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- 产品参数
- 产品详情
Amplite 荧光法β-酮体检测试剂盒
| 货号 | 13831 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 200 Tests | ||
| Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 585 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 荧光法β-酮体检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测羟基的试剂盒。通常这两种主要的酮体在禁食期间（低食量摄入）和长时间运动期间少量存在于血液中。在患有糖尿病，酒精或水杨酸盐中毒，激素缺乏症，儿童低血糖症和其他急性疾病状态的患者中，在血液中发现大量酮体。酮体在血液中的过量生成和积聚（酮病）可导致病理性代谢性酸中毒（酮症酸中毒）。在极端情况下，酮症酸中毒可能是致命的。量化血液中主要酮体β-HB（约75％）的血酮测试方法已用于诊断和监测酮症酸中毒的治疗。 该测定基于β-HB的酶偶联反应，其中产物NADH可以通过荧光NADH传感器特别监测。荧光信号可以通过具有在570nm至610nm的波长处的OD比率的吸光度酶标仪来测量。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法β-酮体检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备β-HB工作溶液（50 µL）
2.添加β-HB标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加
溶液制备
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H2O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。
2.β-HB标准溶液（100 mM）：
将1 mL H2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液（组分D）中，制成100 mMβ-HB标准溶液。
2.标准溶液
β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液，以生成1000 µMβ-HB标准溶液（HB7）。取1000 µMβ-HB标准溶液（HB7），并在PBS中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的β-HB标准溶液（HB6-HB1）。 注意：稀释的β-HB标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
3.工作溶液
3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。
3.2 将50 µL NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成β-HB工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此β-HB工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。
样品操作及实验分析
表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准（HB1-HB7，1至1000 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| HB1 | HB1 | … | … |
| HB2 | HB2 | … | … |
| HB3 | HB3 | ||
| HB4 | HB4 | ||
| HB5 | HB5 | ||
| HB6 | HB6 | ||
| HB7 | HB7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| HB1-HB7 | 50ul | 连续稀释（1至1000 µM） |
| BL | 50ul | 1X PBS缓冲液 |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和表2提供的布局，将β-HB标准品（HB），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。
2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。
4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增
