应用范围：膜电位染色
产品参数
外观：可溶于 DMSO 或 DMF 的橘红色固体
λEx/λEm (MeOH) = 482/497 nm
CAS 号：905-96-4
分子式：C21H21IN2O2
分子量：460.31
分子结构图：
贮存条件 -20℃ 避光保存，保质期一年。
产品介绍
DiOC2(3) (3,3′-Diethyloxacarbocyanine, 碘化物)是一种广泛应用的膜电位探针。如用于线粒体膜电位的研究，DiOC2(3) 能够穿透真核细胞的细胞质，在浓度低于 100 nM 时，染料在具有活跃膜电位的线粒体中积累，形成红色荧光聚集体，当使用破坏线粒体膜电位的（如 CCCP ）处理细胞时，DiOC2(3) 染色强度降低。
DiOC2(3) 染色的细胞可以通过流式细胞仪的蓝色激发， 绿色和红色发射可视化。该试剂可与其他试剂搭配使用，例 如红色激发的 Annexin V–APC，用于活力和凋亡的研究。
使用方法（线粒体膜电位检测）
DiOC2(3) 标记细胞
由于细胞类型、培养条件的差异以及应用方向的不同，建议起始浓度 50 nM 摸索最佳染色条件。
将 DiOC2(3) 溶于无水 DMSO 配制成 100 mM 的储 液：向管中加入 435 μL 的无水 DMSO，充分溶解。每次实验前，需将储液充分涡旋混匀。
开始实验前，将 DiOC2(3) 和 CCCP 恢复至室温。
1.1 用预热的培养基、磷酸盐缓冲液或其他缓冲液重悬细胞，使细胞最终密度为 1×10^6 个/mL。
1.2 设置对照，向管中加入 1 μL CCCP 溶液至终浓度为 50 μM，37℃孵育 5 min。
注：CCCP 可以和 DiOC2(3) 同时添加。为了获得不同细胞类型的最佳效果，可能需要滴定 CCCP。
1.3 配置合适浓度的 DiOC2(3)工作液，加入工作液至终浓度为 50 nM，37℃ 孵育 15-30 min。如果进行其他标记，如用 Annexin V 结合物标记，请执行步骤 2.1；如果不需要其他染色，请继续执行以下步骤。
1.4 （可选）清洗细胞一次，向每个细胞管中加入适量预热的 PBS 缓冲液。
1.5 1000 rpm 离心 5 min 1.6 向每个管中加入 500 μL PBS 缓冲液，轻弹管壁使其重悬。
1.7 使用 YF488 染料的发射滤光片在 488 nm 激发下进行流式分析。用 CCCP 处理的样品调节补偿。
Annexin V 结合物额外标记
可以用额外的标记方法检测 DiOC2(3) 染色后细胞的凋亡及生存状态。如用 Annexin V–APC 标记：
2.1 向步骤 1.3 的细胞中加入适量预热的 PBS 缓冲液洗 涤细胞一次。
2.2 1000 rpm 离心 5 min，然后重悬于 100 μL 1×Annexin 结 合缓冲液中。
2.3 加入 5 μL Annexin V 结合物（如 Annexin V–APC）。
2.4 37℃ 孵育 15 min。
2.5 加入 400 μL Annexin 结合缓冲液。
2.6 用适合于 YF488/PI 和 YF633 染料的发射滤光片在 488 nm 和 633 nm 激发下进行流式分析。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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