预涂层 96 孔微孔板

标准

标准稀释缓冲液

洗涤缓冲液

检测试剂A

检测试剂B

稀释剂 A

稀释剂 B

TMB基板

停止解决方案

封板机

37°C 培养箱

多通道和单通道移液器和无菌移液器吸头

喷瓶或自动微孔板清洗机

1.5 毫升试管

蒸馏水

吸水滤纸

100 毫升和 1 升量筒

酶标仪（波长：450 nm）

ELISA 摇床

血清：样品应收集到血清分离管中。将试管垂直放置在 4°C 或室温下长达 60 分钟，使血清凝固。以大约 1000 × g 离心 20 分钟。立即分析血清或分装并储存在 -20°C 或 -80°C。

血浆：使用肝素或 EDTA 作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 分钟内以 1000 × g 离心 15 分钟。立即测定或分装并储存在 -20°C 或 -80°C。避免溶血和高胆固醇样本。

组织匀浆：组织匀浆的制备将根据组织类型而有所不同——这只是一个例子。用冰冷的 PBS 冲洗组织以去除多余的血液。均质化前称重。在 PBS 中用冰上的组织匀浆器将组织切碎并匀浆，并对细胞悬浮液进行超声处理。将匀浆以 5000 × g 离心 5 分钟并收集上清液。立即测定或分装并储存在 -20°C。

1) 标准品：用推荐体积的标准稀释缓冲液配制标准品，制成标准溶液。然后按照协议中的说明，使用标准稀释缓冲液对标准溶液进行系列稀释。

2) 洗涤缓冲液：按照方案中的说明，用蒸馏水稀释浓缩的洗涤缓冲液。

3) 检测试剂制备：计算所需工作溶液的总体积。分别用稀释剂 A 和稀释剂 B 以 1:100 稀释检测试剂 A 和检测试剂 B。

1) 设置标准、测试样品和对照孔。

2) 将 100 µl 稀释标准品分装到标准孔中。

3) 将 100 µl 标准稀释缓冲液分装到对照（零）孔中。

4) 将 100 µl 稀释样品分装到样品孔中。在 37 °C 下孵育 1 小时。

5) 将 100 µl 检测试剂 A 分装到每个孔中。在 37 °C 下孵育 1 小时。

6) 洗涤 3 次。

7) 将 100 µl 检测试剂 B 分装到每个孔中。在 37°C 下孵育 90 分钟。

8)洗涤5次。

9) 将 90 µl TMB Substrate 分装到每个孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分钟。

10) 分装 50 µl 终止液。

11) 在 450 nm 处测量 OD。