适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 根据需要处理细胞
2. 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
3. 更换染色缓冲液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
4. 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
5. 可选：用4％甲醛固定细胞

储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液（100X）：
将100 µL DMSO（组分C）加入小瓶C6 NBD神经酰胺（组分A）中并充分混合。注：将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。

工作溶液配制

1. C6 NBD神经酰胺工作液：
将10 µL NBD神经酰胺原液（100X）添加到990 µL染色缓冲液（组分B）中，制成NBD神经酰胺工作液。
可选：将10 µL Hoechst 33342（组分D）添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。

操作步骤

1. 接种并根据需要处理细胞。
2. 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
3. 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
4. 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液，并用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）代替。
5. 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
6. 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
7. 从步骤4中除去染色缓冲液，然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。 注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X10⁶细胞/ mL）的4％甲醛固定液。（可选）
8. 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次，然后用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）替换。（可选）

图例

图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟，然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。

参考文献

Molecular determinants of ER-Golgi contacts identified through a new FRET-FLIM system
Authors: R. Venditti
Journal: J Cell Biol (2019): 1055-1065

A Golgi Lipid Signaling Pathway Controls Apical Golgi Distribution and Cell Polarity during Neurogenesis
Authors: Z. Xie
Journal: Dev Cell (2018): 725-740 e4

A putative calcium-ATPase of the secretory pathway family may regulate calcium/manganese levels in the Golgi apparatus of Entamoeba histolytica
Authors: M. A. Rodriguez
Journal: Parasitol Res (2018): 3381-3389

Activation of neutral sphingomyelinase 2 by starvation induces cell-protective autophagy via an increase in Golgi-localized ceramide
Authors: M. J. Back
Journal: Cell Death Dis (2018): 670

Functions of neutral ceramidase in the Golgi apparatus
Authors: W. Sakamoto
Journal: J Lipid Res (2018): 2116-2125

Regulation of glucosylceramide synthesis by Golgi-localized phosphoinositide
Authors: Y. Ishibashi
Journal: Biochem Biophys Res Commun (2018): 1011-1018

Structure of the Golgi apparatus is not influenced by a GAG deletion mutation in the dystonia-associated gene Tor1a
Authors: S. B. Mitchell
Journal: PLoS One (2018): e0206123

An inducible ER-Golgi tether facilitates ceramide transport to alleviate lipotoxicity
Authors: L. K. Liu
Journal: J Cell Biol (2017): 131-147

Ceramide Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Trans Golgi Region at Organelle Membrane Contact Sites
Authors: K. Hanada
Journal: Adv Exp Med Biol (2017): 69-81

Endoplasmic reticulum is the sorting core facility in the Golgi-lacking protozoan Giardia lamblia
Authors: N. Zamponi
Journal: Traffic (2017): 604-621