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Wako 125-05061 赖氨酰肽链内切酶说明书

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Wako 125-05061 赖氨酰肽链内切酶说明书

Wako 125-05061 赖氨酰肽链内切酶，MS级

Lysyl Endopeptidase®, Mass Spectrometry Grade (Lys-C) 

赖氨酰肽链内切酶，MS级

品牌：Wako
CAS No.：
储存条件：-20℃

纯度：–

质谱级赖氨酰肽链内切酶
Lysyl Endopeptidase

质谱级赖氨酰肽链内切酶

Lysyl Endopeptidase

本产品是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，该酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的多肽，可用于蛋白测序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸 基团的多肽，增加多肽的数量。产品已按照使用习惯做成小包装，是方便使用的冷冻干燥品。

来源：细菌

外观：冻干粉（包含2mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH8）

活性：0.03～0.07AU/vial

分子量：27,000(琼脂糖过滤)，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或缓冲液

稳定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris缓冲液中，可在4℃稳定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃时能稳定保存，但温度超过50℃时不稳定。

最适pH值:9.0~9.5

等电点：6.9~7.0 

底物特异性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH2,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH2,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制剂：DFP，PMSF，TLCK

◆特点

●  高特异性、高蛋白质消化率、适用于蛋白质谱分析

●  提高裂解效率、增加肽段数量

●  根据使用量特意制备小包装，方便使用

◆应用

分别采用胰蛋白酶(Tp)、赖氨酰肽链内切酶(Lep) 和Tp与Lep联用进行胶内酶切的效果比较。

牛血清蛋白BSA 的条带(100ng) 通过SDS-PAGE 获得，然后分别用Tp、Lep和Lep+Tp进行酶切，再用MALDI-TOFMS法进行分析。

这些蛋白酶的实验效果见下表。

表 1：Tp、Lep和Lep+Tp的结果对照

这些结果表明Lep酶解的错误裂解率低。Tp酶解时加入Lep后，错误裂解率有所降低，同时，可以鉴定出更多的多肽。

Tp  Lep  Lep +Tp
裂解位点 精氨酸和赖氨酸的C端  赖氨酸的C端  精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率(  错误裂解所占比例  ) 多(8%) 很少(0%) 少(3%) 
鉴定出的多肽数量  17 19 22

胰蛋白酶 (Tp)( 图 a) 和赖氨酰肽链内切酶 (Lep)+Tp ( 图 b) 酶切后的质谱结果对照图。

Lep+Tp酶切后，可以在m/z=2000时得到吸收峰，而单独的Tp酶切在m/z=2000时没有吸收峰。该结果表明Lep可以提高测序覆盖度。

( 数据由大阪医疗中心和妇婴健康研究所Y. Wada博士提供 )

赖氨酰肽链内切酶

赖氨酰肽链内切酶，最初由Masaki 等人从土壤细菌中分离得到。该酶可以特异性剪切赖氨酸残基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸残基的肽键，用于蛋白测序和Lys-X 化合物的酶催化合成。该酶稳定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小时之后，仍然拥有完整的生物活性。

外观 冻干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8） 活性 见包装
分子量 27,000（凝胶过滤）；30,000 (SDS-PAGE) 溶解性 易溶于水或缓冲液
最佳pH 9.0-9.5（酰胺酶的最佳活性pH） 等电点 6.9-7.0
抑制剂 DFP、PMSF、TLCK 来源 细菌
稳定性 　溶于pH 值5.0-12.0 的缓冲液中，可于4℃稳定保存。溶于pH值6.0-11.0的缓冲液中，可于30℃稳定保存，但是50℃及以上不稳定。
单位定义 　一单位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH9.5 时每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。
底物特异性 　水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
　非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

实验方法：

1. 试剂：

A．0.2 mol/L AMP 缓冲液，pH值9.5

溶解4.2g的2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇于150 mL的水中，加入1 mol/L HCl调pH值至9.5，再加水使体积至200 mL。

B．2.5 mmol/L 底物溶液

溶解22.6 mg的N-苯甲酰基-DL-精氨酰-4-硝基苯胺盐酸盐于20 mL水中。

C.  2 mmol/L Tris-HCl缓冲液，pH8

溶解0.24 mg的2-氨基-2-羟甲基-1,3-丙二醇于900mL水中，加入0.1 mol/L HCl调pH值至8，再加水使体积至1L。

D. 酶溶液

溶解1vial的赖氨酰肽链内切酶于1 mL的溶剂C中，可直接加入。

E．终止溶液

将55 mL水和45 mL乙酸混合均匀。

2. 步骤

试剂 检测样品 空白对照
A 2.6 mL 2.6 mL
B 0.3 mL 0.3 mL
30℃预培养5分钟
D 0.1 mL –
C – 0.1 mL
立即混合均匀，30℃预培养25分钟
E 1.0 mL 1.0 mL

3. 单位的定义

酰胺酶单位是指30℃ pH9.5时，每分钟产生1 umol对硝基苯胺的酶量。

AU/vial = [(a-b) / 25] × (1 / 9.62) × (4.0 / 0.1)

a.    检测样品中的吸光度

b.    空白对照中的吸光度

胶内酶切的实验操作流程

用聚硅酮处理的微量离心管和吸管端防止捕获任何蛋白。使用质谱分析用凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）

1.    电泳分离蛋白质样品；

2.    从凝胶中切割蛋白质片断并放入微量离心管；

3.    使凝胶脱色（可使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液）；

4.    加入300 uL乙腈到试管里，搅拌器振荡30分钟；

5.    去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管。

6.    在Parafilm膜上打出针孔，真空干燥15分钟；

7.    100 uL 10 mmol/L DTT溶解于100 mmol/L 碳酸氢铵，56℃恒温1小时。

8.    室温冷却后，用等量的50mM碘乙酰胺溶解于100 mmol/L 碳酸氢铵，暗处恒温45分钟并涡旋；

9.    用100 uL 100 mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；

10.  用300 uL乙腈干燥凝胶片段15分钟；

11.  用100 uL 100 mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟；

12.  用300 uL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；

13.  去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟；

14.  用100 uL赖氨酸内切酶溶液*在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟；

*赖氨酸内切酶稀释于50 mmol/L Tris-HCl  pH 8.5；

15.  去除100 uL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放在37℃ 10 uL 50 mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜；

16.  加入50 uL 20mmol/L碳酸氢铵20分钟内振荡凝胶片段3次抽提多肽；

17.  加入5%甲酸/50%乙腈20分钟内振荡凝胶片段3次抽提多肽；

18.  如果需要用Speed Vac.浓缩多肽；

19.  用ZipTip脱盐和纯化多肽；

20.  如果需要用弱真空浓缩多肽至2 uL；

21.  加入基质进行质谱分析。

注意：根据细菌的生理和形态特征分类，产品来源为水解无色杆菌，但是最近细菌分类学将这种细菌鉴定为产酶溶杆菌。

保存：暗处-20℃保存

规格：20 ug×5vial

相关产品

产品编号 产品名称 规格
202-15951 Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry   Grade猪胰腺胰蛋白酶质谱级别 5×20 μg
056-05921 Endoproteinase Asp-N, Sequencing grade胞内蛋白酶 Asp-N（测序级别） 2 μg
050-05941 Endoproteinase Glu-C, Sequencing grade胞内蛋白酶 Glu-C（测序级别） 50 μg
164-13982 V8 Protease [Endoproteinase Glu-C]V8蛋白酶 2 mg

赖氨酰肽链内切酶，MS级

产品编号：125-05061

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶现货说明书

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上海金畔生物wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶现货说明书

上海金畔生物wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶现货说明书

wako 125-05061赖氨酰肽链内切酶 Lysyl Endopeptidase 
【产品详情】
赖氨酰肽链内切酶
品牌：WAKO 和光
级别：质谱级

英文品名：Lysyl Endopeptidase?, Mass Spectrometry Grade
货号：125-05061
规格：5×20 μg
应用：蛋白质组学。
用途：赖氨酰肽链内切酶，蛋白测序、质谱分析，多肽合成

【实验原理】
赖氨酰肽链内切酶是质谱分析前处理时常用的蛋白分解酶即赖氨酰肽链内切酶，赖氨酰肽链内切酶可以特异性切除赖氨酸基团C 末端的多肽，赖氨酰肽链内切酶可用于蛋白测序分析和Lys-X 化合物的酶合成。
若同时使用赖氨酰肽链内切酶和胰酶，可更好地切断赖氨酸基团的多肽，增加多肽的数量。赖氨酰肽链内切酶已按照使用习惯做成小包装，是方便使用赖氨酰肽链内切酶的冷冻干燥品。

【产品特点】
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
1）赖氨酰肽链内切酶用于蛋白质谱分析：高特异性、高蛋白质消化率；
2）赖氨酰肽链内切酶能增加肽段数量、提高裂解效率；
3）赖氨酰肽链内切酶独立包装，20 μg/一支

【结果】表明Lep 酶解的错误裂解率低。
Tp 酶解时加入Lep 后，错误裂解率有所降低，同时，赖氨酰肽链内切酶可以鉴定出更多的多肽。

Tp Lep Lep +Tp
裂解位点 精氨酸和赖氨酸的C 端 赖氨酸的C端 精氨酸和赖氨酸的C端
错误裂解率( 错误裂解所占比例) 多(8 %) 很少(0 %) 少(3 %)
鉴定出的多肽数量 17 19 22

赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako
Lep+Tp 赖氨酰肽链内切酶切后，可以在m/z=2000 时得到吸收峰，而单独的Tp 酶切在m/z=2000 时没有吸收峰。该结果表明Lep 可以提高测序覆盖度。
赖氨酰肽链内切酶Lysyl Endopeptidase 125-05061 wako

 

WAKO部分产品清单：

 

货号   品名     规格  Cas

012-01965   Alminium Oxide   500g     –

012-08643   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 1mL×5A –

013-08391   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5mL      –

015-14461   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2  5mL      –

015-25191   Anti Phosphorylated α-Synuclein, Monoclonal Antibody (pSyn#64)      50ul      –

011-14463   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2  1mL×5A –

011-19365   2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane]

Dihydrochloride   500g     27776-21-2

016-08641   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 5mL      –

021-16201   BES-H2O2(Cell-impermeant)   1mg      –

031-17601   Collagenase Type I    100mg   9001-12-1

032-08385   Citric Acid Monohydrate   500g     5949-29-1

032-15372   Casein Phosphopeptide    25g –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

016-20001   Anti Iba1, Rabbit (for Western Blotting)     50μg     –

016-23281   Anti Rat P2X4, Monoclonal Antibody     50ug     –

017-19362   2,2′-Azobis[2-(2-imidazolin-2-yl)propane] Dihydrochloride    25g 27776-21-2

018-08721   Agar, Powder     100g     9002-18-0

018-22021   Anti Mouse Ago2, Monoclonal Antibody 100μL    –

019-03435   Ammonium sulfate    500g     7783-20-2

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

021-17801   BES-So-AM 1mg      936356-51-3

022-07985   γ-Butyrolactone  500mL   96-48-0

025-03195   Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C)    500mL   –

047-18863   Dexamethasone 100mg   50-02-2

049-18801   4′,6-Diamidino-2-phenylindole Dihydrochloride n-Hydrate      10mg      28718-90-3

058-07681   EasySeparator    1set      –

025-03195   Buffer Solution Standard (Phosphate pH Standard Equimolal Solution)

pH6.86 (25 degrees C)    500mL   –

019-19741   Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)    50μg     –

019-22291   Anti Olfactory Marker Protein, Goat      100μL    –

021-02195   Boric acid     500g     10043-35-3

034-06363   N-Caprylic Acid   25mL    124-07-2

034-16111   Cefotaxime Sodium Salt   1g   64485-93-4

035-04595   Creatinine    500g     60-27-5

035-17604   Collagenase Type I    1g   9001-12-1

038-23221   α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1mg      –

039-01335   Carboxymethyl Cellulose Sodium Salt   500g     9004-32-4

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

019-08393   Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5Ax1mL –

019-11941   Active Carbon-impregnated Silica Gel   10g –

019-19741   Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)    50μg     –

025-15481   BES-Thio     1mg      –

026-16371   BF-170  1mg      –

027-01276   Benzyl Alcohol    500mL   100-51-6

028-03185   Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

pH4.01 (25 degrees C)    500mL   –

028-03185   Buffer Solution Standard (Phthalate pH Standard Solution)

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

pH4.01 (25 degrees C)    500mL   –

028-03205   Buffer Solution Standard (Tetraborate pH Standard Solution)

pH9.18 (25 degrees C)    500mL   –

077-03155   Gelatin   500g     9000-70-8

081-00136   Heparin Sodium  10mu    9041-08-1

088-00705   L-Histidine Hydrochloride Monohydrate      500g     5934-29-2

093-06471   Insulin, Human, recombinant   50mg    –

097-06474   Insulin, Human, recombinant   1g   11061-68-0

120-04891   L-012    100mg   –

125-05061   Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade      5×20μg  –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

129-02541   Lysyl Endopeptidase( R)   10AU     –     –

129-04861   LY 294002   5mg      154447-36-6

130-07871   Melibiose     5g   585-99-9

028-16211   BES-So (Cell-impermeant)      1mg      –

028-17811   BES-H2O2-Ac     1mg      –

029-16361   BF-168  1mg      –

039-23511   CultureSure? Freezing Medium    100ml    –

041-18861   Dexamethasine   1g   50-02-2

042-29445   Dibasic Sodium Phosphate Hydrate 500g     10039-32-4

043-22611   Dextran 200,000 100g     9004-54-0

064-05381   Fibroblast Growth Factor (basic)(FGFb / bFGF / FGF2),

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

Human, recombinant, Animal-derived-free  50ug     106096-93-9

071-02293   gamma-Globulin, from Human Serum   5g   9007-83-4

075-03075   Gellan Gum  500g     71010-52-1

131-00405   Magnesium Sulfate    500g     10034-, 99-8

136-03032   Methyl Red   25g 493-52-7

137-06085   Molecular Sieves 4A1/16  500g     70955-01-0

138-07872   Melibiose     25g 585-99-9

145-08221   Nuclease P1 500u     54576-84-0

145-08221   Nuclease P1 500u     54576-84-0

162-09115   Polyethylene Glycol 4,000 500g     25322-68-3

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

163-03545   Potassium Chloride    500g     7447-40-7

164-21655   N/400 Potassium Polyvinyl Sulfate Solu 500mL   26837-42-3

191-01785   Trisodium Citrate Dihydrate    500g     6132-04-3

193-02041   Glycerol 2-Phosphate Disodium Salt n-Hydrate   100g     819-83-0

195-12854   Streptavidin, from Streptomyces avidinii     5mg      9013-20-1

195-16031   StemSure (R) Freezing Medium     100ml    –

196-00015   Sucrose 500g     57-50-1

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

196-08675   Sodium Dodecyl Sulfate    500g     151-21-3

197-07485   Sodium Sulfate   500g     7757-82-6

199-02825   Sodium Dihydrogenphosphate Dihydrate    500g     13472-35-0

203-17561   Trichostatin A     1mg      58880-19-6

207-00055   L(+)-Tartaric Acid     500g     87-69-4

208-08385   1mol/l Triethylammonium Hydrogencarbonate Solution   500mL   15715-58-9

223-02112   VA-044  25g 27776-21-2

225-02111   VA-044  100g     27776-21-2

165-09105   Polyethylene Glycol 2,000 500g     25322-68-3

165-17035   Polyvinylpyrrolidone K 30 500g     9003-39-8

167-09045   Polyethylene Glycol 200   500g     25322-68-3

169-09125   Polyethylene Glycol 6,000 500g     25322-68-3

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

185-01003   Rifampicin    5g   13292-46-1

186-01114   all-trans-Retinoic Acid 50mg    302-79-4

189-01001   Rifampicin    1g   13292-46-1

190-05535   Trisodium Citrate Dihydrate    500g     6132-04-3

191-01665   Sodium Chloride  500g     7647-14-5

227-01071   Valproic Acid 5g   99-66-1

231-02011   Wetting Tension Test Mixture No.52.0  50mL    –

232-01941   Wetting Tension Test Mixture No.42.0  50mL    –

233-01971   Wetting Tension Test Mixture No.45.0  50mL    –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

234-02001   Wetting Tension Test Mixture No.50.0  50mL    –

235-01931   Wetting Tension Test Mixture No.41.0  50mL    –

235-02031   Wetting Tension Test Mixture No.56.0  50mL    –

236-01961   Wetting Tension Test Mixture No.44.0  50mL    –

238-01921   Wetting Tension Test Mixture No.40.0  50mL    –

238-02021   Wetting Tension Test Mixture No.54.0  50mL    –

238-02141   Wetting Tension Test Mixture No.73.0  50mL    7732-18-5

253-00513   Y-27632 5mg      331752-47-7

257-00511   Y-27632 1mg      331752-47-7

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

290-34251   Presep-C DNPH   20EA     –

296-63801   LabAssay? Phospholipid   1300tests     –

298-64101   Fructooligosaccharides standard set     set  –

302-93561   Phos-tag (TM) Agarose    0.5mL    –

304-93521   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      10mg    –

304-93521   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      10mg    –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

631-00651   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     20mL    –

637-00653   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     100mL   –

637-00653   Cellmatrix Type I -A (Collagen, Type I, 3 mg/mL, pH 3.0)     100mL   –

638-01021   Endotoxin Standad /JPSE  10000un      –

986-10001   Anti asialo GM1 (Rabbit), (014-09801)  1mL      617-45-8

294-63601   LabAssay? NEFA 750tests –

294-65801   LabAssay? Cholesterol    1000tests     –

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

325-88521   Lipase PS Amano SD  10g –

298-65701   LabAssay? Glucose   1000tests     –

300-93523   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107      2mg      –

301-93531   Phos-tag (TM) Biotin BTL-104 10mg    –

301-99413   Phos-tagTM Biotin BTL-104 1mM Aqueous Solution[for Campaign]     0.1mL      753451-66-0

302-93522   Phos-tagTM Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution[for Campaign]      0.3mL    871839-54-2

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

295-50201   DNA Extractor? Kit   50tests  –

295-51301   Limulus ES-II Single Test Wako     25 tests –

295-51301   Limulus ES-II Single Test Wako     25 tests –

295-73401   Fructooligosaccharides Set      Set  –

304-93526   Phos-tag (TM) Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution   0.3ml    –

305-93551   Phos-tag? Mass Analytical Kit set  –

308-93541   Phos-tag (TM) Biotin BTL-105 10mg    –

308-93563   Phos-tag (TM) Agarose    3mL      –

308-97201   Phos-tag Biotin BTL-1111 1mM Aqueous Solution    0.1000mL    –

 

Wako  125-05061 Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade 现货

290-34251   Presep-C DNPH   20EA     –

290-63701   LabAssay? Triglyceride    1000tests     -2016-2-29

290-65901   LabAssay? Creatinine      500tests –

291-58601   Lab Assay ALP    900tests –

293-51601   Endotoxin Extracting Solution for LAL Test  10mL x 4     –

294-62001   DsDD cDNA Subtraction kit Wako   5tests    –

 

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光 货号15255-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光 货号15255 货号 15255 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测赖氨酸氧化酶的试剂盒。赖氨酰氧化酶是一种细胞外酶，其催化从胶原蛋白和弹性蛋白前体中的赖氨酸残基形成醛。 这些醛具有高反应性，并与其他赖氨酰氧化酶衍生的醛残基或未修饰的赖氨酸残基发生自发的化学反应。 化学反应导致胶原蛋白和弹性蛋白的交联，这对于稳定胶原纤维和成熟弹性蛋白的完整性和弹性是必需的。 生物样品中赖氨酰氧化酶的活性传统上通过使用放射性同位素标记的胶原蛋白或弹性蛋白底物的氚释放终点测定来评估。

Amplite 荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒提供灵敏的荧光检测，用于检测赖氨酰氧化酶的活性。 它利用专有的LOX底物，在HRP偶联反应中使用我们的Amplite ADHP底物释放过氧化氢。 该方法允许检测亚ng / mL赖氨酰氧化酶，并且比目前可用的测定灵敏得多。 它消除了某些生物样品中发生的干扰，可以很容易地用于检测细胞提取物或溶液中的赖氨酰氧化酶活性。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法赖氨酰氧化酶（LOX）检测试剂盒。

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适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 540nm
发射 590nm
cutoff： 570nm
推荐孔板： 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备测定反应混合物（50μL）

添加赖氨酰氧化酶标准品或测试样品（50μL）

在37℃孵育10-30分钟

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备试剂：

注意1：在硫醇如DTT，谷胱甘肽（还原型：GSH）和β-巯基乙醇存在下，Amplite™HRP底物不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在将显着降低测定动态范围。

注意2：某些洗涤剂（如Brij-35，Tween-20和NP40），NADH和NADPH也会干扰检测。

1.1 250X Amplite™HRP底物储备液：将100μLDMSO（组分D）加入到Amplite™HRP底物（组分A）的小瓶中。应及时使用原液; 任何未使用的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环。

1.2 50U / mL辣根过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

2.准备测定反应混合物：

根据说明书中的表格制备测定反应混合物并避光。

 

3.在上清液中进行赖氨酰氧化酶测定：

3.1将50μL测定反应混合物（来自步骤2）加入到赖氨酰氧化酶标准品，空白对照和测试样品（参见步骤2，表3）的每个孔中，以使总赖氨酰氧化酶测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.2在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

3.3用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

 

4.对细胞进行赖氨酰氧化酶测定：

Amplite™荧光Lysyl氧化酶检测试剂盒可用于测量细胞中活性赖氨酰氧化酶的释放。 以下是建议的说明，可根据您的特定研究需求进行修改。

4.1在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要活化细胞。 

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

4.2将50 µL赖氨酰氧化酶工作溶液添加到细胞培养基的每个孔中（来自上一步）和赖氨酰氧化酶标准品的孔中（参见表1）。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL细胞培养基和25μL测定反应混合物。

4.3在37℃下孵育反应10至30分钟，避光。

4.4使用荧光读板仪在Ex / Em = 530至570/590至600 nm（最大Ex / Em = 540/590 nm）下观察荧光增加。

 

参考文献

Biallelic HEPHL1 variants impair ferroxidase activity and cause an abnormal hair phenotype
Authors: Prashant Sharma, Marie Reichert, Yan Lu, Thomas C Markello, David R Adams, Peter J Steinbach, Brie K Fuqua, Xenia Parisi, Stephen G Kaler, Christopher D Vulpe
Journal: PLoS genetics (2019): e1008143

Lysyl oxidase assists tumor-initiating cells to enhance angiogenesis in hepatocellular carcinoma
Authors: Min Yang, Jingtao Liu, Fei Wang, Zhihua Tian, Bo Ma, Zhongwu Li, Boqing Wang, Wei Zhao
Journal: International Journal of Oncology (2019)

Lysyl oxidase blockade ameliorates anovulation in polycystic ovary syndrome
Authors: Chuyue Zhang, Jin Ma, Wangsheng Wang, Yun Sun, Kang Sun
Journal: Human Reproduction (2018)

Pentagalloyl glucose increases elastin deposition, decreases reactive oxygen species and matrix metalloproteinase activity in pulmonary fibroblasts under inflammatory conditions
Authors: Vaideesh Parasaram, Nasim Nosoudi, Aniqa Chowdhury, Naren Vyavahare
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2018)

Detrimental role of lysyl oxidase in cardiac remodeling
Authors: Elia C El Hajj, Milad C El Hajj, Van K Ninh, Jessica M Bradley, Mario A Claudino, Jason D Gardner
Journal: Journal of Molecular and Cellular Cardiology (2017)

Endothelial Antioxidant-1: a Key Mediator of Copper-dependent Wound Healing in vivo
Authors: Archita Das, Varadarajan Sudhahar, Gin-Fu Chen, Ha Won Kim, Seock-Won Youn, Lydia Finney, Stefan Vogt, Jay Yang, Junghun Kweon, Bayasgalan Surenkhuu
Journal: Scientific Reports (2016)

Inhibition of lysyl oxidase by cortisol regeneration in human amnion: Implications for rupture of fetal membranes
Authors: Chao Liu, Chunming Guo, Wangsheng Wang, Ping Zhu, Wenjiao Li, Yabing Mi, Leslie Myatt, Kang Sun
Journal: Endocrinology (2016): 4055–4065

Inhibition of lysyl oxidase by prostaglandin E2 via EP2/EP4 receptors in human amnion fibroblasts: Implications for parturition
Authors: Chao Liu, Ping Zhu, Wangsheng Wang, Wenjiao Li, Qun Shu, Zi-Jiang Chen, Leslie Myatt, Kang Sun
Journal: Molecular and cellular endocrinology (2016): 118–127

LOX Fails to Substitute for RANKL in Osteoclastogenesis
Authors: Masayuki Tsukasaki, Koki Hamada, Kazuo Okamoto, Kazuki Nagashima, Asuka Terashima, Noriko Komatsu, Stephanie J Win, Tadashi Okamura, Takeshi Nitta, Hisataka Yasuda
Journal: Journal of Bone and Mineral Research (2016)

Reversal of Vascular Calcification and Aneurysms in a Rat Model Using Dual Targeted Therapy with EDTA-and PGG-Loaded Nanoparticles
Authors: Nasim Nosoudi, Aniqa Chowdhury, Steven Siclari, Saketh Karamched, Vaideesh Parasaram, Joe Parrish, Patrick Gerard, Narendra Vyavahare
Journal: Theranostics (2016): 1975

 

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说明书
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