直扩型Taq DNA聚合酶(dNTP)说明书
直扩型Taq DNA聚合酶(dNTP)说明书
产品详情
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货号 |
规格 |
价格 |
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78DC10012-500U |
500U |
￥180.00 |
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78DC10012-500U×5 |
500U×5 |
￥720.00 |
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78DC10012-2500U×4 |
2500U×4 |
￥2340.00 |
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78DC10012-2500U×10 |
2500U×10 |
￥5400.00 |
产品详情
Taq-D DNA聚合酶（KlenTaq），是大肠杆菌重组表达的嗜热细菌Thermus aquaticus来源的外切酶缺失型Taq DNA聚合酶（删除了5’ 外切酶结构域）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无5’→3’外切酶活性和3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3'-dA尾巴。不可用于Taqman探针法q-PCR。本酶经基因工程改造，尤其适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型。扩增片段的长度可达3 kb。延伸速度为1.0 kb/ min（72℃）。
特点
· 无外切酶活性，适合于溶解曲线法单核苷酸多态性（SNP）分型；
· 热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min；
· 可以掺入dUTP、dITP、荧光标记核苷酸；
· 相比普通Taq DNA 聚合酶，本酶更加适合未处理的血液、组织、唾液等样本的PCR。
浓度
2.5U/μl
活性定义
以大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20, and 50% glycerol。
产品包装规格及组成
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Component |
78DC10012–500u |
78DC10012–2500u |
78DC10012–10000u |
78DC10011–25000U |
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Taq-D DNA聚合酶 （KlenTaq） |
500U |
500U×5 |
2500U×4 |
2500U×10 |
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10×Taq-D Buffer |
1.0 ml×1 |
1.0 ml×5 |
5.0 ml×4 |
5.0 ml×10 |
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2 mM dNTPs |
1.0 ml×1 |
1.0 ml×5 |
5.0 ml×4 |
5.0 ml×10 |
运输与保存
-20℃保存 冰袋运输
适用范围
· 溶解曲线法基因分型/SNP测定；
· 菌落PCR；
· TA克隆PCR产物添加3’-dA；
· DNA荧光标记；
· 血液、组织样本等直扩PCR。
应用举例
以下反应举例为50 μl标准PCR体系， 仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
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组份 |
体积/μl |
终浓度 |
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10×Taq-D Buffer |
5 |
1× |
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dNTPs（2.0 mM） |
5 |
0.2 mM |
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引物F（10 μM） |
1.5 |
0.3 μM |
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引物R（10 μM） |
1.5 |
0.3 μM |
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Template |
Varable* |
/ |
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Taq-D（2.5U/μl） |
1.0 |
2.5U |
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ddH2O |
Varable |
/ |
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总体积 |
50 |
/ |
*DNA template可参照如下标准（50 μl PCR体系）：
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l 人类基因组DNA |
0.1 μg-1 μg |
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l λDNA |
0.5 ng-5 ng |
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l 质粒DNA |
0.01 ng-1 ng |
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l 大肠杆菌DNA |
10 ng-100 ng |
PCR反应条件
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95℃ |
5 min |
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95℃ |
15 sec |
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55~72℃ |
20 sec |
30 Cycles |
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72℃ |
1-2 kb/min |
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72℃ |
5 min |
注意事项
· 不可用于Taqman探针法q-PCR。
· 碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq-D DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。
· 建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
· 如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。
· 本公司Buffer经大量PCR反应实例优化而成，然而对某些PCR反应存在一个镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的buffer和MgCl2/MgSO4。
· 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。
室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20度。
