概述

WB试剂盒具有使用方便、操作简单、检测灵敏度高、背景低和系统稳定性强等多种优点。本试剂盒适用于宿主为小鼠的一抗实验系统。

特点

• 1. 操作简便：无需太多准备，拿到试剂盒即能开展试验。 2. 重现性好：实验结果重复性高。 3. 适用于HRP显色系统。

使用说明

1. 制样：根据上样量和样本浓度计算样本体积，加入适量的上样缓冲液（5×），放入沸水中煮15分钟。 2. 制胶：根据目的蛋白分子量不同配制不同浓度的分离胶（下层胶），以下仅供参考。分离胶凝固后再配制5%的浓缩胶（上层胶）。 分离胶浓度 蛋白相对分子量 15% <10 kDa 12% 10-30 kDa 8% 30-70 kDa 6% >70 kDa 3. 电泳：加入电泳缓冲液，起始电压80V，待考马斯亮蓝蓝色电泳至分离胶约 30min，将电压调至120V待考马斯亮蓝蓝色到达分离胶底部。 4. 转膜：切除浓缩胶，将分离胶放置于转膜缓冲液中，事先准备好与胶大小相同的印迹膜和滤纸。印迹膜如果是PVDF膜需要在甲醇中活化2分钟，再转入转膜缓冲液中浸泡10分钟。滤纸直接放在转膜缓冲液中浸泡10分钟。一般湿转放置顺序：转膜夹黑色面(负极)-海绵垫-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-海绵垫-红色面(正极)；半干转：负极-滤纸-胶-印迹膜-滤纸-正极。以6╳8cm的膜为例，湿转恒流一般设置150mA每张膜，可根据分子量的大小调整转膜的时间，分子量大的转膜时间长一些，反之，时间短一些。转膜需在冰浴中进行。 5. 封闭：将膜从转膜仪中取出，放入封闭液中，37℃封闭1-2小时。 6. 洗涤：弃去封闭液，加入10ml的TBST，置摇床上洗涤10分钟。 7. 孵育一抗：弃去洗涤液，加入一抗稀释液，摇床上4℃孵育过夜或37℃孵育1-2小时。 8. 洗涤：次日，弃去一抗稀释液，加入10ml的TBST，置摇床上洗涤10分钟，重复2次。 9. 孵育二抗：弃去洗涤液，加入二抗稀释液，摇床上室温或37℃孵育40-60分钟。 10. 洗涤：弃去二抗稀释液，加入10ml的TBST，置摇床上洗涤10分钟，重复2次。 11. ECL曝光：弃去洗涤液，每1cm2膜加入0.05 ml的ECL工作液，避光2分钟，直接在机器中观察，或者暗房中经显影液、定影液曝光显色。

组份

上样缓冲液（5×） 脱脂奶粉 洗涤液原液（20×） 吐温-20 Marker (10,17,28,36,55,72,95,130,250KD) HRP标记的二抗（抗小鼠） ECL发光液A ECL发光液B