逆转录酶(AMV)使用说明

逆转录酶(AMV)使用说明

反转录酶(reverse transcriptase,也可写成逆转录酶) 又称为依赖RNA 的DNA 聚合酶。1970 年Temin 等在致癌RNA 病毒中发现了一种特殊的DNA 聚合酶,该酶以RNA 为模板,以dNTP 为底物,tRNA( 主要是色氨酸tRNA) 为引物,在tRNA 3'-OH 末端上,根据碱基配对的原则,按5'-3'方向合成一条与RNA 模板互补的DNA 单链,这条DNA 单链叫做互补DNA (complementary DNA,CDNA)。

反转录酶(Reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。

AMV是一种逆转录酶的名称。amv逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒,其方法由houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157kd的αβ全。amv逆转录酶经高度纯化,*无核酸酶污染。amv逆转录酶可用于cdna合成,也可用于rnadna的双脱氧测序。amv逆转录酶以总rnd或polya+rnd为模板,具有以rna为模板的dna聚合酶活性,dna为模板的dna聚合酶活性和rnaseh酶活性,

AMV逆转录酶

适反应温度在42-55℃,高可达60℃,如果使用焦磷酸钠,适温度为37-41℃。rtt反应缓冲液根据不同用途可以作为5x或10x反应液使用,同时可抑制rnaseh酶活性。按照标准使用方法可以得到长至10-12kbcdna。rt007amv逆转录酶比普通amv逆转录酶和mmlv逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的cdna。

 

基本资料

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反应温度:42-60℃产物长度:10-12kb

来源:禽畜源,全酶

反应效率:5u/reaction

rnaseh活性:弱,被抑制

特点

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1.高灵敏度2、高得率

3.高达60℃的反应温度可有效打开rna二级结构

4.可合成长至10-12kb的cdna

5.rt反应液可适用不同用途

 

逆转录酶(AMV)使用方法

solarbio逆转录酶

货号:RT1060
规格:200U/500U/1000U
保存:-20℃保存,避免反复冻融,保质期为2年。
产品内容

 

产品简介:
逆转录酶(AMV)从AvianMyeloblastosisVirus分离出来,经过高度纯化,不含核酸酶。可用于合成一链cDNA、制作cDNA探针、RNA转录、测序和RNA的逆转录反应。

逆转录酶(AMV)一个活性单位U定义为:在37℃,10min条件下,使1nmol的脱氧核糖核酸掺入酸性沉淀物质所需的酶量。

使用说明:
合成一链cDNA的步骤
以下试剂客户自己提供
dNTPs(10mM)

引物(OligodT(18)或随机引物或特异性引物

无核酸酶双蒸水
RNA模板
RNase抑制剂

RT反应(20μl体系):
1.使用前每个组份轻轻混匀,然后2000rpm离心20s;
2.取灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管,依次加入

2~5μgRNAXμl
引物*1μl

引物*:OligodT18(10μM)或随机引物(50ng/μl)或特异性引物(2μM)】
dNTPs(10mM)1μl
补加无核酸酶的双蒸水至总体积15.5μl

3. 65度保温 5min 然后冰浴5min;

4.往步骤3的pcr管中依次加入下列组份

RNase 抑制剂(40u/ul)    0.5ul

10*AMV reaction buffer   2ul

DTT  (200mm)  1ul

逆转录酶(AMV)     1UL

5.轻轻混匀后,然后2000rpm离心20s

6. 现在42度保温1hr ,然后70度保温15min,

7.上述产物可立即进行下一步的pcr反应或-20度保存。

 

 

AMV 逆转录酶

英文名称: AMV Reverse Transcriptase 总访问: 213
国产/进口: 进口 半年访问: 125
产地/品牌: 美国 Life Sciences Advanced Technologie 产品类别: 其他生物试剂
规       格: 50,000 U
货       号: AMV 007

 

LifeSci AMV 逆转录酶
一、公司介绍
Life Sciences Advanced Technologies 成立于1975年,是世界上一家生产AMV反转录酶的厂商。LSAT的AMV反转录酶因为其高灵敏度和有竞争力的价格体系,已经被许多世界有名的测序公司用于他们的反转录试剂盒产品。
Life Sciences Advanced Technologies在分子诊断试剂和酶类的开发研究上处于世界*地位。
Life Sciences Advanced Technologies决心在两个方面帮助人类疾病的诊断:提供应用基因测序诊断慢性复杂疾病的反转录试剂盒里的AMV反转录酶和传染病现场诊断的NASBA试剂盒。
 
二、产品推荐
1. RTHSA34
产品描述:
作为CDNA文库构建试剂盒的配套产品用于基因测序,浓度为35,000 U/ml。该款反转录酶已经被位居世界前三的的一家测序公司用于他们的反转录试剂盒,可实现17.5 U / cDNA逆转录和低于1 ng的RNA序列转录。
产品优势:
•仅需要0.5ul的酶对于每个cDNA文库试剂盒,有效控制反应体系,用于后续的扩增等
每个cDNA文库试剂盒只需要17.5U, 相对于其他使用200单位的逆转录酶,可以节省50%以上的成本。
• amv 效率是Invitrogen superscriptase (一款MMLV 反转录酶)的11倍,是NEB和Promega 同款AMV的4倍。
2.AMV 007
产品描述:
主要应用于RT-PCR反应的AMV反转录酶,已广泛应用于许多生物技术实验室,浓度是20,000 U/ml。终端用户使用2.5 U 就能完成一个RT-PCR反应。
产品优势:
•用2.5U就能完成一个反应,有些中国用户,将其20000单位/ml的产品稀释到5000 U /ml,这样客户使用0.5 ul 就能完成一个RT-PCR反应。
•一个RT – pcr反应只需要2.5 U,相比NEB和Promega 的AMV RT,可以节省75%的成本。
3. BRT121
产品描述:
作为一种低无机磷酸盐的反转录酶,适用于进行下游克隆过程中的CDNA合成,因为一般情况下较高的无机磷酸盐浓度对磷酸转移反应有抑制作用。常用的可选浓度为5,000 Units/mL。