线粒体膜电位荧光探针JC-1

简要概述

        线粒体膜电位荧光探针JC-1是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂，JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体，并且随着线粒体膜电位增加（超过约80-100mV的值）可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形式导致发射光从530nm（即JC-1单体形式的发射）转变为590nm（即J-聚集形式的发射）。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-1的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的滤波器可以检测两种颜色，可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。使用JC-1的主要优点是，它可以从绿色到橙色荧光发射转移，它既可以定性，又可以在FL1和FL2通道中检测到纯荧光强度又可以定量。除了广泛用于流式细胞仪外，JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光酶标仪平台中使用它的方案，尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些细胞系中具有优于JC-1的性能。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的线粒体膜电位荧光探针。

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产品说明书

JC-1样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞

添加JC-1工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）在室温或37℃孵育1小时

移除JC-1工作溶液

读取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光强度

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体实验进行调整修改。

1.准备JC-1工作溶液：

1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应随用随配及时使用或等分配制，应将使用剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备1X JC-1工作溶液：在实验当天，将JC-1固体溶解在DMSO中或将等分试样的JC-1储备溶液解冻至室温。在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或其他缓冲液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。

注意：JC-1不溶于水，因此它会在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到微孔板之前对其进行过滤。

2.用荧光酶标仪进行JC-1检测：

2.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔板的JC-1工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-1加载在37℃，5％CO₂培养箱中培养15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度，每个实验的孵育时间需要根据相应实验进行控制。

2.4从平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或其他缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔HHBS板加回到细胞板中。

2.5监测Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化以进行比率分析。

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定：

3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×10⁵个细胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重悬细胞（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C下避光孵育10至30分钟。

3.5用HHBS或其他缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×10⁵个细胞。

3.6用荧光显微镜（使用FITC和TRITC滤光片）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）观察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化。