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Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*
货号 | 36361 | 存储条件 | f/l |
规格 | 200 Tests | ||
Ex (nm) | 652 | Em (nm) | |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
简要概述
Amplite 比色法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂盒,钙对所有生物体都是必不可少的,特别是在细胞生理学中,钙离子Ca2+进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素,它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使,也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张,神经冲动传递,肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围(9至10.5mg / dL)内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。 Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理解决方案中检测钙的简单方法。该试剂盒使用我们的Calcium Blue 作为显色钙指示剂。其吸光度随钙结合而变化。 Calcium Blue 在中性pH范围内紧密结合钙,产生钙蓝色 – 钙复合物,在~650 nm处具有强烈的吸收。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供Amplite 比色法钙离子定量试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
准备测试样品和钙标准溶液(50μL)
添加Calcium Blue 试剂(50μL)
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度
溶液配制
1.储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
钙标准溶液(3 mM):
将10μL标准钙(300mM)(组分C)加入到990μL稀释缓冲液(组分B)中以得到钙标准溶液(3mM)并充分混合。
2.钙标准溶液配制
操作步骤
表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。
CS =钙标准(CS1-CS7); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
CS1 | CS1 | … | … |
CS2 | CS2 | … | … |
CS3 | CS3 | ||
CS4 | CS4 | ||
CS5 | CS5 | ||
CS6 | CS6 | ||
CS7 | CS7 |
表2.每个孔的试剂组成
钙标准 | 空白对照 | 测试样本 |
连续稀释:50μL | 稀释缓冲液(化合物B):50μL | 50 µL |
钙测定
将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中,一式两份。
向钙标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue (组分A),使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
在室温下孵育反应5至10分钟,避光。
用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。
血清或尿液样本的分析方案
表3.每个孔的试剂组成
钙标准 | 空白对照 | 血清或尿液 |
连续稀释液:10μL | 稀释缓冲液(化合物B):10μL | 10 µL |
钙测定
1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。
2.向钙标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™(组分A),使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。
3.在室温下孵育反应5至10分钟,避光。
4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。
数据分析
从空白标准孔获得的读数(吸光度)用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算钙样品。
图1.使用Amplite 比色钙定量试剂盒在96孔黑色壁/透明底板上测量钙剂量响应。 在5分钟的孵育时间内检测到低至~2.5μM的Ca2+(n = 3) |