，Helixyte mRNA 转染试剂 (µL) 与 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板样品方案

组分 6孔板（每孔）
新鲜培养基 2ml
纯化的mRNA -2.5ug
无血清培养基 200ul
Helixyte mRNA 转染试剂 -7.5ul

操作步骤

1.转染方案

1.1将 Helixyte mRNA 转染试剂 – mRNA 混合物加入培养板并培养过夜。
注意：重组蛋白表达可以在转染后的8小时内检测到。 转染后约24小时可观察到 表达水平。

Helixyte mRNA转染试剂 货号60031

图 1. HeLa 细胞中的转染效率比较（上图）和细胞毒性比较（下图）。 HeLa 细胞在 6 孔板中培养至~90% 汇合。 2.5 µg mRNA 分别用 Lipofactamin MessengerMAX 和 Helixyte mRNA 转染试剂转染。 转染后 18 小时，使用带有 FITC 通道的荧光显微镜（上图）拍摄图像。 Lipofactamin MessengerMAX 和 Helixyte mRNA 转染试剂的转染效率相似。用 Helixyte mRNA 转染试剂转染的细胞看起来比用 Lipofatamin MessengerMAX 转染的细胞健康得多（下图）

Helixyte mRNA转染试剂 货号60030-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品详情

Helixyte mRNA转染试剂 货号60030
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
500ul
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
科研试剂
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

Helixyte mRNA转染试剂

货号 60030 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格                              500 ul
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Helixyte mRNA 转染试剂是一种功能强大且用途广泛的转染试剂，它是将更多的 mRNA 引入真核细胞，或更具体地说，引入动物细胞。 它在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高转染效率，包括难以转染的细胞。不需要核摄取，这导致比 DNA 转染更快的蛋白质表达，而没有基因组整合的风险。 Helixyte mRNA转染试剂的低毒性可提高转染细胞的生存能力。 Helixyte mRNA 转染试剂不需要特殊培养基，与大多数商业转染试剂相比更易于使用。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备转染细胞
2.制备 Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物
3.将 Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养细胞
5.用合适的方法分析转染效率

细胞准备

1.在转染时将细胞培养至 ~ 90% 汇合。
2.转染前更换新鲜培养基。例如，6 孔板每孔更换 2 mL 培养基，10 cm 板更换 6 mL 培养基。

工作溶液配制

1.Helixyte mRNA 转染试剂-RNA 混合物
2.将 2.5 µg mRNA 与 200 µL 无血清培养基混合。
3.在步骤 1 中加入 7.5 µL Helixyte mRNA 转染试剂。
4.混匀并在室温下孵育 20 分钟。
注意：Helixyte mRNA 转染试剂与 mRNA 的比例需要针对不同的细胞系进行优化。 通常，Helixyte mRNA 转染试剂 (µL) 与 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板样品方案

组分 6孔板（每孔）
新鲜培养基 2ml
纯化的mRNA -2.5ug
无血清培养基 200ul
Helixyte mRNA 转染试剂 -7.5ul

操作步骤

1.转染方案

1.1将 Helixyte mRNA 转染试剂 – mRNA 混合物加入培养板并培养过夜。
注意：重组蛋白表达可以在转染后的8小时内检测到。 转染后约24小时可观察到 表达水平。

Helixyte mRNA转染试剂 货号60030

图 1. HeLa 细胞中的转染效率比较（上图）和细胞毒性比较（下图）。 HeLa 细胞在 6 孔板中培养至~90% 汇合。 2.5 µg mRNA 分别用 Lipofactamin MessengerMAX 和 Helixyte mRNA 转染试剂转染。 转染后 18 小时，使用带有 FITC 通道的荧光显微镜（上图）拍摄图像。 Lipofactamin MessengerMAX 和 Helixyte mRNA 转染试剂的转染效率相似。用 Helixyte mRNA 转染试剂转染的细胞看起来比用 Lipofatamin MessengerMAX 转染的细胞健康得多（下图）

Transfectamine mRNA转染试剂 货号60030-AAT Bioquest荧光染料

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Transfectamine mRNA转染试剂

Transfectamine mRNA转染试剂

Transfectamine mRNA转染试剂 货号60030 货号 60030 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 500 ul 价格 2388
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Transfectamine mRNA 转染试剂是一种功能强大且用途广泛的转染试剂，旨在将更高量的 mRNA 引入真核细胞，或者更具体地说，引入动物细胞。它在各种贴壁和悬浮细胞系（包括难以转染的细胞）中提供高转染效率。不需要核摄取，这导致比 DNA 转染更快的蛋白质表达，而没有基因组整合的风险。 Transfectamine™ mRNA 转染试剂的低毒性可提高转染细胞的活力。 Transfectamine™ mRNA 转染试剂不需要特殊培养基，与大多数商业转染试剂相比更易于使用。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备转染细胞
2.制备Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物
3.将Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养细胞
5.用合适的方法分析转染效率

 

细胞准备

1.在转染时将细胞培养至 ~ 90% 汇合。
2.转染前更换新鲜培养基。例如，6 孔板每孔更换 2 mL 培养基，10 cm 板更换 6 mL 培养基。

 

工作溶液配制

1.Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物
2.将 2.5 µg mRNA 与 200 µL 无血清培养基混合。
3.在步骤 1 中加入 7.5 µL Transfectamine mRNA转染试剂。
4.混匀并在室温下孵育 20 分钟。
注意：Transfectamine mRNA转染试剂与 mRNA 的比例需要针对不同的细胞系进行优化。 通常，Transfectamine mRNA转染试剂 (µL) 与 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板样品方案

组分 6孔板（每孔）
新鲜培养基 2ml
纯化的mRNA -2.5ug
无血清培养基 200ul
Transfectamine mRNA转染试剂 -7.5ul

 

操作步骤

1.转染方案

1.1将Transfectamine mRNA转染试剂 – mRNA 混合物加入培养板并培养过夜。
注意：重组蛋白表达可以在转染后的8小时内检测到。 转染后约24小时可观察到最大表达水平。

Transfectamine mRNA转染试剂 货号60030

图 1. HeLa 细胞中的转染效率比较（上图）和细胞毒性比较（下图）。 HeLa 细胞在 6 孔板中培养至~90% 汇合。 2.5 µg mRNA 分别用 Lipofactamin MessengerMAX 和Transfectamine mRNA转染试剂转染。 转染后 18 小时，使用带有 FITC 通道的荧光显微镜（上图）拍摄图像。 Lipofactamin MessengerMAX 和Transfectamine mRNA转染试剂的转染效率相似。用Transfectamine mRNA转染试剂转染的细胞看起来比用 Lipofatamin MessengerMAX 转染的细胞健康得多（下图）。

 

参考文献

A Systematic Study of Unsaturation in Lipid Nanoparticles Leads to Improved mRNA Transfection In Vivo.
Authors: Lee, Sang M and Cheng, Qiang and Yu, Xueliang and Liu, Shuai and Johnson, Lindsay T and Siegwart, Daniel J
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021): 5848-5853

A synthetic mRNA cell reprogramming method using CYCLIN D1 promotes DNA repair generating improved genetically stable human induced pluripotent stem cells.
Authors: Alvarez-Palomo, Ana Belén and Requena-Osete, Jordi and Delgado-Morales, Raul and Moreno-Manzano, Victoria and Grau-Bove, Carme and Tejera, Agueda M and Otero, Manel Juan and Barrot, Carme and Santos-Barriopedro, Irene and Vaquero, Alejandro and Mezquita-Pla, Jovita and Moran, Sebastian and Naya, Carlos Hobeich and Garcia-Martínez, Iris and Pérez, Francisco Vidal and Blasco, María A and Esteller, Manel and Edel, Michael J
Journal: Stem cells (Dayton, Ohio) (2021)

CD40 signaling augments IL-10 expression and the tolerogenicity of IL-10-induced regulatory dendritic cells.
Authors: Dawicki, Wojciech and Huang, Hui and Ma, Yanna and Town, Jennifer and Zhang, Xiaobei and Rudulier, Chris D and Gordon, John R
Journal: PloS one (2021): e0248290

Expediting in vitro characterization of mRNA-based gene therapies via high-content fluorescent imaging.
Authors: Vigil, Toriana N and Zhang-Hulsey, Diana and Santos, Jose Luis and Patrick Hussmann, G
Journal: Analytical biochemistry (2021): 114259

LipoParticles: Lipid-Coated PLA Nanoparticles Enhanced In Vitro mRNA Transfection Compared to Liposomes.
Authors: Ayad, Camille and Libeau, Pierre and Lacroix-Gimon, Céline and Ladavière, Catherine and Verrier, Bernard
Journal: Pharmaceutics (2021)

Live-cell Imaging of Single-Cell Arrays (LISCA) – a Versatile Technique to Quantify Cellular Kinetics.
Authors: Reiser, Anita and Woschée, Daniel and Kempe, Simon Maximilian and Rädler, Joachim Oskar
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2021)

Location of a single histidine within peptide carriers increases mRNA delivery.
Authors: He, Jiaxi and Xu, Songhui and Leng, Qixin and Mixson, A James
Journal: The journal of gene medicine (2021): e3295

PEGylation of poly(amine-co-ester) polyplexes for tunable gene delivery.
Authors: Grun, Molly K and Suberi, Alexandra and Shin, Kwangsoo and Lee, Teresa and Gomerdinger, Victoria and Moscato, Zoe M and Piotrowski-Daspit, Alexandra S and Saltzman, W Mark
Journal: Biomaterials (2021): 120780

Preclinical evaluation of CD8+ anti-BCMA mRNA CAR T cells for treatment of multiple myeloma.
Authors: Lin, Liang and Cho, Shih-Feng and Xing, Lijie and Wen, Kenneth and Li, Yuyin and Yu, Tengteng and Hsieh, Phillip A and Chen, Hailin and Kurtoglu, Metin and Zhang, Yi and Andrew Stewart, C and Munshi, Nikhil and Anderson, Kenneth C and Tai, Yu-Tzu
Journal: Leukemia (2021): 752-763

Sustained release of PKR inhibitor C16 from mesoporous silica nanoparticles significantly enhances mRNA translation and anti-tumor vaccination.
Authors: Zhang, Wei and Liu, Yi and Min Chin, Jas and Phua, Kyle K L
Journal: European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e.V (2021): 179-187

说明书
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Transfectamine mRNA转染试剂 货号60031-AAT Bioquest荧光染料

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Transfectamine mRNA转染试剂

Transfectamine mRNA转染试剂

Transfectamine mRNA转染试剂 货号60031 货号 60031 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 5 ml 价格 11628
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Transfectamine mRNA 转染试剂是一种功能强大且用途广泛的转染试剂，旨在将更高量的 mRNA 引入真核细胞，或者更具体地说，引入动物细胞。它在各种贴壁和悬浮细胞系（包括难以转染的细胞）中提供高转染效率。不需要核摄取，这导致比 DNA 转染更快的蛋白质表达，而没有基因组整合的风险。 Transfectamine™ mRNA 转染试剂的低毒性可提高转染细胞的活力。 Transfectamine™ mRNA 转染试剂不需要特殊培养基，与大多数商业转染试剂相比更易于使用。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备转染细胞
2.制备Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物
3.将Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物添加到细胞培养物中
4.过夜培养细胞
5.用合适的方法分析转染效率

 

细胞准备

1.在转染时将细胞培养至 ~ 90% 汇合。
2.转染前更换新鲜培养基。例如，6 孔板每孔更换 2 mL 培养基，10 cm 板更换 6 mL 培养基。

 

工作溶液配制

1.Transfectamine mRNA转染试剂-RNA 混合物
2.将 2.5 µg mRNA 与 200 µL 无血清培养基混合。
3.在步骤 1 中加入 7.5 µL Transfectamine mRNA转染试剂。
4.混匀并在室温下孵育 20 分钟。
注意：Transfectamine mRNA转染试剂与 mRNA 的比例需要针对不同的细胞系进行优化。 通常，Transfectamine mRNA转染试剂 (µL) 与 mRNA (µg) 的比率 =（3 至 5 µL）至 1 µg。

6孔板样品方案

组分 6孔板（每孔）
新鲜培养基 2ml
纯化的mRNA -2.5ug
无血清培养基 200ul
Transfectamine mRNA转染试剂 -7.5ul

 

操作步骤

1.转染方案

1.1将Transfectamine mRNA转染试剂 – mRNA 混合物加入培养板并培养过夜。
注意：重组蛋白表达可以在转染后的8小时内检测到。 转染后约24小时可观察到最大表达水平。

Transfectamine mRNA转染试剂 货号60031

图 1. HeLa 细胞中的转染效率比较（上图）和细胞毒性比较（下图）。 HeLa 细胞在 6 孔板中培养至~90% 汇合。 2.5 µg mRNA 分别用 Lipofactamin MessengerMAX 和Transfectamine mRNA转染试剂转染。 转染后 18 小时，使用带有 FITC 通道的荧光显微镜（上图）拍摄图像。 Lipofactamin MessengerMAX 和Transfectamine mRNA转染试剂的转染效率相似。用Transfectamine mRNA转染试剂转染的细胞看起来比用 Lipofatamin MessengerMAX 转染的细胞健康得多（下图）。

 

参考文献

A Systematic Study of Unsaturation in Lipid Nanoparticles Leads to Improved mRNA Transfection In Vivo.
Authors: Lee, Sang M and Cheng, Qiang and Yu, Xueliang and Liu, Shuai and Johnson, Lindsay T and Siegwart, Daniel J
Journal: Angewandte Chemie (International ed. in English) (2021): 5848-5853

A synthetic mRNA cell reprogramming method using CYCLIN D1 promotes DNA repair generating improved genetically stable human induced pluripotent stem cells.
Authors: Alvarez-Palomo, Ana Belén and Requena-Osete, Jordi and Delgado-Morales, Raul and Moreno-Manzano, Victoria and Grau-Bove, Carme and Tejera, Agueda M and Otero, Manel Juan and Barrot, Carme and Santos-Barriopedro, Irene and Vaquero, Alejandro and Mezquita-Pla, Jovita and Moran, Sebastian and Naya, Carlos Hobeich and Garcia-Martínez, Iris and Pérez, Francisco Vidal and Blasco, María A and Esteller, Manel and Edel, Michael J
Journal: Stem cells (Dayton, Ohio) (2021)

CD40 signaling augments IL-10 expression and the tolerogenicity of IL-10-induced regulatory dendritic cells.
Authors: Dawicki, Wojciech and Huang, Hui and Ma, Yanna and Town, Jennifer and Zhang, Xiaobei and Rudulier, Chris D and Gordon, John R
Journal: PloS one (2021): e0248290

Expediting in vitro characterization of mRNA-based gene therapies via high-content fluorescent imaging.
Authors: Vigil, Toriana N and Zhang-Hulsey, Diana and Santos, Jose Luis and Patrick Hussmann, G
Journal: Analytical biochemistry (2021): 114259

LipoParticles: Lipid-Coated PLA Nanoparticles Enhanced In Vitro mRNA Transfection Compared to Liposomes.
Authors: Ayad, Camille and Libeau, Pierre and Lacroix-Gimon, Céline and Ladavière, Catherine and Verrier, Bernard
Journal: Pharmaceutics (2021)

Live-cell Imaging of Single-Cell Arrays (LISCA) – a Versatile Technique to Quantify Cellular Kinetics.
Authors: Reiser, Anita and Woschée, Daniel and Kempe, Simon Maximilian and Rädler, Joachim Oskar
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2021)

Location of a single histidine within peptide carriers increases mRNA delivery.
Authors: He, Jiaxi and Xu, Songhui and Leng, Qixin and Mixson, A James
Journal: The journal of gene medicine (2021): e3295

PEGylation of poly(amine-co-ester) polyplexes for tunable gene delivery.
Authors: Grun, Molly K and Suberi, Alexandra and Shin, Kwangsoo and Lee, Teresa and Gomerdinger, Victoria and Moscato, Zoe M and Piotrowski-Daspit, Alexandra S and Saltzman, W Mark
Journal: Biomaterials (2021): 120780

Preclinical evaluation of CD8+ anti-BCMA mRNA CAR T cells for treatment of multiple myeloma.
Authors: Lin, Liang and Cho, Shih-Feng and Xing, Lijie and Wen, Kenneth and Li, Yuyin and Yu, Tengteng and Hsieh, Phillip A and Chen, Hailin and Kurtoglu, Metin and Zhang, Yi and Andrew Stewart, C and Munshi, Nikhil and Anderson, Kenneth C and Tai, Yu-Tzu
Journal: Leukemia (2021): 752-763

Sustained release of PKR inhibitor C16 from mesoporous silica nanoparticles significantly enhances mRNA translation and anti-tumor vaccination.
Authors: Zhang, Wei and Liu, Yi and Min Chin, Jas and Phua, Kyle K L
Journal: European journal of pharmaceutics and biopharmaceutics : official journal of Arbeitsgemeinschaft fur Pharmazeutische Verfahrenstechnik e.V (2021): 179-187

说明书
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