MitoLite 线粒体绿色荧光探针

简要概述

        MitoLite 线粒体绿色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的用于染色线粒体的荧光探针，MitoLite Green FM与MitoTracker Green FM（M7514，ThermoFisher）是同一分子。它是绿色荧光的线粒体染色剂。与其他MitoLite探针不同，MitoLite Green FM似乎定位于线粒体，取决于线粒体膜电位的情况要少得多。该染料会污染活细胞，但醛固定后不能很好地保留。它是少数可以染色死细胞线粒体的线粒体探针之一。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的MitoLite 线粒体绿色荧光探针。

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备1 mM MitoLite Green FM储备溶液
2.准备20-200 nM MitoLite Green FM染色液
3.从细胞中去除生长培养基
4.向细胞添加MitoLite Green FM染色液
5.在37°C孵育30分钟
6.洗涤细胞并用1x Hanks和20mM Hepes Buffer（HH缓冲液）代替
7.使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
MitoLite Green FM储备溶液：
将一小瓶MitoLite Green FM（50 ug）溶于74 uL优质无水二甲基亚砜（DMSO）中，制成1 mM储备液。 注意：将储备溶液保持在≤–15°C的温度下冷冻并避光。

2.工作溶液配制

MitoLite Green FM染色液：
在HH缓冲液中稀释1 mM MitoLite Green FM储备溶液至 终工作浓度。 工作浓度可以在20–200 nM的范围内。

样品示例及操作

1.染色贴壁细胞：

1.1生长细胞以达到所需的融合度。

1.2从细胞中去除生长培养基。

1.3向每个孔中添加MitoLite Green FM染色溶液。

1.4在37°C下孵育30分钟。

1.5洗涤细胞，并用1x Hanks和20mM Hepes Buffer（HH缓冲液）代替。

1.6使用带有FITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞。 注意：染色方案对Hela细胞系有益，可能需要针对特定细胞类型进行优化。
 
2.染色悬浮细胞：

2.1离心细胞至沉淀并吸出上清液。

2.2在MitoLite Green FM染色溶液中轻轻重悬细胞。

2.3在37°C下孵育30分钟。

2.4离心细胞，除去上清液，然后将细胞重悬在新鲜的HH缓冲液中。

2.5可以通过流式细胞仪（530/30 nm滤光片-FITC通道）或荧光显微镜（FITC滤光片组）分析细胞。
 

图1 使用带有FITC滤光片组（绿色）的荧光显微镜，用MitoLite Green FM染色的HeLa细胞的荧光图像。 活细胞与溶酶体染料LysoBrite Red（Cat＃22645，红色）和细胞核染料Nuclear Violet LCS1（Cat＃17543，蓝色）共同染色。