Cell Meter 细胞内谷胱甘肽GSH检测试剂盒 适合流式细胞检测

简要概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量耗尽的抗氧化剂还原型谷胱甘肽（GSH）来检测细胞凋亡。 GSH参与许多细胞过程，包括清除自由基， 解毒，细胞信号传导和细胞增殖。细胞中GSH浓度的降低是许多细胞类型中对不同凋亡刺激物响应的细胞死亡进程的早期标志。我们的Cell Meter 细胞内GSH检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的检测方法，用于检测GSH降低的细胞凋亡。该荧光测定法是基于使用我们专有的非荧光Thiolite Green染料检测细胞中GSH的结果，该染料与硫醇反应后会发出强烈的荧光。在正常细胞中，Thiolite Green主要在细胞质中积累，但在凋亡细胞中它会部分转移到线粒体中，而Thiolite Green的染色强度会降低。 Thiolite Green染色的细胞可以通过流式细胞仪观察。该试剂盒可与其他试剂配对，例如7-AAD（Cat＃17501），碘化丙啶（Cat＃17517），用于多参数研究细胞生存力和凋亡。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡激活剂和抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 用5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞

2. 将5 µL 200X Thiolite Green加入1 mL细胞溶液中

3. 将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至30分钟

4. 沉淀细胞并将细胞重悬于1 mL生长培养基中

5. 使用带有FL1通道的流式细胞仪分析细胞

溶液配制

储存溶液配制

1. Thiolite 绿色原液（200X）：将500µL DMSO（组分C）加入小瓶Thiolite Green（组分A）中并充分混合，制成200X Thiolite Green储备液，避光。

实验步骤

1.对于每个样品，在1 mL温热培养基或自备缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞所需的时间以诱导凋亡。

3.向处理过的细胞中加入5µL 200X Thiolite Green储备溶液。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育15至30分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Thiolite Green染料上样溶液孵育之前，用含血清的培养基清洗细胞一次。合适的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.可选：将细胞以1000 rpm离心4分钟，然后将细胞重悬于1 mL的测定缓冲液（组分B）或自备缓冲液中。

6.使用带有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490/525 nm）检测荧光强度。