链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记 货号16948-AAT Bioquest荧光染料

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链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记

链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记

链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记    货号16948 货号 16948 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 ug 价格 1272
Ex (nm) 629 Em (nm) 780
分子量 ~52000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:16948

产品名称:链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记

规格:100ug

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:N/A

溶剂:水

激发波长(nm):N/A

发射波长(nm):N/A

 

产品介绍

链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素,链霉亲和素缀合物与生物素缀合物一起广泛用于特异性检测多种蛋白质,蛋白质基序,核酸和其他分子,因为链霉亲和素对生物素具有非常高的结合亲和力。该mFluor Red 780-链霉亲和素偶联物包含链霉亲和素(作为生物素结合蛋白),共价连接了mFluor Red 780(作为荧光标记)。当与生物素化的一抗结合使用时,通常用作间接免疫荧光染色的第二步试剂。对于使用配备有633 nm激发光的流式细胞仪(例如Red Laser)进行基于生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试,它是非常有价值的工具。多种互补的生物素化试剂可从许多商业供应商处获得。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记。

 

参考文献

Overexpression of MACC1 and the association with hepatocyte growth factor/c-Met in epithelial ovarian cancer
Authors: Hongyu Li, Hui Zhang, Shujun Zhao, Yun Shi, Junge Yao, Yanyan Zhang, Huanhuan Guo, Xingsuo Liu
Journal: Oncology letters (2015): 1989–1996

 

相关产品

产品名称 货号
链霉亲和素 HRP-标记 Cat#16920
链霉亲和素偶联物 iFluor 647-标记 Cat#16966
链霉亲和素偶联物 trFluor Eu-标记 Cat#16925

说明书
链霉亲和素偶联物 mFluor Red 780-标记.pdf

1mM mFluor dUTP溶液 货号17011-AAT Bioquest荧光染料

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1mM mFluor dUTP溶液

1mM mFluor dUTP溶液

1mM mFluor dUTP溶液    货号17011 货号 17011 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 nmoles 价格 3924
Ex (nm) 406 Em (nm) 445
分子量 ~1000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:17011

产品名称:1mM mFluor dUTP溶液

规格:25 nmoles

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:~1000

溶剂:水

激发波长(nm):405

发射波长(nm):444

 

产品介绍

1mM mFluor dUTP溶液是美国AAT Bioquest生产的荧光染料,染料修饰的脱氧尿苷5′-三磷酸酯(例如氨基烯丙基-dUTP)可用于通过常规酶促掺入方法(例如逆转录,缺口翻译,随机引物标记或PCR)生产含染料的DNA。这种酶促荧光标记方法广泛用于FISH探针和基于微阵列的实验。该mFluor 450-dUTP偶联物可与PacificBlue®滤光片组一起用作蓝色荧光色。(PacificBlue®是Invitrogen的商标)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的1mM mFluor dUTP溶液。

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参考文献

A visual DNA chip for simultaneous detection of hepatitis B virus, hepatitis C virus and human immunodeficiency virus type-1
Authors: Wen JK, Zhang XE, Cheng Z, Liu H, Zhou YF, Zhang ZP, Yang JH, Deng JY.
Journal: Biosens Bioelectron (2004): 685

Fluorescent DNA hybridization probe preparation using amine modification and reactive dye coupling
Authors: Cox WG, Singer VL.
Journal: Biotechniques (2004): 114

Aminomodified nucleobases: functionalized nucleoside triphosphates applicable for SELEX
Authors: Schoetzau T, Langner J, Moyroud E, Roehl I, Vonhoff S, Klussmann S.
Journal: Bioconjug Chem (2003): 919

Simple method for preparation of fluor/hapten-labeled dUTP
Authors: Nimmakayalu M, Henegariu O, Ward DC, Bray-Ward P.
Journal: Biotechniques (2000): 518

Topology of yeast RNA polymerase II subunits in transcription elongation complexes studied by photoaffinity cross-linking
Authors: Wooddell CI, Burgess RR.
Journal: Biochemistry (2000): 13405

Quantitative analysis of polymerase chain reaction products using biotinylated dUTP incorporation
Authors: Duplaa C, Couffinhal T, Labat L, Moreau C, Lamaziere JM, Bonnet J.
Journal: Anal Biochem (1993): 229

A non-radioisotopic reverse transcriptase assay using biotin-11-deoxyuridinetriphosphate on primer-immobilized microtiter plates
Authors: Urabe T, Sano K, Tanno M, Mizoguchi J, Otani M, Lee MH, Takasaki T, Kusakabe H, Imagawa DT, Nakai M.
Journal: J Virol Methods (1992): 145

Affinity isolation of active murine erythroleukemia cell chromatin: uniform distribution of ubiquitinated histone H2A between active and inactive fractions
Authors: Dawson BA, Herman T, Haas AL, Lough J.
Journal: J Cell Biochem (1991): 166

Non-radioactive labeling and detection of nucleic acids. IV. Synthesis and properties of digoxigenin-modified 2′-deoxyuridine-5′-triphosphates and a photoactivatable analog of digoxigenin (photodigoxigenin)
Authors: Muhlegger K, Huber E, von der Eltz H, Ruger R, Kessler C.
Journal: Biol Chem Hoppe Seyler (1990): 953

 

相关产品

产品名称 货号
mFluor Violet 450琥珀酰亚胺酯 Cat#1150
mFluor Violet 450 酸 Cat#1140
mFluor Violet 450 马来酰亚胺 Cat#1600

说明书
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Annexin V-mFluor Violet 450标记 货号20080-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-mFluor Violet 450标记

Annexin V-mFluor Violet 450标记

Annexin V-mFluor Violet 450标记    货号20080 货号 20080 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 406 Em (nm) 445
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-mFluor Violet 450标记探针是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物,属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸(PS),其通常保持在细胞膜的内叶(细胞质侧)。 在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具,旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合,它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此,我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用,以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Annexin V-mFluor Violet 450标记探针。 

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产品说明书

分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

参考文献

White light-induced cell apoptosis by a conjugated polyelectrolyte through singlet oxygen generation
Authors: Jiamei Liang, Pan Wu, Chunyan Tan, Yuyang Jiang
Journal: RSC advances (2018): 9218–9222

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: (2016): 77–92

 

相关产品

产品名称 货号
Annexin V-mFluor Violet 540标记 Cat#20082
Annexin V-mFluor Violet 510标记 Cat#20081
Annexin V-Cy7标记 Cat#20068

说明书
Annexin V-mFluor Violet 450标记.pdf

Annexin V-mFluor Violet 540标记 货号20082-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V-mFluor Violet 540标记

Annexin V-mFluor Violet 540标记

Annexin V-mFluor Violet 540标记    货号20082 货号 20082 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 402 Em (nm) 535
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-mFluor Violet 540标记探针是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物,属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸(PS),其通常保持在细胞膜的内叶(细胞质侧)。 在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具,旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合,它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此,我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用,以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Annexin V-mFluor Violet 540标记探针。 

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产品说明书

分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

参考文献

White light-induced cell apoptosis by a conjugated polyelectrolyte through singlet oxygen generation
Authors: Jiamei Liang, Pan Wu, Chunyan Tan, Yuyang Jiang
Journal: RSC advances (2018): 9218–9222

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: (2016): 77–92

 

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产品名称 货号
Annexin V-mFluor Violet 510标记 Cat#20081
Annexin V-mFluor Violet 450标记 Cat#20080
Annexin V-Cy7标记 Cat#20068

说明书
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mFluor Violet 505琥珀酰亚胺酯 货号1154-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Violet 505琥珀酰亚胺酯

mFluor Violet 505琥珀酰亚胺酯

mFluor Violet 505琥珀酰亚胺酯    货号1154 货号 1154 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2388
Ex (nm) 393 Em (nm) 504
分子量 786.93 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1154

产品名称:mFluor Violet 505琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:786.93

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。 这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以通过流式细胞仪的激光线(例如405 nm,488 nm和633 nm)很好地激发。 mFluor 紫色染料经过优化,可在405 nm的紫激光下激发。 AAT Bioquest提供了由紫色激光激发的数量的荧光染料。 mFluor Violet 505染料的荧光激发和发射值分别为〜405 nm和〜505 nm。 这些光谱特性使其成为流式细胞仪应用程序的独特颜色。 mFluor Violet 505 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。 mFluor Violet 505 SE提供了一种方便的工具,可通过紫激光激发标记流式细胞仪应用中的单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa)。

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参考文献

High throughput pSTAT signaling profiling by fluorescent cell barcoding and computational analysis.
Authors: Tsai, Wanxia Li and Vian, Laura and Giudice, Valentina and Kieltyka, Jacqueline and Liu, Christine and Fonseca, Victoria and Gazaniga, Nathalia and Gao, Shouguo and Kajigaya, Sachiko and Young, Neal S and Biancotto, Angélique and Gadina, Massimo
Journal: Journal of immunological methods (2020): 112667

Lot-to-lot stability of antibody reagents for flow cytometry.
Authors: Böttcher, Sebastian and van der Velden, Vincent H J and Villamor, Neus and Ritgen, Matthias and Flores-Montero, Juan and Escobar, Hugo Murua and Kalina, Tomas and Brüggemann, Monika and Grigore, Georgiana and Martin-Ayuso, Marta and Lecrevisse, Quentin and Pedreira, Carlos E and van Dongen, Jacques J M and Orfao, Alberto
Journal: Journal of immunological methods (2019): 112294

First record of Doleschallia tongana (Lepidoptera: Nymphalidae) for Guam Island.
Authors: Manuel, Jake and Tennent, W John and Buden, Donald W and Moore, Aubrey
Journal: F1000Research (2018): 366

Optimization and standardization of fluorescent cell barcoding for multiplexed flow cytometric phenotyping.
Authors: Giudice, Valentina and Feng, Xingmin and Kajigaya, Sachiko and Young, Neal S and Biancotto, Angélique
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2017): 694-703

Quantification of mitochondrial reactive oxygen species in living cells by using multi-laser polychromatic flow cytometry.
Authors: De Biasi, Sara and Gibellini, Lara and Bianchini, Elena and Nasi, Milena and Pinti, Marcello and Salvioli, Stefano and Cossarizza, Andrea
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2016): 1106-1110

The new violet laser dye, Krome Orange, allows an optimal polychromatic immunophenotyping based on CD45-KO gating.
Authors: Preijers, Frank W M B and Huys, Erik and Leenders, Marij and Nieto, Laura and Gautherot, Emmanuel and Moshaver, Bijan
Journal: Journal of immunological methods (2011): 42-51

Tyramide signal amplification for analysis of kinase activity by intracellular flow cytometry.
Authors: Clutter, Matthew R and Heffner, Garrett C and Krutzik, Peter O and Sachen, Kacey L and Nolan, Garry P
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2010): 1020-31

Violet laser diodes in flow cytometry: an update.
Authors: Telford, William and Kapoor, Veena and Jackson, James and Burgess, Walter and Buller, Gayle and Hawley, Teresa and Hawley, Robert
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2006): 1153-60

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mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯 货号1641-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯    货号1641 货号 1641 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 353 Em (nm) 421
分子量 1385.78 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1641

产品名称:mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1385.78

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。 这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激光线(例如350nm,405nm,488nm和633nm)很好地激发。 mFluor UV染料经过优化,可在350 nm的UV激光下激发。 AAT Bioquest提供了最大数量的荧光染料,这些荧光染料可以被350 nm的紫外线激光激发。 mFluor UV 420染料的荧光激发和发射最大值分别为〜350 nm和〜420 nm。 这些光谱特性使其成为流式细胞仪应用程序的独特颜色。 mFluor UV 420 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。 mFluor UV 420 SE提供了一种方便的工具,可通过UV激光激发来标记单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),用于流式细胞仪应用。

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参考文献

Influenza-specific IgG1+ memory B-cell numbers increase upon booster vaccination in healthy adults but not in patients with predominantly antibody deficiency.
Authors: Hartley, Gemma E and Edwards, Emily S J and Bosco, Julian J and Ojaimi, Samar and Stirling, Robert G and Cameron, Paul U and Flanagan, Katie and Plebanski, Magdalena and Hogarth, Philip Mark and O’Hehir, Robyn E and van Zelm, Menno C
Journal: Clinical & translational immunology (2020): e1199

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mFluor UV 420琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯 货号1642-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯    货号1642 货号 1642 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 357 Em (nm) 461
分子量 729.68 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1642

产品名称:mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:729.68

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。 这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激光线(例如350nm,405nm,488nm和633nm)很好地激发。 mFluor UV染料经过优化,可在350 nm的UV激光下激发。 AAT Bioquest提供了最大数量的荧光染料,这些荧光染料可以被350 nm的紫外线激光激发。 mFluor UV 455染料的荧光激发和发射最大值分别为〜350 nm和〜455 nm。 这些光谱特性使其成为流式细胞仪应用程序的独特颜色。 mFluor UV 455 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。 mFluor UV 455 SE提供了一种方便的工具,可通过UV激光激发为流式细胞仪应用标记单克隆抗体,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa)。

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参考文献

Deep ultraviolet lasers for flow cytometry.
Authors: Telford, William and Georges, Thierry and Miller, Clint and Voluer, Pascal
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 227-233

Ultraviolet 320 nm laser excitation for flow cytometry.
Authors: Telford, William and Stickland, Lynn and Koschorreck, Marco
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2017): 314-325

Near-ultraviolet laser diodes for brilliant ultraviolet fluorophore excitation.
Authors: Telford, William G
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2015): 1127-37

说明书
mFluor UV 455琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯 货号1645-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯    货号1645 货号 1645 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 542 Em (nm) 560
分子量 1611.98 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1645

产品名称:mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1611.98

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激光线(例如350nm,405nm,488nm和633nm)很好地激发。mFluor UV染料经过优化,可在350 nm的UV激光下激发。AAT Bioquest提供了最大数量的荧光染料,这些荧光染料可以被350 nm的紫外线激光激发。mFluor UV 540染料的荧光激发和发射最大值分别为〜350 nm和〜540 nm。这些光谱特性使其成为流式细胞仪应用程序的独特颜色。mFluor UV 540 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。mFluor UV 540 SE提供了一种方便的工具,可通过UV激光激发标记流式细胞仪应用中的单克隆抗体,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa)。

点击查看光谱

 

参考文献

Near-ultraviolet laser diodes for brilliant ultraviolet fluorophore excitation.
Authors: Telford, William G
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2015): 1127-37

Nucleic acid dyes for detection of apoptosis in live cells.
Authors: Frey, T
Journal: Cytometry (1995): 265-74

说明书
mFluor UV 540琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor UV 610琥珀酰亚胺酯 货号1649-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor UV 610琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 610琥珀酰亚胺酯

mFluor UV 610琥珀酰亚胺酯    货号1649 货号 1649 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 590 Em (nm) 609
分子量 1692.11 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1649

产品名称:mFluor UV 610琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1692.11

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。 这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激光线(例如350nm,405nm,488nm和633nm)很好地激发。 mFluor UV染料经过优化,可在350 nm的UV激光下激发。 AAT Bioquest提供了最大数量的荧光染料,这些荧光染料可以被350 nm的紫外线激光激发。 mFluor UV 610染料的荧光激发和发射最大值分别为〜350 nm和〜610 nm。 这些光谱特性使其成为流式细胞仪应用程序的独特颜色。 mFluor UV 610 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。 mFluor UV 610 SE提供了一种方便的工具,可通过UV激光激发来标记单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),用于流式细胞仪应用。

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参考文献

Deep ultraviolet lasers for flow cytometry.
Authors: Telford, William and Georges, Thierry and Miller, Clint and Voluer, Pascal
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 227-233

Isolation of the Side Population in Myc-induced T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Zebrafish.
Authors: Pruitt, Margaret M and Marin, Wilfredo and Waarts, Michael R and de Jong, Jill L O
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2017)

Ultraviolet 320 nm laser excitation for flow cytometry.
Authors: Telford, William and Stickland, Lynn and Koschorreck, Marco
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2017): 314-325

Isolation and time lapse microscopy of highly pure hepatic stellate cells.
Authors: Bartneck, Matthias and Warzecha, Klaudia Theresa and Tag, Carmen Gabriele and Sauer-Lehnen, Sibille and Heymann, Felix and Trautwein, Christian and Weiskirchen, Ralf and Tacke, Frank
Journal: Analytical cellular pathology (Amsterdam) (2015): 417023

Methylene blue inhibits the asexual development of vivax malaria parasites from a region of increasing chloroquine resistance.
Authors: Suwanarusk, Rossarin and Russell, Bruce and Ong, Alice and Sriprawat, Kanlaya and Chu, Cindy S and PyaePhyo, Aung and Malleret, Benoit and Nosten, François and Renia, Laurent
Journal: The Journal of antimicrobial chemotherapy (2015): 124-9

Near-ultraviolet laser diodes for brilliant ultraviolet fluorophore excitation.
Authors: Telford, William G
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2015): 1127-37

Rapid preparation of rodent testicular cell suspensions and spermatogenic stages purification by flow cytometry using a novel blue-laser-excitable vital dye.
Authors: Rodríguez-Casuriaga, Rosana and Santiñaque, Federico F and Folle, Gustavo A and Souza, Elisa and López-Carro, Beatriz and Geisinger, Adriana
Journal: MethodsX (2014): 239-43

Live cell cycle analysis of Drosophila tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle violet DNA stain.
Authors: Flegel, Kerry and Sun, Dan and Grushko, Olga and Ma, Yiqin and Buttitta, Laura
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2013): e50239

DyeCycle Violet used for side population detection is a substrate of P-glycoprotein.
Authors: Boesch, Maximilian and Reimer, Daniel and Rumpold, Holger and Zeimet, Alain G and Sopper, Sieghart and Wolf, Dominik
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2012): 517-22

Effects of menadione, hydrogen peroxide, and quercetin on apoptosis and delayed luminescence of human leukemia Jurkat T-cells.
Authors: Baran, Irina and Ganea, Constanta and Scordino, Agata and Musumeci, Francesco and Barresi, Vincenza and Tudisco, Salvatore and Privitera, Simona and Grasso, Rosaria and Condorelli, Daniele F and Ursu, Ioan and Baran, Virgil and Katona, Eva and Mocanu, Maria-Magdalena and Gulino, Marisa and Ungureanu, Raluca and Surcel, Mihaela and Ursaciuc, Cornel
Journal: Cell biochemistry and biophysics (2010): 169-79

说明书
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mFluor Violet 450 叠氮化物 货号1690-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Violet 450 叠氮化物

mFluor Violet 450 叠氮化物

mFluor Violet 450 叠氮化物    货号1690 货号 1690 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3612
Ex (nm) 406 Em (nm) 445
分子量 610.59 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1690

产品名称:mFluor Violet 450 叠氮化物

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:610.59

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

AAT Bioquest的mFluor 染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发。这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激光线(例如405 nm,488 nm和633 nm)很好地激发。mFluor Violet 450染料的荧光激发和发射最大值分别为〜405 nm和〜450 nm。这些光谱特性使其成为Pacific Blue 标记染料的极佳替代品。mFluor Violet 450酸是非常稳定的,它与炔烃表现出良好的反应性和选择性。 mFluor 紫色450叠氮化物为标记炔烃改性的生物分子提供了一种方便的工具。

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参考文献

A novel dual-color total internal reflection fluorescence detecting platform using compact optical structure and silicon-based photodetector.
Authors: Song, Dan and Yang, Rong and Fang, Shunyan and Liu, Yanping and Liu, Jiayao and Xu, Wenjuan and Long, Feng and Zhu, Anna
Journal: Talanta (2019): 78-84

Development of dual-color total internal reflection fluorescence biosensor for simultaneous quantitation of two small molecules and their affinity constants with antibodies.
Authors: Song, Dan and Yang, Rong and Wang, Hongliang and Fang, Sunyan and Liu, Yanping and Long, Feng and Zhu, Anna
Journal: Biosensors & bioelectronics (2019): 824-830

说明书
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mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯 货号1160-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯    货号1160 货号 1160 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 553 Em (nm) 565
分子量 1834.25 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor 染料是一系列的荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺表现出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记,叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显著降低。为获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B),及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 – 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6检测上述4种结合物,确定的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。

注1:立即使用时,染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

相关产品

产品名称 货号
mFluor Blue 570 酸 Cat#1143

说明书
mFluor Blue 570琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯 货号1165-AAT Bioquest荧光染料

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mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯

mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯

mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯    货号1165 货号 1165 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 525 Em (nm) 623
分子量 883.98 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor 染料是一系列荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺表现出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记,叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得极佳标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显著降低。为获得极佳标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B),及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 – 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6检测上述4种结合物,确定的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。

注1:立即使用时,染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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产品名称 货号
mFluor Green 620 酸 Cat#1144

说明书
mFluor Green 620琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯 货号1180-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯    货号1180 货号 1180 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 481 Em (nm) 663
分子量 747.91 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1180

产品名称:mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯

规格:1mg

储存条件:-15℃干燥

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:747.91

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

mFluor Blue 660染料可用488 nm的蓝色激发光充分激发。它具有巨大的斯托克斯位移,发射波长约为660 nm。mFluor™Blue 660染料是水溶性的,用mFluor™Blue 660染料制备的蛋白质结合物在488 nm处被激发,产生红色荧光。mFluor™Blue 660染料和缀合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色荧光试剂。与RPE相比,mFluor™Blue 660染料具有更高的光稳定性,使其易于用于荧光成像应用,而由于RPE缀合物的快速光漂白,很难将RPE缀合物用于荧光成像应用。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料,因为很少有具有这种特殊光谱特征的现有染料。

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参考文献

A Comprehensive Workflow for Applying Single-Cell Clustering and Pseudotime Analysis to Flow Cytometry Data.
Authors: Melsen, Janine E and van Ostaijen-Ten Dam, Monique M and Lankester, Arjan C and Schilham, Marco W and van den Akker, Erik B
Journal: Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) (2020)

Acquisition of High-Quality Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Fox, Amy and Dutt, Taru S and Karger, Burton and Obregón-Henao, Andrés and Anderson, G Brooke and Henao-Tamayo, Marcela
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e74

HTLV infected individuals have increased B-cell activation and proinflammatory regulatory T-cells.
Authors: Kjerulff, Bertram and Petersen, Mikkel Steen and Rodrigues, Candida Medina and da Silva Té, David and Christiansen, Mette and Erikstrup, Christian and Hønge, Bo Langhoff
Journal: Immunobiology (2020): 151878

High-Dimensional Data Analysis Algorithms Yield Comparable Results for Mass Cytometry and Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mayer, Johannes U and Old, Samuel and Hermans, Ian F and Irish, Jonathan and Price, Kylie M
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

High-dimensional analysis of intestinal immune cells during helminth infection.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mehta, Palak and Harmos, Phoebe and Schmidt, Alfonso J and Chappell, Sally and Price, Kylie M and Hermans, Ian F and Ronchese, Franca and le Gros, Graham and Mayer, Johannes U
Journal: eLife (2020)

Multispectral Flow Cytometry: Unaddressed Issues and Recommendations for Improvement.
Authors: Parks, David R
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Panel Design and Optimization for High-Dimensional Immunophenotyping Assays Using Spectral Flow Cytometry.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Pellefigues, Christophe and Mayer, Johannes U and Small, Sam J and Jaimes, Maria C and Price, Kylie M
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e70

Phenotypic Analysis of the Mouse Hematopoietic Hierarchy Using Spectral Cytometry: From Stem Cell Subsets to Early Progenitor Compartments.
Authors: Solomon, Michael and DeLay, Monica and Reynaud, Damien
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Spectral flow cytometry-Quo vadimus?
Authors: Robinson, J Paul
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 823-824

Time-Delayed Integration-Spectral Flow Cytometer (TDI-SFC) for Low-Abundance-Cell Immunophenotyping.
Authors: Hu, Wenting and Soper, Steven A and Jackson, J Matt
Journal: Analytical chemistry (2019): 4656-4664

说明书
mFluor Blue 660琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor Violet 610琥珀酰亚胺酯 货号1156-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Violet 610琥珀酰亚胺酯

mFluor Violet 610琥珀酰亚胺酯

mFluor Violet 610琥珀酰亚胺酯    货号1156 货号 1156 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 2472
Ex (nm) 421 Em (nm) 613
分子量 1293.46 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

光谱流式细胞仪的进步已经超越了常规流式细胞仪的应用范围和功能。现在,借助光谱流式细胞仪分析,研究人员和科学家们可以研究越来越多的目标分子。然而,荧光标记和读数的可用性严重限制了光谱流式细胞术的潜力。AAT Bioquest的mFluor™染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发,尤其是用于光谱荧光流式细胞仪。这些染料具有较大的斯托克斯位移,并且可以被流式细胞仪的激发光线(例如350 nm,405 nm,488 nm和633 nm)很好地激发。mFluor™紫色610染料被紫色激发光很好地激发,发出红色光〜610 nm。这些光谱特性使其成为光谱荧光流式细胞仪应用中非常独特的标记染料。mFluor™Violet 610 SE相当稳定,并且对蛋白质氨基具有良好的反应性和选择性。mFluor™Violet 610 SE提供了一种方便的工具,可通过紫色激发光激发标记流式细胞仪应用中的单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa)。

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产品说明书

样品分析方案 

储备溶液配制

1.蛋白质储备液(溶液A)

将100 µL反应缓冲液(例如1 M碳酸钠溶液或pH值为9.0的1 M磷酸盐缓冲液)与900 µL目标蛋白溶液(例如抗体,如果可能,蛋白浓度> 2 mg / mL)混合,得到1 mL蛋白质标记储备液。
注意:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0,请使用1 M碳酸氢钠溶液或1 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整为8.0-9.0。
注意:蛋白质应溶于pH 7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果将蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须使用pH 7.2-7.4的1X PBS进行透析,以去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。
注意:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,结合效率会大大降低。为了获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 
2.染料原液(溶液B)
将无水DMSO加入mFluor™紫色610 SE小瓶中,制成10-20 mM储备液。通过轻柔移液或涡旋混合均匀。
注意:开始缀合之前,请准备染料储备溶液(溶液B)立即使用。染料储备溶液的长时间储存​​可能会降低染料活性,避免冻融循环。
注意:收到后,iFluor™染料应储存在<-15°C的环境中,并远离光线和湿气。
注意:重新配制的mFluor™紫色610 SE的DMSO储备溶液可以在<-15°C下保存长达4周。
注意:所需的蛋白质缀合物应在载体蛋白质(例如0.1%牛血清白蛋白)存在的情况下以> 0.5 mg / mL的浓度保存。当在2 mM叠氮化钠存在下存储时,缀合物溶液可以在4°C下存储两个月而无明显变化。为了更长的存储时间,可以将蛋白缀合物冻干或分成单份使用,并保存在≤-60°C下,并避光。

 

操作步骤

该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor™紫色610 SE的缀合物而开发的,供参考。您的实际情况可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

确定的染料/蛋白质比率(可选)

每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比率,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会不利地影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您使用一系列不同量的标记染料溶液,通过实验确定的染料/蛋白质比率。通常,大多数染料-蛋白质缀合物推荐使用4-6种染料/蛋白质。

  1. 以溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的10:1摩尔比为起点:将5 µL染料储备溶液(溶液B,假定染料储备溶液为10 mM)添加到蛋白质瓶中。溶液(95 µL溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10 mg / mL,蛋白质的分子量为〜200KD,则蛋白质的浓度约为0.05 mM。
    注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应小于10%。
  2. 进行缀合反应。
  3. 重复步骤2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;15:1和20:1。
  4. 使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
  5. 计算上述4种缀合物的染料/蛋白质比率(DOS)。
  6. 对以上4种缀合物进行检测,以确定的染料/蛋白质比率,以扩大标记反应的范围。 

进行缀合反应
  1. 在有效摇动下,将适量的染料储备溶液(溶液B)添加到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。
    注意:溶液B /溶液的摩尔比由上述步骤确定。如果跳过该步骤(本节:确定的染料/蛋白质比),我们建议使用溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比为10:1。
  2. 在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟。 

纯化

以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化染料-蛋白质缀合物的示例。

  1. 准备Sephadex G-25色谱柱。
  2. 将反应混合物加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
  3. 样品刚好在顶部表面下方流动时,立即添加PBS(pH 7.2-7.4)。
  4. 向所需样品中添加更多PBS(pH 7.2-7.4),以完成柱纯化。
    注意:为了立即使用,染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并分装多次使用。
    注意:为了长期保存,染料-蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥(见下文)。 

 

图示

mFluor Violet 610琥珀酰亚胺酯    货号1156

图1.用mFluor™Violet 610抗人类CD4(克隆SK3,小鼠IgG1,κ)结合物对人外周血淋巴细胞进行染色。

说明书
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mFluor 蓝色590 SE 货号1161-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor 蓝色590 SE

mFluor 蓝色590 SE

mFluor 蓝色590 SE    货号1161 货号 1161 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 569 Em (nm) 589
分子量 1783.14 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:1161

产品名称:mFluor 蓝色590 SE

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1783.14

溶剂:DMSO

激发波长(nm):569

发射波长(nm):589

 

产品介绍

mFluor Blue 590染料可用488 nm的蓝色激光充分激发。它具有巨大的斯托克斯位移,发射约590 nm。 mFluor Blue 590染料是水溶性的,用mFluor Blue 590染料制备的蛋白偶联物在488 nm处被激发,产生红色荧光。 mFluor Blue 590染料和缀合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色激光试剂。与RPE相比,mFluor Blue 590染料具有更高的光稳定性,使其易于用于荧光成像应用,而由于RPE共轭物的快速光漂白,很难将RPE共轭物用于荧光成像。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料,因为很少有具有这种光谱特征的现有染料。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的mFluor 蓝色590 SE。 

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参考文献

Analysis of the immune status from peripheral whole blood with a single-tube multicolor flow cytometry assay.
Authors: Donaubauer, Anna-Jasmina and Becker, Ina and Rühle, Paul F and Fietkau, Rainer and Gaipl, Udo S and Frey, Benjamin
Journal: Methods in enzymology (2020): 389-415

Combination of multicolor flow cytometry for circulating lymphoma cells and tests for the RHOAG17V and IDH2R172 hot-spot mutations in plasma cell-free DNA as liquid biopsy for the diagnosis of angioimmunoblastic T-cell lymphoma.
Authors: Hayashida, Masahiko and Maekawa, Fumiyo and Chagi, Yoshinari and Iioka, Futoshi and Kobashi, Yoichiro and Watanabe, Mikio and Ohno, Hitoshi
Journal: Leukemia & lymphoma (2020): 1-10

Immunophenotyping of A20 haploinsufficiency by multicolor flow cytometry.
Authors: Kadowaki, Tomonori and Ohnishi, Hidenori and Kawamoto, Norio and Kadowaki, Saori and Hori, Tomohiro and Nishimura, Kenichi and Kobayashi, Chie and Shigemura, Tomonari and Ogata, Shohei and Inoue, Yuzaburo and Hiejima, Eitaro and Izawa, Kazushi and Matsubayashi, Tadashi and Matsumoto, Kazuaki and Imai, Kohsuke and Nishikomori, Ryuta and Ito, Shuichi and Kanegane, Hirokazu and Fukao, Toshiyuki
Journal: Clinical immunology (Orlando, Fla.) (2020): 108441

Multi-set Pre-processing of Multicolor Flow Cytometry Data.
Authors: Folcarelli, Rita and Tinnevelt, Gerjen H and Hilvering, Bart and Wouters, Kristiaan and van Staveren, Selma and Postma, Geert J and Vrisekoop, Nienke and Buydens, Lutgarde M C and Koenderman, Leo and Jansen, Jeroen J
Journal: Scientific reports (2020): 9716

Post-induction Measurable Residual Disease Using Multicolor Flow Cytometry Is Strongly Predictive of Inferior Clinical Outcome in the Real-Life Management of Childhood T-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia: A Study of 256 Patients.
Authors: Tembhare, Prashant R and Narula, Gaurav and Khanka, Twinkle and Ghogale, Sitaram and Chatterjee, Gaurav and Patkar, Nikhil V and Prasad, Maya and Badrinath, Yajamanam and Deshpande, Nilesh and Gudapati, Pratyusha and Verma, Shefali and Sanyal, Mahima and Kunjachan, Florence and Mangang, Gunit and Gujral, Sumeet and Banavali, Shripad and Subramanian, Papagudi G
Journal: Frontiers in oncology (2020): 577

A novel direct co-culture assay analyzed by multicolor flow cytometry reveals context- and cell type-specific immunomodulatory effects of equine mesenchymal stromal cells.
Authors: Hillmann, Aline and Paebst, Felicitas and Brehm, Walter and Piehler, Daniel and Schubert, Susanna and Tárnok, Attila and Burk, Janina
Journal: PloS one (2019): e0218949

Cell Cycle Analysis of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells by Multicolor Flow Cytometry.
Authors: Galvin, Amy and Weglarz, Meredith and Folz-Donahue, Kat and Handley, Maris and Baum, Misa and Mazzola, Michael and Litwa, Hannah and Scadden, David T and Silberstein, Lev
Journal: Current protocols in cytometry (2019): e50

Detection of clinically relevant immune checkpoint markers by multicolor flow cytometry.
Authors: Cunningham, Rachel A and Holland, Martha and McWilliams, Emily and Hodi, Frank Stephen and Severgnini, Mariano
Journal: Journal of biological methods (2019): e114

Determination of Circulating Endothelial Cells and Endothelial Progenitor Cells Using Multicolor Flow Cytometry in Patients with Thrombophilia.
Authors: Řádek, Martin and Babuňková, Eva and Špaček, Martin and Kvasnička, Tomáš and Kvasnička, Jan
Journal: Acta haematologica (2019): 113-119

Immunophenotyping of Tissue Samples Using Multicolor Flow Cytometry.
Authors: Sykora, Martina M and Reschke, Markus
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2019): 253-268

说明书
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mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯(停产) 货号1190-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯(停产)

mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯(停产)

mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯(停产)    货号1190 货号 1190 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 0
Ex (nm) 680 Em (nm) 695
分子量 956.40 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor 染料是一系列荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记,叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显著降低。为获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B),及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 – 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6检测上述4种结合物,确定的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。

注1:立即使用时,染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

相关产品

产品名称 货号
mFluor Red 700 酸 Cat#1146
mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯 Cat#1191

说明书
mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯(停产).pdf

mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯 货号1191-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯

mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯

mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯    货号1191 货号 1191 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 629 Em (nm) 767
分子量 1328.65 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor 染料是一系列荧光标记染料,可以覆盖整个可见光谱。所有mFluor 染料都具有出色的水溶性和大的斯托克斯移位。它们的亲水性使有机溶剂的使用小化。mFluor 染料主要用于标记多色流式细胞仪应用的抗体。

琥珀酰亚胺基(NHS)酯被证明是用于胺修饰的试剂,因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时,需要考虑的因素很少:1)溶剂:在大多数情况下,活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)中。 2)反应pH:胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应,包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此,胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3)反应缓冲液:当使用胺反应试剂时,必须避免使用含有游离胺如Tris和甘氨酸和硫醇化合物的缓冲液。在进行染料结合之前,还必须除去广泛用于蛋白质沉淀的铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)(例如通过透析)。 4)反应温度:大多数缀合在室温下进行。然而,对于特定的标记反应,可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯。 

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产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记,叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显著降低。为获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B),及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 – 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6检测上述4种结合物,确定的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。

注1:立即使用时,染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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产品名称 货号
mFluor Red 700琥珀酰亚胺酯 Cat#1190
mFluor Red 780 胺 Cat#1210
mFluor Red 780 酸 Cat#1147

说明书
mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯.pdf

mFluor Red 780 胺 货号1210-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Red 780 胺

mFluor Red 780 胺

mFluor Red 780 胺    货号1210 货号 1210 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 629 Em (nm) 780
分子量 1167.23 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

mFluor Red 780 胺是美国AAT Bioquest生产的荧光标记染料,mFluor Red 780染料是APC-AlexaFluor®750双色膜的替代品,因为它们的光谱特性与APC-AlexaFluor®750缀合物相同。 mFluor Red 780染料是水溶性的,用mFluor Red 780染料制备的蛋白质缀合物在633 nm处被激发,产生红色荧光(与Cy7®滤光片兼容)。 mFluor Red 780染料和缀合物是用于流式细胞术研究的红色荧光试剂。 相较于APC-AlexaFluor®750 tandems,mFluor Red 780染料具有更高的光稳定性,使其易于用于荧光成像应用,mFluor Red 780胺具有羰基反应性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的mFluor Red 780 胺。 

产品说明书

操作方法

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor 450 SE的缀合物开发的。 您需根据您的实际情况而定。

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml)混合至100μL,以得到1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记,叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显著降低。为获得标记效率,建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B),及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 – 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)。

3.6检测上述4种结合物,确定的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照说明书准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。

注1:立即使用时,染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

 

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mFluor Red 780 酸 Cat#1147
mFluor Red 780琥珀酰亚胺酯 Cat#1191

说明书
mFluor Red 780 胺.pdf

Annexin V-mFluor 570蓝色标记 货号20085-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Annexin V-mFluor 570蓝色标记

Annexin V-mFluor 570蓝色标记

Annexin V-mFluor 570蓝色标记    货号20085 货号 20085 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 553 Em (nm) 565
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V-mFluor 570蓝色标记探针是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物,属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸(PS),其通常保持在细胞膜的内叶(细胞质侧)。 在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的膜联蛋白V结合物是一组监测细胞功能的工具,旨在通过测量磷脂酰丝氨酸的易位来监测细胞凋亡。

膜联蛋白V结合物在Ca2+存在下与凋亡细胞表面上的PS结合,它也可以通过坏死细胞膜或死细胞并与细胞内部的PS结合。 因此,我们建议将细胞不可渗透的核染色与膜联蛋白V结合物结合使用,以区分死细胞和凋亡细胞。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Annexin V-mFluor 570蓝色标记探针。 

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产品说明书

分析方案

概述

用测试化合物(200μL/样品)制备细胞

添加Annexin V结合物测定溶液

室温孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

 

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6在室温下孵育30至60分钟,避光。

1.7在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μL膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人(见参考文献1和2)。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1移取步骤1.6的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。 与膜联蛋白V缀合物孵育(步骤1.6)后,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。 在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞

 

参考文献

White light-induced cell apoptosis by a conjugated polyelectrolyte through singlet oxygen generation
Authors: Jiamei Liang, Pan Wu, Chunyan Tan, Yuyang Jiang
Journal: RSC advances (2018): 9218–9222

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: (2016): 77–92

 

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说明书
Annexin V-mFluor 570蓝色标记.pdf

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯 货号1178-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯

mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯    货号1178 货号 1178 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3732
Ex (nm) 485 Em (nm) 580
分子量 832.98 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

光谱流式细胞仪的进步已经超越了常规流式细胞仪的应用范围和功能。现在,借助光谱流式细胞仪分析,研究人员和科学家们可以研究越来越多的目标分子。然而,荧光标记和读数的可用性严重限制了光谱流式细胞术的潜力。AAT Bioquest的mFluor™染料专为针对多色流式细胞仪的应用而开发,尤其是用于光谱荧光流式细胞仪。mFluor™Blue 580染料可以用488 nm的蓝色激光充分激发。它具有巨大的斯托克斯位移,发射波长约为580 nm。mFluor™Blue 580染料是水溶性的,用mFluor™Blue 580染料制备的蛋白质偶联物在488 nm处被激发,产生红色荧光。mFluor™Blue 580染料和结合物是用于流式细胞仪检测的出色的蓝色荧光试剂。与RPE相比,mFluor™Blue 580染料具有更高的光稳定性,使其易于用于荧光成像应用,而由于RPE共轭物的快速光漂白,很难将RPE共轭物用于荧光成像应用。它也是用于光谱流式细胞仪的独特荧光染料,因为很少有具有这种光谱特征的现有染料。

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产品说明书

样品分析方案 

储备溶液配制

1.蛋白质储备液(溶液A)

将100 µL反应缓冲液(例如1 M碳酸钠溶液或pH值为9.0的1 M磷酸盐缓冲液)与900 µL目标蛋白溶液(例如抗体,如果可能,蛋白浓度> 2 mg / mL)混合,得到1 mL蛋白质标记储备液。
注意:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0,请使用1 M碳酸氢钠溶液或1 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH值调整为8.0-9.0。
注意:蛋白质应溶于pH 7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果将蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须使用pH 7.2-7.4的1X PBS进行透析,以去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。
注意:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,结合效率会大大降低。为了获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

2.染料原液(溶液B)

在mFluor™蓝色580 SE小瓶中加入无水DMSO,制成10-20 mM的储备溶液。通过轻柔移液或涡旋混合均匀。
注意:开始缀合之前,请准备染料储备溶液(溶液B)。立即使用。染料储备溶液的长时间储存​​可能会降低染料活性。避免冻融循环。
注意:收到后,mFluor™蓝色580 SE应储存在<-15°C的环境中,并远离光线和湿气。
注意:重新配制的mFluor™染料SE的DMSO储备溶液可以在<-15°C下保存长达4周。
注意:所需的蛋白质偶联物应在载体蛋白质(例如0.1%牛血清白蛋白)存在的情况下以> 0.5 mg / mL的浓度保存。当在2 mM叠氮化钠存在下存储时,结合物溶液可以在4°C下存储两个月而无明显变化。为了更长的存储时间,可以将蛋白结合物冻干或分成单份使用,并保存在≤-60°C下,并避光。

 

操作步骤

该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与mFluor™蓝色580 SE的缀合物而开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。

确定最佳的染料/蛋白质比率(可选)

每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比率,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会不利地影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您使用一系列不同量的标记染料溶液,通过实验确定最佳的染料/蛋白质比率。通常,大多数染料-蛋白质结合物推荐使用4-6种染料/蛋白质。

  1. 以溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的10:1摩尔比为起点:将5 µL染料储备溶液(溶液B,假定染料储备溶液为10 mM)添加到蛋白质瓶中。溶液(95 µL溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10 mg / mL,蛋白质的分子量为〜200KD,则蛋白质的浓度约为0.05 mM。
    注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应小于10%。
  2. 进行缀合反应。
  3. 重复步骤2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;15:1和20:1。
  4. 使用预制的旋转柱纯化所需的结合物。
  5. 计算上述4种结合物的染料/蛋白质比率(DOS)。
  6. 对以上4种结合物进行功能测试,以确定最佳的染料/蛋白质比率,以扩大标记反应的范围。 
运行缀合反应
  1. 在有效摇动下,将适量的染料储备溶液(溶液B)添加到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。
    注意:溶液B /溶液的最佳摩尔比由上述步骤确定。如果跳过该步骤(本节:确定最佳的染料/蛋白质比),我们建议使用溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比为10:1。
  2. 在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟。 
纯化

以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化染料-蛋白质偶联物的示例。

  1. 准备Sephadex G-25色谱柱。
  2. 将反应混合物(进行共轭反应后的混合物)加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
  3. 样品刚好在顶部树脂表面下方流动时,立即添加PBS(pH 7.2-7.4)。
  4. 向所需样品中添加更多PBS(pH 7.2-7.4),以完成柱纯化。
    注意:为了立即使用,染料-蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并分装多次使用。
    注意:为了长期保存,染料-蛋白质结合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。 

 

参考文献

A Comprehensive Workflow for Applying Single-Cell Clustering and Pseudotime Analysis to Flow Cytometry Data.
Authors: Melsen, Janine E and van Ostaijen-Ten Dam, Monique M and Lankester, Arjan C and Schilham, Marco W and van den Akker, Erik B
Journal: Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) (2020)

Acquisition of High-Quality Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Fox, Amy and Dutt, Taru S and Karger, Burton and Obregón-Henao, Andrés and Anderson, G Brooke and Henao-Tamayo, Marcela
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e74

HTLV infected individuals have increased B-cell activation and proinflammatory regulatory T-cells.
Authors: Kjerulff, Bertram and Petersen, Mikkel Steen and Rodrigues, Candida Medina and da Silva Té, David and Christiansen, Mette and Erikstrup, Christian and Hønge, Bo Langhoff
Journal: Immunobiology (2020): 151878

High-Dimensional Data Analysis Algorithms Yield Comparable Results for Mass Cytometry and Spectral Flow Cytometry Data.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mayer, Johannes U and Old, Samuel and Hermans, Ian F and Irish, Jonathan and Price, Kylie M
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

High-dimensional analysis of intestinal immune cells during helminth infection.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Mehta, Palak and Harmos, Phoebe and Schmidt, Alfonso J and Chappell, Sally and Price, Kylie M and Hermans, Ian F and Ronchese, Franca and le Gros, Graham and Mayer, Johannes U
Journal: eLife (2020)

Multispectral Flow Cytometry: Unaddressed Issues and Recommendations for Improvement.
Authors: Parks, David R
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Panel Design and Optimization for High-Dimensional Immunophenotyping Assays Using Spectral Flow Cytometry.
Authors: Ferrer-Font, Laura and Pellefigues, Christophe and Mayer, Johannes U and Small, Sam J and Jaimes, Maria C and Price, Kylie M
Journal: Current protocols in cytometry (2020): e70

Phenotypic Analysis of the Mouse Hematopoietic Hierarchy Using Spectral Cytometry: From Stem Cell Subsets to Early Progenitor Compartments.
Authors: Solomon, Michael and DeLay, Monica and Reynaud, Damien
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2020)

Spectral flow cytometry-Quo vadimus?
Authors: Robinson, J Paul
Journal: Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology (2019): 823-824

Time-Delayed Integration-Spectral Flow Cytometer (TDI-SFC) for Low-Abundance-Cell Immunophenotyping.
Authors: Hu, Wenting and Soper, Steven A and Jackson, J Matt
Journal: Analytical chemistry (2019): 4656-4664

说明书
mFluor Blue 580琥珀酰亚胺酯.pdf