qa-bio LT-MONO-96说明书

QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司，所提供的糖基化研究产品涵盖糖苷内/外切酶，去糖基化没，唾液酸产品，多糖产品纯化试剂盒，多糖标记试剂盒等，同时提供多糖分析服务。

qa-bio LT-MONO-96说明书

产品编号：LT-MONO-96

单糖分析试剂盒

LudgerTag单糖分析试剂盒包含用于糖蛋白生物制药和标准品上发现的单糖的释放和荧光标记的试剂。

单糖分析是ICH Q6B生物制药表征指南中规定的法规要求。该信息可用于药物开发的所有阶段，作为确定糖基化类型（N-连接和/或O-连接）和糖基化发生程度的方法。它还可用于证明制造过程中QC批次释放的批次之间的一致性。

一个LudgerTag单糖分析试剂盒包含试剂，每套试剂可释放和标记多达96个独立的分析样品，两套试剂（每组48个样品）。通常，每个样品分析50微克糖蛋白。

单糖分析的方法如下：
1。通过弱酸水解从糖蛋白中释放单糖。
2.用2-氨基苯甲酸（2AA）荧光标记释放的单糖。
3.通过HPLC或UHPLC对2AA标记的单糖进行相对定量分析

该试剂盒还含有LudgerTag MonoMix，一种含有葡萄糖胺，半乳糖胺，半乳糖，甘露糖和岩藻糖的单糖标准品。木糖包含在内部用作内标。

提供两种水解酸。2摩尔三氟yi酸（2M TFA）和6摩尔浓度的盐酸（6M HCl）。2M TFA适用于释放中性单糖，但对于我们推荐使用6M HCl的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）单糖效果较差。我们建议在样品的单独重复中使用这些酸。

LudgerTag释放试剂
三氟yi酸 – 2M TFA 
盐酸 – 6M HCl

LudgerTag单糖分析定量标准
MonoMix单糖标准品 – 葡萄糖胺，半乳糖胺，半乳糖，甘露糖和岩藻糖各10 nmol，br> 
木糖标准品 – 100 nmol – 用作准确定量的内部参考标准

我们还推荐纯化的糖肽标准品。Ludger开发了一种定量标准品（BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一种复杂的双触角N-连接聚糖，终止于两种N-乙酰神经氨酸。使用此标准将使您能够检查聚糖释放，标记和恢复的效率，并使您对单糖测量的准确性有信心。

HPLC – 标记单糖的定量分析
我们提供两种色谱柱用于分析标记单糖，具体取决于您是否在实验室中使用HPLC或UHPLC系统。如果使用HPLC，LudgerSep R2色谱柱（目录号LS-R2-4.6×150）可以很好地分离大多数N-连接和O-连接聚糖中发现的七种主要单糖。如果您有UHPLC系统，我们建议使用LudgerSep uR2色谱柱（目录号LS-UR2-2.1×50），每个样品可分离8分钟。

溶剂：本指南中的聚糖分析梯度基于以下溶剂：
溶剂A：BPT溶剂 – 纯度水基溶剂，0.2％丁胺（每升2 mL），0.5％磷酸，每升5 mL），1％4氢呋喃（每升10毫升）。
溶剂B：50％乙腈：50％溶剂A.

我们还测试了不含乙腈的溶剂系统。请咨询更多详情。

单糖分析参考文献

Abo M，He LP，Sato K，Okubo A. 用毛细管电泳法测定用2-氨基苯甲酸衍生的单糖。 方法Mol Biol。984：45-50（2013）

Harazono A1，Kobayashi T，Kawasaki N，Itoh S，Tada M，Hashii N，Ishii A，Arato T，Yanagihara S，Yagi Y，Koga A，Tsuda Y，Kimura M，Sakita M，Kitamura S，Yamaguchi H，Mimura H ，Murata Y，Hamazume Y，Sato T，Natsuka S，Kakehi K，Kinoshita M，Watanabe S，Yamaguchi T. 作为生物制药的碳水化合物测试的单糖组成分析的比较研究。Biologicals May; 39（3）：171-80。（2011年）

He L，Sato K，Abo M，Okubo A，Yamazaki S. 通过毛细管电泳分离用2-氨基苯甲酸衍生的糖类及其通过核磁共振的结构考虑。 Anal Biochem。3月1日; 314（1）：128-34（2003）

Saddic GN，Dhume ST，Anumula KR。使用高荧光邻氨基苯jia酸（AA）标签通过HPLC进行糖蛋白的碳水化合物组成分析。方法Mol Biol。446：215-29（2008）

Sato K，Sato K，Okubo A，Yamazaki S. 通过毛细管电泳测定用2-氨基苯甲酸衍生的单糖。 Anal Biochem。8月15日; 251（1）：119-21（1997）

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