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Amplite Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit
货号 | 13804 | 存储条件 | f/l |
规格 | 200 Tests | ||
Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 585 |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
简要概述
Amplite™ Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,在偶联酶测定中, 比例是专门由一个荧光NADPH传感器监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪在EX/ EM = 530-570 nm/590-600纳米读取(建议EX / EM = 540 nm/590 nm建议)。Amplite G6P测定试剂盒,我们能够检测少至0.3 μM G6P在100微升反应体积。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite™ Fluorimetric Glucose-6-Phosphate Assay Kit
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备G6P工作溶液(50 µL)
2.添加G6P标准品或测试样品(50 µL)
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570 nm)的荧光增加
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NADP储备溶液(100X):
在NADP小瓶(组分C)中加入100 µL H2O,制成100X NADP储备溶液。
1.2 G6P标准溶液(100 mM):
将100 µL H2O或1x PBS缓冲液加到G6P标准品(组分D)的小瓶中,制成100 mM G6P标准品溶液。
2.标准溶液
G6P标准
将10 µL 100 mM G6P标准溶液加到990 µL 1x PBS缓冲液中,生成1 mM G6P标准溶液。 然后,将100 µL 1 mM G6P标准溶液添加到900 µL 1 x PBS缓冲液中,制成100 µM G6P标准溶液(G6P7)。 取100 µM G6P标准溶液(G6P7)并进行1:3连续稀释,以使用1x PBS缓冲液连续稀释G6P标准溶液(G6P6- G6P1)。注意:稀释的G6P标准溶液不稳定,应在4小时内使用。
3.工作溶液
3.1将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶酶探针(组分A)中,并充分混合。
3.2将50 µL 100X NADP储备溶液添加到组分A + B的瓶子中,并充分混合以制成G6P工作溶液。 注意:此G6P工作溶液足以用于一个96孔板。
样品操作及实验分析
表1.黑色96孔微孔板中G6P标准品和测试样品的布局。 G6P = G6P标准品(G6P1-G6P7,0.14至100 µM),BL =空白对照,TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
G6P1 | G6P1 | … | … |
G6P2 | G6P2 | … | … |
G6P3 | G6P3 | ||
G6P4 | G6P4 | ||
G6P5 | G6P5 | ||
G6P6 | G6P6 | ||
G6P7 | G6P7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
G6P1-G6P7 | 50ul | 连续稀释(0.14至100 µM) |
BL | 50ul | 稀释缓冲液 |
TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局,准备G6P标准品(G6P),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2.在G6P标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G6P工作溶液,以使G6P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板,将25 µL G6P工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 µL /孔。
3.避光保存,室温下孵育反应30分钟至2小时。
4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm,发射= 590-600 nm(Ex / Em = 540/590 nm,截止= 570nm)下监测荧光的增加。 注意:该板的内容物也可以转移到白色透明底板上,并通过吸光度酶标仪以A575nm / A605nm的比率进行读取。 与荧光读数相比,吸收检测的灵敏度较低。