简要概述

Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力的工具。 Cell Meter 比色法MTT细胞增殖检测试剂盒使用MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物）定量活细胞的数量。水溶性MTT在代谢活性细胞中产生水不溶性紫色甲瓒。产生的甲瓒的数量与活细胞的数量成正比。在560 nm附近测得吸光度增加。与其他需要繁琐的增溶步骤来溶解不溶于水的甲瓒产物的其他商业MTT测定法不同，Cell Meter 比色MTT细胞增殖试剂盒只需极少的人工操作。我们专有的配方消除了费时的增溶步骤。它是确定细胞增殖和细胞毒性测定中活细胞数量的强大的MTT试验。检测灵敏度比传统的MTT分析高10倍。

产品说明书

样品分析方案

概述

在96孔板中制备细胞（100 µL /孔）
添加MTT工作溶液（140 µL /孔）
在37°C下孵育2-4小时
读取560 nm处的吸光度

注：使用前，请在室温下解冻所有试剂盒组分。

工作溶液制备：

通过将4 mL MTT试剂A（组分A）与10 mL MTT试剂B（组分B）（2：5，MTT试剂A：B的体积比）混合，制备所需的MTT工作溶液量，混匀。

注意：14 mL MTT工作溶液足以在96孔板上进行100次测试。实验前准备足够的MTT工作溶液，并及时使用。

操作步骤

1.在具有透明底的组织培养孔板中，培养1000至40,000个细胞/孔。
2.将测试化合物添加到细胞中，并在37°C，5％CO₂培养箱中孵育所需的时间（例如24、48或96小时）。3.对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的测试化合物。对于96孔板，建议的总体积为100 µL，对于384孔板，建议的总体积为25 µL。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定增殖或诱导细胞毒性细胞密度。对于增殖测定，使用较少的细胞；对于细胞毒性测定，请使用更多的细胞作为开始。
4.向每个孔中加入140 µL /孔（96孔板）或35 µL /孔（384孔板）。
5.在37°C下孵育平板2-4小时，避光。
注意：根据不同的细胞类型和使用的细胞浓度，孵育时间可能从2小时到过夜。优化每个实验的孵育时间。
用吸光度板读数器在OD = 562 nm处检测吸光度。

图示

图1.用Cell Meter 比色法MTT细胞增殖试剂盒确定细胞数。将0至40,000个细胞/孔/ 100 µL的HeLa细胞添加到透明的底部96孔板中过夜。使用SpectraMax读数器（Molecular Devices）在560nm处检测吸光度。