encapsula IMS-2011说明书

 

 

Encapsula NanoSciences是一家专业公司,致力于为学术和工业领域的客户和合作伙伴提供脂质体研究,开发和制造专业知识,生产脂质纳米粒子,也称为脂质体。Encapsula常规提供药物包封脂质体的定制实验室规模脂质体制剂,例如Clodrosome®(氯膦酸盐脂质体),Encapsome®(用于氯膦酸盐脂质体的纯对照脂质体),Doxosome™(多柔比星脂质体),Immunosome™(用于抗体的反应性脂质体,蛋白质)结合),Immunodox™(抗体的反应性脂质体,含有多柔比星的蛋白质结合物),Immunogene™(抗体的反应性脂质体,含有遗传物质的蛋白质结合物),Immunofluor™(抗体的反应性脂质体,包含用于追踪的荧光分子的蛋白质缀合物),Genesome TM(脂质体DNA和RNA),Fluoroliposome TM(荧光脂质体),Atpsome TM(ATP脂质体),Cellsome TM(普通脂质体作为人工细胞模型)和Cosmesome TM(用于皮肤病学的脂质体) )对大学和工业研究实验室的客户。Encapsula NanoSciences近还推出了两种口服脂质体产品系列; 适用于宠物的NanoLife Nutra和适用于人类的NanoLife Tonics。

 

encapsula IMS-2011说明书

 

表面活性脂质体(Immunosome®)

有许多化学物质可用于将抗体和其他反应性分子缀合到脂质体表面。表面反应性脂质体可以与抗体的N-末端或C-末端缀合。它们可以与硫醇化抗体或Fab'片段上的游离硫缀合。

表面活性脂质体(Immunosome®)

Immunosome®-Folate(聚乙二醇化)

SKU#IMS-2011

 

2毫升 600.00 美元  
5毫升 $ 1,200.00

 

描述

在过去的五十年中,已经使用各种类型的化学物质将诸如抗体,肽,蛋白质或其他反应性配体的分子缀合到脂质体的表面。通常,缀合可以通过N-末端,C-末端或可用的硫(例如 Fab'级分或硫醇化抗体)实现。并非所有化学物质具有相同的产率和缀合效率,并且通常再生生物相容性批次可能是一个挑战。

叶酸结合蛋白(FBP)是一种内源蛋白,对叶酸显示出非常高的亲和力。可以通过FBP标记抗体,并且可以通过脂质体表面上的FBP和叶酸脂质之间的非共价和高亲和力相互作用形成免疫脂质体。在该方法中,已经通过硫醚键与FBP共价连接的抗体与叶酸衍生物脂质体缀合。具有相对低的分子量(MW~40kDa)和单一结合位点可防止脂质体交联。

Immunosome®-Folate是PEG化产物。对于适用于其他类型的缀合方法的其他反应性(PEG化和非PEG化产物)Immunosome®产品,

 

配方信息

Immunosome®-Folate(聚乙二醇化)

脂质成分 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
15.86毫克/毫升 21.55 mM 100
氢化大豆PC 9.58 12.22 57
胆固醇 3.19 8.25 38
DSPE-PEG(2000) 2.7 0.96 4.5
DSPE-PEG(2000)-Folate 0.39 0.12 0.5
缓冲液和脂质体大小 规格
缓冲 磷酸盐缓冲溶液
pH值 7.4
脂质体大小 100纳米

 

共轭议定书

材料和设备

为了将您的抗体或FBP标记的蛋白与Immunosome®-Folate脂质体结合,您需要:

  1. 建议使用实验室涡旋混合器。
  2. 透析需要实验室磁力搅拌器。
  3. Float-A-Lyzer®  具有适当的MWCO,可轻松从游离和非共轭蛋白质/肽/配体中清除脂质体偶联配体。您需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时,透析膜上的孔径接近100 nm,因此您的脂质体可以透析出来。你不能盲目使用透析盒。在使用旋转柱或透析盒之前,请先了解该技术。如果您没有使用正确的MWCO,您可能会失去整个准备工作。对于该协议,我们建议MWCO为300,000道尔顿。

制备方法

  1. Immunosome®-Folate中的总脂质浓度为21.55 mM。脂质体中0.5%mol的脂质含有PEG-叶酸基团,并且其中仅一半暴露于脂质体的外部,其等于0.053mM的反应性可缀合脂质。对于2ml体积的脂质体,这等于1.08×10 -7 mol,对于5ml体积的脂质体,这等于2.69×10 -7mol的PEG-叶酸。 加入1:20摩尔比的用FBP标记的抗体与PEG-叶酸脂质。
  2. 我将Immunosome®-Folate与抗体-FBP在室温下孵育1小时。
  3. 通过透析去除未缀合的抗体,蛋白质,肽或配体。我们更喜欢透析以确定排除柱的大小。透析是一个慢得多的过程,但是从非偶联蛋白质/肽/配体中清除制剂后,免疫脂质体的损失小。旋转柱速度非常快,但旋转柱上的脂质体很容易丢失50%以上。我们建议使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根据蛋白质,配体,抗体或抗体片段的MW选择具有适当MWCO的盒式磁带。 注意:如果您决定使用透析盒,则需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时,透析膜上的孔径接近100 nm,因此您的脂质体可以透析出来。您不能盲目使用透析盒和旋转柱。它们有各种尺寸,您需要明智地选择正确的尺寸。将免疫脂质体溶液在pH7.4的1升PBS中透析8小时。用新鲜的1升PBS更换透析缓冲液,再透析8小时。完成此步骤后,即可使用已清理过的免疫脂质体。如果您没有使用正确的MWCO,您可能会失去整个准备工作。

脂质体粒子计算器

免疫体是单层脂质体,大小为100nm。脂质体的摩尔浓度为10mM。通过具有 脂质体直径(nm)和脂质浓度(μM),可以计算一个脂质体中脂质的总数和1毫升脂质体溶液中脂质体的数量。要使用计算器,

技术说明

  • 请记住,主要用于表面含有叶酸的脂质体用于靶向细胞上的叶酸受体。使用用FBP标记的抗体/蛋白质或配体制备免疫脂质体是非常适合的应用。
  • 由于在低pH下叶酸和FBP之间的亲和力降低,免疫脂质体可在暴露于内体区室的低pH环境后通过内吞作用而内化后解体。通过允许将内化脂质体分选到合适的亚细胞区室和/或促进药物分子从脂质体的细胞内释放,这种内化触发的解偶联可能有益于在细胞水平上递送脂质体药物。
  • 可以使用尺寸排阻旋转柱如Sepharose®CL-4B代替Float-A-Lyzer®透析盒。然而,在清理过程中会有非常大量的脂质体粘附在柱子上,因此我们强烈建议使用透析而不是尺寸*的珠子。
  • 如果您使用疏水的配体或肽,建议将其溶解在DMSO或DMF中,然后将缓冲液加入其中。建议溶液中不要使用超过5%体积的DMSO或DMF。DMF和DMSO均与脂质体相容,并且它们也可与水混溶。其他有机溶剂如乙醇和氯方与脂质体不相容并会导致脂质体溶解。如果您终使用DMSO或DMF,那么在完成缀合反应后,您需要从脂质体中去除DMSO和DMF。为此,您需要使用由REGENERATED CELLULOSE MEMBRANE制成的透析盒。注意:并非所有膜都与DMF和DMSO兼容。我们建议使用Slide-A-Lyzer™MINI透析装置MWCO为2K,由ThermoFisher生产的再生纤维素膜制成。除去DMSO或DMF后,您可以使用Float-A-Lyzer®透析装置进行清洁制剂的后步骤。
  • 脂质体应保持在4°C,切勿冷冻。

 

 

出现

Immunosome®-Folate是一种由纳米尺寸单层脂质体制成的白色半透明液体。通常由于脂质体的小尺寸,在小瓶的底部不会发生沉降。将脂质体包装在琥珀色小瓶中。 

订购/运输信息

  • 所有基于脂质体的制剂在隔热包装中使用隔夜运输或快递运输在4°C的蓝色冰上运输。
  • 脂质体不应该被冷冻。在脂质膜中形成的结晶冰可破坏膜,改变脂质体的大小并导致包封的药物泄漏。液体形式的脂质体应始终保存在冰箱中。
  • 从美利坚合众国境外订购的客户负责其政府进口税和海关文书工作。Encapsula NanoSciences不对美国以外国家的进口费负责。
  • 我们强烈鼓励日本,韩国,中国台湾和中国的客户通过经销商订购。如果直接通过我们订购,这些国家的严格通关规定将导致这些易腐配方的定制清关延迟。经销商可以轻松清关海关包裹。要查看经销商列表,请单击此处。
  • 从澳大利亚的大学和研究机构订购的客户应该记住,脂质体配方是由合成材料制成的,配方不需要“允许进口检疫材料”。脂质体不是生物制品。
  • 如果您希望您的学院的FedEx或DHL帐户收取运费,请在订购时提供帐号。
  • Encapsula NanoSciences无法控制因恶劣天气或清关延误造成的延误。确认订单后,您将收到FedEx或DHL跟踪号码。提前联系FedEx或DHL,确保海关的文书工作按时完成。

储存和保质期

存储

Immunosome®产品应始终在4°C​​的黑暗中储存,除非在动物给药前短时间内置于室温。不要冻结。如果悬浮液被冷冻,则包封的药物可以从脂质体中释放,从而限制其有效性。此外,脂质体的大小也会在冷冻和解冻时发生变化。

保质期

Immunosome®-Folate每天制作。装运的批次是在同一天生产的。建议在生产日期后4个月内使用产品。

 

Encapsula CLD-8910说明书

Encapsula NanoSciences是一家专业公司,致力于为学术和工业领域的客户和合作伙伴提供脂质体研究,开发和制造专业知识,生产脂质纳米粒子,也称为脂质体。Encapsula常规提供药物包封脂质体的定制实验室规模脂质体制剂,例如Clodrosome®(氯膦酸盐脂质体),Encapsome®(用于氯膦酸盐脂质体的纯对照脂质体),Doxosome™(多柔比星脂质体),Immunosome™(用于抗体的反应性脂质体,蛋白质)结合),Immunodox™(抗体的反应性脂质体,含有多柔比星的蛋白质结合物),Immunogene™(抗体的反应性脂质体,含有遗传物质的蛋白质结合物),Immunofluor™(抗体的反应性脂质体,包含用于追踪的荧光分子的蛋白质缀合物),Genesome TM(脂质体DNA和RNA),Fluoroliposome TM(荧光脂质体),Atpsome TM(ATP脂质体),Cellsome TM(普通脂质体作为人工细胞模型)和Cosmesome TM(用于皮肤病学的脂质体) )对大学和工业研究实验室的客户。Encapsula NanoSciences近还推出了两种口服脂质体产品系列; 适用于宠物的NanoLife Nutra和适用于人类的NanoLife Tonics。

Encapsula CLD-8910说明书

Macrophage Depletion Reagents (Clodrosome®)

Encapsome®

SKU#CLD-8910

描述

Clodrosome®是一种多层脂质体悬浮液,其中氯膦酸盐被包封在脂质体的水性区室中。Encapsome®的配方和制备与Clodrosome®相同,只是氯膦酸盐不添加到脂质体中。将脂质体通过2μm聚碳酸酯膜过滤,以确保从悬浮液中除去可能对动物有毒的较大颗粒。两者均在无菌条件下制备和包装。当用Clodrosome®处理动物或细胞时,吞噬细胞将脂质体识别为侵入的外来颗粒,并通过吞噬作用从局部组织或血清中去除脂质体。然后脂质体将氯膦酸盐释放到胞质溶胶中,导致细胞死亡。未包封的氯膦酸盐不能穿过细胞膜以引发细胞死亡。

对照脂质体(Encapsome®)通过与Clodrosome®相同的机制被识别和吞噬。由于对照脂质体不含氯膦酸盐,吞噬细胞不会被杀死。然而,吞噬细胞确实通过细胞因子分泌,吞噬活性的暂时中止和文献中描述的其他反应来摄取对照脂质体。

适用于巨噬细胞靶向和追踪的荧光脂质体(Fluoroliposome®)可含有五种不同的荧光染料(DiI,DiO,DiD,DiA和DiR),覆盖整个光谱。荧光脂质体以标准和甘露糖化形式存在。

 

m-Clodrosome®和m-Encapsome®是甘露糖化试剂,专门配制用于有效靶向中枢神经系统和含有更多甘露糖受体的巨噬细胞中的巨噬细胞。

 

技术信息

Encapsome®控制脂质体悬浮液

脂质成分 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
23毫克/毫升 35.1 mM 100
L-α磷脂酰胆碱 18.8 24.3 70
胆固醇 4.2 10.9 三十
缓冲液和脂质体大小 规格
缓冲 磷酸盐缓冲溶液
pH值 7.4
脂质体大小 1.5-2μm

 

技术说明

  • 当用Clodrosome®处理动物或细胞时,吞噬细胞将脂质体识别为侵入的外来颗粒,并通过吞噬作用从局部组织或血清中去除脂质体。然后脂质体将氯膦酸盐释放到细胞溶质中导致细胞死亡。未包封的氯膦酸盐不能穿过细胞膜以引发细胞死亡。
  • Encapsome®对照脂质体通过与Clodrosome®相同的机制识别和吞噬。由于对照脂质体不含氯膦酸盐,吞噬细胞不会被杀死。然而,吞噬细胞确实通过细胞因子分泌,吞噬活性的暂时中止和文献中描述的其他反应来摄取对照脂质体。
  • 必须使用无菌技术从小瓶中取出产品。如果无菌性受损,请勿使用。如果在几周内多次访问单个样品瓶,这一点尤为重要。即使未开封,产品也不应在收到后超过60天使用。
  • 当不受干扰超过几个小时时,脂质体可能会沉淀下来。在即将使用之前,为了确保均匀的脂质体悬浮液,将样品瓶缓慢倒转数次,直到通过目视检查使悬浮液看起来均匀。剧烈或不稳定的摇动不会破坏脂质体,但可能引起泡沫和气泡形成,使得更难以测量所需剂量。
  • 如果进行静脉注射的人员没有经历或熟悉注射大量(约10%动物重量,以ml计),粘性液体或微粒悬浮液的预防措施,考虑在发生严重注射相关不良事件的情况下可以使用额外的动物。剂量控制动物首先熟悉大量注射。
  • 在全身给予Clodrosome®后数小时内,动物开始失去其免疫系统的重要组成部分。标准动物处理和住房方案不适用于免疫功能低下的动物。即使采取了这些预防措施,也要监测每只动物的一般健康状况,以获得与实验方案无关的机会性感染。在推荐的剂量水平下,产品没有固有的毒性。
  • 当静脉内给药时,使用标准预防措施向动物给药较大剂量,包括以下内容:a)在给药前将产品加热至室温。b)确保在给药前从注射器中除去所有气泡; 静脉注射气泡可能会导致空气栓塞,从而导致动物死亡或严重受伤。c)以不超过1毫升/分钟的缓慢,稳定的速度注入产品; 如果动物表现出任何非典型反应,例如异常激动,则降低输注速度。
  • 输注相关的不良反应通常涉及动物喘气以进行空气或其他类似癫痫发作的运动。动物通常在没有明显长久性损伤的情况下恢复,但研究人员必须评估对实验结果的任何潜在影响。
  • 脂质体应保持在4°C,切勿冷冻。

剂量

 

出现

Clodrosome®和Encapsome®均为白色乳状悬浮液,由大尺寸多层脂质体制成。由于它们的大尺寸,一些脂质体可能沉淀到小瓶的底部。如果闲置在冰箱中,Encapsome®将相分离并在小瓶底部形成颗粒,在顶部留下澄清溶液。Clodrosome®可能只会做得同样严重。因此,在使用前应摇动两者以形成均匀溶液。

 

存和保质期

存储

Clodrosome®和Encapsome®应始终在4°C​​的黑暗中储存,除非在动物给药前短时间内置于室温下。不要冻结。如果悬浮液被冷冻,氯膦酸盐可从脂质体中释放,从而限制其消耗巨噬细胞的有效性。ENS不对冷冻产品产生的结果负责。

保质期

Clodrosome®和Encapsome®每天生产。装运的批次是在同一天生产的。建议在生产日期后60天内使用产品。

 

 

encapsula CLD-8909说明书

Encapsula NanoSciences是一家专业公司,致力于为学术和工业领域的客户和合作伙伴提供脂质体研究,开发和制造专业知识,生产脂质纳米粒子,也称为脂质体。Encapsula常规提供药物包封脂质体的定制实验室规模脂质体制剂,例如Clodrosome®(氯膦酸盐脂质体),Encapsome®(用于氯膦酸盐脂质体的纯对照脂质体),Doxosome™(多柔比星脂质体),Immunosome™(用于抗体的反应性脂质体,蛋白质)结合),Immunodox™(抗体的反应性脂质体,含有多柔比星的蛋白质结合物),Immunogene™(抗体的反应性脂质体,含有遗传物质的蛋白质结合物),Immunofluor™(抗体的反应性脂质体,包含用于追踪的荧光分子的蛋白质缀合物),Genesome TM(脂质体DNA和RNA),Fluoroliposome TM(荧光脂质体),Atpsome TM(ATP脂质体),Cellsome TM(普通脂质体作为人工细胞模型)和Cosmesome TM(用于皮肤病学的脂质体) )对大学和工业研究实验室的客户。Encapsula NanoSciences近还推出了两种口服脂质体产品系列; 适用于宠物的NanoLife Nutra和适用于人类的NanoLife Tonics。

 

encapsula CLD-8909说明书

巨噬细胞耗尽试剂(Clodrosome®)

规格

金额

2毫升

149.00 美元

5毫升

$ 299.00

10毫升

499.00 美元

15毫升

$ 699.00

20毫升

899.00 美元

25毫升

$ 1,099.00

 

描述

Clodrosome®是一种多层脂质体悬浮液,其中氯膦酸盐被包封在脂质体的水性区室中。Encapsome®的配方和制备与Clodrosome®相同,只是氯膦酸盐不添加到脂质体中。将脂质体通过2μm聚碳酸酯膜过滤,以确保从悬浮液中除去可能对动物有毒的较大颗粒。两者均在无菌条件下制备和包装。当用Clodrosome®处理动物或细胞时,吞噬细胞将脂质体识别为侵入的外来颗粒,并通过吞噬作用从局部组织或血清中去除脂质体。然后脂质体将氯膦酸盐释放到胞质溶胶中,导致细胞死亡。未包封的氯膦酸盐不能穿过细胞膜以引发细胞死亡。

对照脂质体(Encapsome®)通过与Clodrosome®相同的机制被识别和吞噬。由于对照脂质体不含氯膦酸盐,吞噬细胞不会被杀死。然而,吞噬细胞确实通过细胞因子分泌,吞噬活性的暂时中止和文献中描述的其他反应来摄取对照脂质体。

适用于巨噬细胞靶向和追踪的荧光脂质体(Fluoroliposome®)可含有五种不同的荧光染料(DiI,DiO,DiD,DiA和DiR),覆盖整个光谱。荧光脂质体以标准和甘露糖化形式存在。

m-Clodrosome®和m-Encapsome®是甘露糖化试剂,专门配制用于有效靶向中枢神经系统和含有更多甘露糖受体的巨噬细胞中的巨噬细胞。

 

配方信息

Clodrosome®脂质体Clodronate悬浮液

脂质成分 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
23毫克/毫升 35.1 mM 100
L-α磷脂酰胆碱 18.8 24.3 70
胆固醇 4.2 10.9 三十
封装药物 浓度
氯膦酸盐((二氯 – 膦酰基 – 甲基)膦酸盐),二钠盐 18.4 * mM
*根据氯膦酸盐的类型,其浓度(mg / ml)会有所不同。如果使用四水合物盐,则包封药物的浓度为~7mg / ml,如果使用非水合盐,则浓度为~5mg / ml。
缓冲液和脂质体大小 规格
缓冲 磷酸盐缓冲溶液
pH值 7.4
脂质体大小 1.5-2μm

技术说明

  • 当用Clodrosome®处理动物或细胞时,吞噬细胞将脂质体识别为侵入的外来颗粒,并通过吞噬作用从局部组织或血清中去除脂质体。然后脂质体将氯膦酸盐释放到细胞溶质中导致细胞死亡。未包封的氯膦酸盐不能穿过细胞膜以引发细胞死亡。
  • Encapsome®对照脂质体通过与Clodrosome®相同的机制识别和吞噬。由于对照脂质体不含氯膦酸盐,吞噬细胞不会被杀死。然而,吞噬细胞确实通过细胞因子分泌,吞噬活性的暂时中止和文献中描述的其他反应来摄取对照脂质体。
  • 必须使用无菌技术从小瓶中取出产品。如果无菌性受损,请勿使用。如果在几周内多次访问单个样品瓶,这一点尤为重要。即使未开封,产品也不应在收到后超过60天使用。
  • 当不受干扰超过几个小时时,脂质体可能会沉淀下来。在即将使用之前,为了确保均匀的脂质体悬浮液,将样品瓶缓慢倒转数次,直到通过目视检查使悬浮液看起来均匀。剧烈或不稳定的摇动不会破坏脂质体,但可能引起泡沫和气泡形成,使得更难以测量所需剂量。
  • 如果进行静脉注射的人员没有经历或熟悉注射大量(约10%动物重量,以ml计),粘性液体或微粒悬浮液的预防措施,考虑在发生严重注射相关不良事件的情况下可以使用额外的动物。剂量控制动物首先熟悉大量注射。
  • Within hours after systemic administration of Clodrosome®, animals begin to lose important components of their immune system. Standard animal handling and housing protocols are not suitable for immunocompromised animals. Even when such precautions are taken, monitor the general health of each animal for opportunistic infections unrelated to the experimental protocol. There is no inherent toxicity to the product at the recommended dose levels.
  • 静脉注射时,使用标准预防措施给动物加大剂量,包括:a)在给药前将温热的产品加热至室温; b)确保在给药前从注射器中除去所有气泡。静脉注射气泡可能会导致空气栓塞,从而导致动物死亡或严重受伤; c)以不超过1毫升/分钟的缓慢,稳定的速度注入产品; d)如果动物出现任何非典型反应,例如异常激动,则降低输注速度。
  • 输注相关的不良反应通常涉及动物喘气以进行空气或其他类似癫痫发作的运动。动物通常在没有明显长久性损伤的情况下恢复,但研究人员必须评估对实验结果的任何潜在影响。
  • 脂质体应保持在4°C,切勿冷冻。

 

出现

Clodrosome®和Encapsome®均为白色乳状悬浮液,由大尺寸多层脂质体制成。由于它们的大尺寸,一些脂质体可能沉淀到小瓶的底部。如果闲置在冰箱中,Encapsome®将相分离并在小瓶底部形成颗粒,在顶部留下澄清溶液。Clodrosome®可能只会做得同样严重。因此,在使用前应摇动两者以形成均匀溶液。

行政路线

静脉给药(尾静脉)

静脉注射(复眼轨道)

腹膜内给药

气溶胶给药

胸膜内给药

鼻内给药

侵入性气管内滴注

脚垫管理

皮下给药(方法1)

皮下给药(方法2)

气管内给药

脑内给药

立体定向管理

海马内给药

内部管理

结膜下管理

玻璃体内注射给药

皮内注射

肌肉内给药

*治疗

关节内管理

阴道内给药

直肠内治疗

咽部蒸馏管理

 

 

储存和保质期

存储

Clodrosome®和Encapsome®应始终在4°C​​的黑暗中储存,除非在动物给药前短时间内置于室温下。不要冻结。如果悬浮液被冷冻,氯膦酸盐可从脂质体中释放,从而限制其消耗巨噬细胞的有效性。ENS不对冷冻产品产生的结果负责。

保质期

Clodrosome®和Encapsome®每天生产。装运的批次是在同一天生产的。建议在生产日期后60天内使用产品。

encapsula IMD-1011说明书

encapsula IMD-1011说明书

encapsula IMD-1011说明书

 

Immunodox®-Folate (PEGylated)

SKU# IMD-1011

SIZE PRICE
2-ml $850.00
5-ml $1,900.00

描述

在过去的五十年中,已经使用各种类型的化学方法将诸如抗体,肽,蛋白质或其他反应性配体的分子缀合到脂质体的表面。通常,可以通过N端,C端或可利用的硫(例如, Fab'级分或硫醇化抗体)来实现缀合并非所有化学方法都具有相同的结合收率和效率,经常要生产生物相容性批次可能是一个挑战。

叶酸结合蛋白(FBP)是一种内源性蛋白,对叶酸具有很高的亲和力。抗体可以通过FBP标记,免疫脂质体可以通过FBP与脂质体表面的叶酸脂质之间的非共价和高亲和力相互作用形成。在这种方法中,已经通过硫醚键与FBP共价连接的抗体与叶酸衍生物脂质体偶联。具有相对较低的分子量(MW〜40 kDa)和单个结合位点可防止脂质体交联。

配方信息

叶酸Immunodox®(聚乙二醇化)

脂质组成 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
氢化大豆PC 9.58 12.22 57
胆固醇 3.19 8.25 38
DSPE-聚乙二醇(2000) 2.7 0.96 4.5
DSPE-PEG(2000)-叶酸盐
0.39 0.12 0.5
全部的 15.86毫克/毫升 21.55毫米 100
缓冲液,脂质体大小和封装的药物浓度 规格
内部缓冲区 硫酸铵
外部缓冲区 磷酸盐缓冲溶液
pH值 7.4
脂质体大小 100纳米
封装的阿霉素 2毫克/毫升(3.45毫米)

结合方案

材料和设备

为了将用FBP标记的抗体或蛋白质与Immunodox®-叶酸脂质体偶联,您需要:

  1. 建议使用实验室涡旋混合器。
  2. 透析需要实验室磁力搅拌器。
  3.  具有适当MWCO的Float-A-Lyzer®可以轻松清除游离和非结合蛋白/肽/配体的脂质体结合配体。您需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时,透析膜上的孔径接近100 nm,因此可以透析您的脂质体。您不能盲目使用透析盒。在使用离心柱或透析盒之前,请先了解该技术。如果未使用正确的MWCO,则可能会失去全部准备。对于此协议,我们建议MWCO为300,000道尔顿。

制备方法

  1. 叶酸中的总脂质浓度为21.55 mM。脂质体中0.5%mol的脂质包含PEG-叶酸酯基团,并且只有一半暴露于脂质体的外部,这等于0.053 mM的反应性结合脂质。对于2ml体积的脂质体,其等于1.08×10 -7 mol,对于5ml体积的脂质体,其等于2.69×10 -7 mol的PEG-叶酸酯。 将FBP标记的抗体与PEG-叶酸酯脂质的摩尔比添加为1:20。
  2. 在室温下将Immunodox®-Folate与抗体-FBP一起孵育1小时。
  3. 透析除去非结合的抗体,蛋白质,肽或配体。与尺寸排阻色谱柱相比,我们更喜欢透析。透析的过程要慢得多,但是从非结合蛋白/多肽/配体中清除了制备物后,免疫脂质体的损失将降旋转柱要快得多,但您很容易损失掉旋转柱上50%以上的脂质体。我们建议使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根据蛋白质,配体,抗体或抗体片段的分子量选择合适的MWCO盒。 笔记:如果决定使用透析盒,则需要确保MWCO低于1,000,000道尔顿。在1,000,000道尔顿时,透析膜上的孔径接近100 nm,因此可以透析您的脂质体。您不能盲目使用透析盒和离心柱。它们有各种尺寸,您需要明智地选择正确的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂质体溶液8小时。用新鲜的1升PBS更换透析缓冲液,再透析8小时。完成此步骤后,即可使用旋转柱或透析盒来使用已清理的免疫脂质体。如果未使用正确的MWCO,则可能会失去全部准备。

脂质体颗粒计算器

Immunodox®脂质体是单层的,尺寸为100 nm。脂质体的摩尔浓度为21.55mM。通过具有 脂质体直径(nm)和脂质浓度(µM),您可以计算出一个脂质体中脂质的总数和一毫升脂质体溶液中脂质体的数目。要使用计算器,请单击 此处

技术说明

  • 阿霉素是具有λex 470 nm和λem 585 nm的荧光分子如果您在抗体或配体上使用荧光标签,则需要确保它们不会互相干扰。
  • 请记住,表面含有叶酸的脂质体的主要用途是靶向细胞上的叶酸受体。使用标记有FBP的抗体/蛋白质或配体制备免疫脂质体是非常利基的应用。
  • 由于暴露于低pH下叶酸和FBP之间的亲和力降低,免疫脂质体在暴露于内体小室的低pH环境后通过内吞作用而被内在化后可能会解体。通过允许将内化的脂质体分选到适当的亚细胞区室和/或促进药物分子从脂质体的细胞内释放,这种内化触发的解偶联可能有益于在细胞水平上递送脂质体药物。
  • 可以使用尺寸排阻旋转柱(例如Sepharose®CL-4B)代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是,在纯化过程中,大量的脂质体会粘在色谱柱上,因此我们强烈建议使用透析法,而不是使用大小排他的珠子。
  • 如果您使用的是疏水的配体或肽,则建议将其溶解在DMSO或DMF中,然后向其中添加缓冲液。建议溶液中使用的DMSO或DMF量不超过5%。DMF和DMSO均与脂质体相容,并且也可与水混溶。其他有机溶剂(例如乙醇和氯方)与脂质体不相容,会导致脂质体裂解。如果终使用DMSO或DMF,那么在完成偶联反应后,您需要从脂质体中除去DMSO和DMF。为此,您需要使用由再生纤维素膜制成的透析盒。注意:并非所有膜都与DMF和DMSO兼容。我们建议使用Slide-A-Lyzer™MINI透析设备 由ThermoFisher生产的再生纤维素膜制成的MWCO为2K。去除DMSO或DMF后,您可以使用Float-A-Lyzer®透析设备进行清理准备的后一步。
  • 脂质体应保持在4°C且切勿冷冻。

 

encapsula包含DOTAP的阳离子脂质体列表

encapsula包含DOTAP的阳离子脂质体列表

 

encapsula包含DOTAP的阳离子脂质体列表

(Genesome®)(普通和荧光)

 

尺寸 货号 脂质组成 价格 数量 小计
2毫升 GEN-7000 DOTAP(100%) $ 750.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7001 DOTAP:胆固醇(1:1) $ 750.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7002 DOTAP:DOPE(1:1) $ 750.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7036 DOTAP:Chol:DOPE(1:0.75:0.5) $ 750.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7008 含有0.5%DiI(荧光)的DOTAP(100%) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7007 含0.5%DiO(荧光)的DOTAP(100%) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7003 DOTAP:胆固醇(1:1)含有0.5%NBD-DOPE(荧光) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7004 DOTAP:含有0.5%Rhod-PE(荧光)的胆固醇(1:1) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7005 含有0.5%NBD-DOPE(荧光)的DOTAP:DOPE(1:1) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7006 含有0.5%Rhod-PE(荧光)的DOTAP:DOPE(1:1) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7037 含有0.5%NBD-DOPE(荧光)的DOTAP:Chol:DOPE(1:0.75:0.5) $ 850.00
$ 0.00
2毫升 GEN-7038 含有0.5%Rhod-PE(荧光)的DOTAP:Chol:DOPE(1:0.75:0.5) $ 850.00
$ 0.00
批量和自定义尺寸 退房
购物车总计 $ 0.00

描述

阳离子脂质体传统上用于传递遗传物质,例如各种类型的DNA(pDNA,cDNA,CpG DNA,寡核苷酸,反义寡核苷酸),各种类型的RNA(例如siRNA,mRNA)和核酸酸模拟物(NAM)。 将DNA封装到常规的中性带电荷的基于PC的脂质体中可能是一个技术问题,主要是由于质粒的大小。由于这个问题在80年代后期,已经开发了由阳离子脂质和PE组成的脂质体。这个想法是用阳离子脂质的正电荷中和pDNA的负电荷,以便主要由于静电相互作用有效地捕获更多质粒并将其传递到细胞中。通常,该程序仅基于将阳离子脂质体与DNA或RNA混合并将其添加到细胞中即可。这导致骨料的配方。 

为了设计合适的阳离子脂质用于基因传递,已将两种方法用于阳离子脂质合成:1)基于胆固醇的设计,例如DC-胆固醇和GL-67脂质,以及2)非基于胆固醇的设计,例如作为DOTAB,DDAB和DOTMA。 为了使用脂质体在体外成功转移基因应考虑一些因素:  i)结合和包装脂质体中DNA / RNA的能力; ii)包装的DNA / RNA与细胞表面的相互作用; iii)DNA / RNA内在化的效率; iv)万一发生内吞作用,从内体释放细胞内DNA; v)细胞核中的转基因表达水平。 已根据其在酸性条件下释放其含量的趋势设计了对pH敏感的脂质体。主要概念基于病毒,该病毒通过pH 5-6的蛋白质与内体膜融合,并在到达溶酶体之前将其遗传物质传递到细胞质中。 通常,pH敏感脂质体由二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)组成。由于磷脂酰乙醇胺(PE)在酸性条件下会发生变化,因此据信它可以充当膜融合促进剂。 脂质体与细胞之间相互作用的有效性高度依赖于脂质体组合物。脂质体通过各种内吞过程捕获,效率取决于细胞类型和脂质体大小。各种大小和电荷的脂质体可通过吞噬作用附着于巨噬细胞和嗜中性粒细胞。脂质体附着到细胞表面后,由于早期内体的酸性更高(6.50),内化进入内体。通过成熟或囊泡融合将脂质体转移到酸性更高的pH(5.5-6.0)的后一个内体,这需要10-15分钟。摄取后二十分钟(或更长时间),内含物被递送至pH 5.0或更低的溶酶体。溶酶体是内吞途径中主要的降解和后的内吞区段,pH不敏感的脂质体在其中积累和降解。但是,在pH敏感脂质体渗透到细胞中后,不会发生积累和降解。

下载产品说明书 下载安全数据表(SDS)

配方信息

包含DOTAP的阳离子脂质体(Genesome®)(普通和荧光)

有关上述脂质体脂质组成的更多信息,请单击此处

缓冲液和脂质体大小 规格
缓冲 去离子无核糖核酸水
pH值 7
脂质体大小 100纳米

荧光阳离子脂质体的荧光染料

荧光染料 激发/发射(nm) 分子结构
1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(DiI) 549/565
3,3'-二亚油基氧杂碳菁高氯酸盐(DiO) 484/501
1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(7-硝基-2-1,3-苯并恶二唑-4-基)(铵盐) 460/535
1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(lissamine罗丹明B磺酰基)(铵盐) 560/583

氮/磷(N / P)比

基于阳离子胺氮(在阳离子脂质中)和DNA磷酸基团浓度计算正负电荷之比。 DNA和RNA是核苷酸的聚合物。它们通过磷酸二酯键(一种特定类型的共价键)结合在一起,该磷酸二酯键可以长到数百万个核苷酸。由于存在构成每个核苷酸的磷酸根基团(戊糖+含氮碱基+磷酸根),DNA和RNA带负电。当形成磷酸二酯键的一部分时,它们保留2个负电荷中的1个。失去另一个负电荷以形成与新戊糖的另一个酯键。这就是将该键称为“磷酸二酯”的原因。例如,阳离子脂质DOTAP具有以下结构。

DOTAP具有一个氮,因此每个分子带一个正电荷。1纳摩尔的DOTAP可贡献1纳摩尔的正电荷。一些阳离子脂质含有一个以上的氮,但并非所有的氮原子都带有正电荷。对于其他脂质,请查看它们的分子结构以找到分子中氮原子的数量。

siRNA脂质体

RNA与DNA不同,是单链分子。但是,siRNA是双链的例如,在一个长21 bp的siRNA分子中,由于碱基对中有2个核苷酸,并且每个核苷酸带有一个负电荷,因此存在42个负电荷。

siRNA碱基对

DNA电荷计算

µg DNA可产生3.1 nmol带负电的磷酸盐。

阳离子脂质-鱼精蛋白-DNA(LPD)复合物

鱼精蛋白是一种高度带正电荷的聚阳离子肽,分子量为5.1 kDa,可作为DNA缩合试剂。已知鱼精蛋白是精子核中用于浓缩DNA的主要成分。所有鱼精蛋白都含有精氨酸,并且是强碱性的(等电点= 11-12)。
由脂质鱼精蛋白-DNA(LPD)组成的脂质多聚体是通过鱼精蛋白预压缩的DNA与阳离子脂质体的结合而产生的。这与通过阳离子脂质和DNA之间直接静电相互作用形成的阳离子脂质体-DNA脂质复合物相反。脂质鱼精蛋白-DNA具有净正表面电荷,据信对于其与阴离子细胞表面蛋白聚糖的结合是*的。细胞表面的这种静电相互作用触发脂质-DNA复合物的内吞作用进入细胞。

向DNA和阳离子脂质体中添加鱼精蛋白的顺序非常重要。一种方案涉及将质粒DNA与硫酸鱼精蛋白预复合,然后添加阳离子脂质体。该协议有两个缺点。其中之一是需要大量过量的阳离子脂质才能实现大水平的基因表达。通常,阳离子脂质/ DNA摩尔比必须大于35,才能有效体内转染。另一个问题是难以制备浓缩样品。这是由于鱼精蛋白硫酸盐与质粒DNA的强烈相互作用,这使得高浓度鱼精蛋白/ DNA复合物的制备变得困难,尤其是在需要高鱼精蛋白/ DNA比(w / w)的情况下。为了解决这些问题,已经开发了第二种方案,其中将硫酸鱼精蛋白与阳离子脂质体混合,然后添加质粒DNA。由于阳离子脂质体和鱼精蛋白之间竞争与质粒DNA的相互作用,大大降低了鱼精蛋白和DNA之间的强相互作用。一定条件下,这将导致形成平均直径小于150 nm的LPD。

为了计算正负比率,您需要考虑:

  • 1 mol的鱼精蛋白硫酸盐贡献21 mol的正电荷(硫酸鱼精蛋白的MW约为5.1 kDa)。
  • 1 nmol的单阳离子脂质可贡献1 nmol的正电荷。
  • µg DNA可产生3.1 nmol带负电的磷酸盐。

Lipoplex的插入后PEG化

聚乙二醇化已在脂质体学领域广泛使用了数十年。聚乙二醇化的好处是*的,包括改善脂质复合体的系统循环。然而,脂质复合体的PEG化的缺点也已经被很好地证明。这包括防止脂质复合物与靶细胞缔合以及抑制DNA从内体区室释放,这导致非常低的转染效率。

随着掺入阳离子脂质体中的PEG化脂质的分子量增加,阳离子脂质体的细胞毒性增加。例如,含有PEG5000的脂复合物比含有PEG2000的脂复合物更具细胞毒性。阳离子脂质体的转染活性随PEG-DSPE脂质百分比的增加而降低。先前的研究表明,添加0.5%PEG-PE会使肺中的原始荧光素酶活性降低至原荧光素酶活性的60%,1%降低至40%,2%降低至10%。还据报道,将PEG-PE(1%的阳离子脂质)添加到新形成的质粒-脂质体复合物中可以防止复合物在储存期间聚集。但是,将含有PEG-PE的复合物在4°C下储存会缓慢恢复其原始活性。一般来说,对于转染实验,不使用聚乙二醇化。但是,在某些实验中,尤其是在体内实验中,使用了聚乙二醇化的脂质复合物。

如果您需要进行涉及阳离子脂质体聚乙二醇化的实验,那么强烈建议首先通过将适量的遗传物质添加到脂质体中,然后在外部添加聚乙二醇化脂质(插入后)并孵育脂质体来形成脂质复合物。然后将PEG脂质在高于阳离子脂质的液相到凝胶相转变温度的温度下放置1小时(如果是不饱和阳离子脂质,例如DOTAP,则可以在室温下孵育)。

在许多实验中,不是使用传统的PEG2000-DSPE,而是将C8-PEG2000-神经酰胺用于脂质体的PEG化,因为PEG-神经酰胺是“脱落的PEG”,在与生物膜接触时会从脂质体中扩散出来。

细胞活力测定

由于脂质体制剂中使用的阳离子脂质具有细胞毒性,因此强烈建议进行细胞生存力分析。可以通过改良的Alamar蓝分析法评估细胞活力。阿拉玛蓝含有氧化还原指示剂,该指示剂在细胞代谢的氧化还原范围内均显示荧光变化。简而言之,将10μL的10%(v / v)Alamar蓝色染料添加到100μL样品中。在37ºC下孵育2小时后,在荧光分光光度计上在570 nm和600 nm上读取所得的荧光。使用以下公式计算细胞活力(对照细胞的百分比):

技术说明

  • Genesome®产品是使用无去离子RNAse的水配制的。
  • N / P比是指氮磷比。N代表氮,而不是负,并且氮带正电。P代表磷酸盐,不是正值。磷酸盐带有负电荷。因此,N / P比也代表正负比。一些阳离子脂质含有一个以上的氮,但并非所有的氮原子都带有正电荷。例如,DC-胆固醇具有两个氮原子,并且其中只有一个带正电。羧基旁边的氮不是带正电荷的,因此不应该包括在N / P计算中。
  • 细胞毒性也可以按照制造商的说明使用CytoTox96®非放射性细胞毒性测定法(Promega,麦迪逊,威斯康星州)进行评估
  • 脂质体应保持在4°C且切勿冷冻。

外貌

PlainGenesome®是由纳米级单层脂质体制成的白色半透明液体。FluorescentGenesome®制剂带有颜色,其颜色取决于所用荧光染料的类型(有关外观,请参见SDS)。通常由于脂质体小,在小瓶底部不会发生沉淀。将脂质体包装在琥珀色的小瓶中。 

encapsula 标准Doxosome™试剂盒说明书

encapsula 标准Doxosome™试剂盒说明书

encapsula 标准Doxosome™试剂盒说明书

 

标准Doxosome™试剂盒-阿霉素脂质体(聚乙二醇化)

SKU#DOX-3000

尺寸 价格
2毫升 $ 600.00
5毫升 $ 1,350.00

 

描述

该试剂盒由一个小瓶的聚乙二醇化阿霉素脂质体和一个小瓶的聚乙二醇化对照脂质体组成。聚乙二醇化的阿霉素脂质体制剂的大小,脂质组成和包封药物的量与市售Doxil®相似。该制剂仅用于研究目的,并用于注射到实验动物中。阿霉素药物已经通过硫酸铵梯度远程加载而被加载到脂质体中。该制剂已准备好注射。聚乙二醇化阿霉素的对照制剂在大小和脂质组成上与聚乙二醇化阿霉素相似,但不含阿霉素药物。该制剂以硫酸铵梯度制成。

也可获得适用于与各种抗体,蛋白质,肽和配体缀合的表面反应性脂质体制剂。

有关适用于结合的表面反应性阿霉素脂质体(Immundox®)的更多信息,

配方信息

标准Doxosome™试剂盒-阿霉素脂质体(聚乙二醇化)

用于标准Doxosome™(聚乙二醇化)的2小瓶试剂盒 规格
样品瓶1 由HSPC:胆固醇:DSPE-PEG(2000)(57:38:5摩尔比)组成的预制脂质体
样品瓶2 由HSPC:胆固醇:DSPE-PEG(2000)(57:38:5摩尔比)组成的预制脂质体
 
小瓶1的脂质成分 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
氢化大豆PC 9.58 12.22 57
胆固醇 3.19 1.14 38
DSPE-聚乙二醇(2000) 3.19 8.26 5
全部的 15.96毫克/毫升 21.62毫米 100
 
样品瓶1的缓冲液,脂质体大小和封装药物浓度 规格
内部缓冲区 硫酸铵
外部缓冲区 组氨酸/蔗糖缓冲液
pH值 6.5
脂质体大小 80-100纳米
封装的阿霉素 2毫克/毫升(3.45毫米)
 
小瓶2的脂质成分 浓度(mg / ml) 浓度(mM) 摩尔比百分比
氢化大豆PC 9.58 12.22 57
胆固醇 3.19 1.14 38
DSPE-聚乙二醇(2000) 3.19 8.26 5
全部的 15.96毫克/毫升 21.62毫米 100
 
小瓶2的缓冲液和脂质体大小 规格
内部缓冲区 硫酸铵
外部缓冲区 组氨酸/蔗糖缓冲液
pH值 6.5
脂质体大小 80-100纳米
 

脂质体颗粒计算器

阿霉素脂质体为单层,尺寸为100 nm。脂质体的摩尔浓度为21.62mM。通过具有 脂质体直径(nm)和脂质浓度(µM),您可以计算出一个脂质体中脂质的总数和一毫升脂质体溶液中脂质体的数目。要使用计算器,请单击 此处。

外貌

Doxosome™为红色,Doxosome™Control为白色半透明液体,均由纳米级单层脂质体制成。通常,由于脂质体小,在小瓶底部不会发生沉淀。脂质体包装在琥珀色的小瓶中。