Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒 适合于酶标仪

简要概述

线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低中等水平的超氧化物的产生对于许多重要细胞过程的适当调节至关重要，这些过程包括基因表达，信号转导和肌肉对耐力运动训练的适应性。不受控制的线粒体超氧化物的产生会触发细胞氧化损伤，从而导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂来定量活细胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活细胞渗透性，可以快速，选择性地靶向线粒体中的超氧化物。与超氧化物反应时会生成红色荧光。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的线粒体超氧化物。该试剂盒可用于荧光酶标仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞

2. 用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3. 添加MitoROS 580工作溶液

4. 在37°C下将细胞染色30-60分钟

5. 检测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处的荧光增加（底部读取模式）或使用配备TRITC滤光片的荧光显微镜

溶液配制

储备溶液配制

1. MitoROS 580储备溶液（500X）：将50 µL DMSO（组分C）添加到MitoROS 580（组分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580储备液，避光。 注意：25 µL 500X MitoROS 580储备溶液足以用于1个板。 为了存放，请将管子紧紧密封。

工作溶液配制

将25μL的500X MitoROS 580储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合以制成MitoROS 580工作溶液。 注意：此MitoROS 580工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

实验步骤

1. 在所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。

2. 为了诱导超氧化物，将细胞板在37°C下孵育所需的时间，避光。 注意：我们在37°C下用50 µM（AMA）处理HeLa细胞30分钟，以诱导超氧化物。 有关详细信息，请参见图1。

3. 将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的MitoROS 580工作溶液添加到细胞板中。

4. 将细胞在37°C下孵育30至60分钟。

5. 使用荧光酶标仪（Ext / Em = 540/590 nm（Cutoff = 570 m））检测荧光强度，或者使用带有TRITC滤光片的荧光显微镜观察细胞。

图示

图1.使用Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒（Cat＃22971）在HeLa细胞中测量超氧化物的荧光图像。 将100,000个细胞/孔/ 100 µL的HeLa细胞在96孔黑色板中接种过夜。 AMA处理：将细胞在37°C下用50 µM（AMA）处理30分钟，然后与MitoROS 580孵育1小时。 未经处理的对照：HeLa细胞与MitoROS 580在37°C下孵育1小时，未经AMA处理。 使用带有TRITC滤光片的荧光显微镜检测荧光信号。

图2.使用Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒（Cat＃22971）检测HeLa细胞中的细胞内超氧化物。 将100,000个细胞/孔/ 100 µL的HeLa细胞在96孔黑色板中接种过夜。 将细胞与50 µM绿脓素（Pyo）孵