2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒

简要概述

2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖的试剂盒，葡萄糖代谢是将葡萄糖转化为能量的过程，是大多数生物体中能量供应的主要来源。 2-NBDG ，一种荧光标记的葡萄糖示踪剂，已被证明可有效监测葡萄糖转运在细胞中，2-NBDG通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中。。与其他葡萄糖示踪剂（例如2-DG或FDG）相比，2-NBDG允许在单细胞水平上具有高时间和空间分辨率的2-NBDG的原位测量。 AAT Bioquest的Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒提供灵敏的非放射性分析，用于测量培养细胞中的葡萄糖摄取。在该试剂盒中，分析缓冲液I用于增强细胞中2-NBDG的摄取和保留，而分析缓冲液II可以改善细胞中2-NBDG的信号背景比。可以通过荧光显微镜或具有FITC滤光器组的流式细胞仪监测荧光信号。 Cell Meter 2-NBDG葡萄糖摄取分析试剂盒是监测葡萄糖转运蛋白的工具。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的2-NBDG 葡萄糖摄取检测试剂盒。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用您的测试化合物准备细胞
2.加入2-NBDG染色溶液
3.将细胞在37ºC孵育20分钟
4.去除2-NBDG染色溶液
5.用测定缓冲液I洗涤细胞
6.使用荧光显微镜或具有FITC滤波器/通道的流式细胞仪分析细胞

工作溶液配制

        将5μL的2-NBDG（10mg / mL）（组分A）加入1.5mL的测定缓冲液I（组分B）中并充分混合以制备2-NBDG染色溶液。 避光。 注意：该2-NBDG染色溶液在室温下稳定1小时。 由于染色条件可能根据不同的细胞类型而变化，因此建议确定每个特定实验的组分A的浓度。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.将测试化合物加入细胞中并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育所需的一段时间（例如24,48或96小时）。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相同量的化合物缓冲液。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定细胞密度和孵育时间。我们将CHO-K1细胞与20mM葡萄糖一起孵育用于葡萄糖竞争测定，并将100μMPhloretin用于GLUT抑制测定。

2.在处理结束时，在实验前将制动器以800rpm离心5分钟。

3.在不干扰细胞的情况下吸出上清液。

4.加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的2-NBDG染色溶液。注意：需要确定每个细胞系和每个特定实验的孵育时间。我们将CHO-K1细胞在37℃下与100μM2-NBDG（~34μg/ mL）孵育20分钟以显示足够的葡萄糖摄取。

5.在孵育结束时，将板以800rpm离心5分钟。

6.去除2-NBDG染色溶液，不干扰细胞。

7.对于荧光显微镜：用测定缓冲液I（组分B）洗涤细胞一次。将细胞保持在100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的测定缓冲液II（组分C）中。使用带有FITC过滤器的荧光显微镜监测荧光信号。

8.对于流式细胞仪：如果需要，使用EDTA分离细胞，并在100μL/样品分析缓冲液I（组分B）中重悬细胞。使用带有FITC通道的流式细胞仪监测荧光信号。

数据分析