Amplite Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit

简要概述

        Amplite™ Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，在偶联酶测定中， 比例是专门由一个荧光NADPH传感器监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪在EX/ EM = 530-570 nm/590-600纳米读取（建议EX / EM = 540 nm/590 nm建议）。Amplite G6P测定试剂盒，我们能够检测少至0.3 μM G6P在100微升反应体积。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite™ Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备G6P工作溶液（50 µL）
2.添加G6P标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H2O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6P标准溶液（100 mM）：
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到G6P标准品（组分D）的小瓶中，制成100 mM G6P标准品溶液。

2.标准溶液

G6P标准
将10 µL 100 mM G6P标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中，生成1 mM G6P标准溶液。 然后，将100 µL 1 mM G6P标准溶液添加到900 µL 1 x PBS缓冲液中，制成100 µM G6P标准溶液（G6P7）。 取100 µM G6P标准溶液（G6P7）并进行1：3连续稀释，以使用1x PBS缓冲液连续稀释G6P标准溶液（G6P6- G6P1）。注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中，并充分混合。

3.2将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成G6P工作溶液。 注意：此G6P工作溶液足以用于一个96孔板。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G6P标准品和测试样品的布局。 G6P = G6P标准品（G6P1-G6P7，0.14至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备G6P标准品（G6P），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6P工作溶液，以使G6P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G6P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570nm）下监测荧光的增加。 注意：该板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并通过吸光度酶标仪以A575nm / A605nm的比率进行读取。 与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。