膜电位荧光探针DiSBAC2(3) 货号21414-AAT Bioquest荧光染料

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膜电位荧光探针DiSBAC2(3)  货号21414
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
25mg
品牌 :
AAT Bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

膜电位荧光探针DiSBAC2(3)

膜电位荧光探针DiSBAC2(3)  货号21414

               

简要概述

      DiSBAC2(3)是一种敏感的慢响应膜电位探针,广泛用于测量许多生物系统的膜电位。通常,慢响应探针在跨膜分布中表现出电位依赖性变化,并伴有荧光变化。它们的光学响应幅度远远大于快速响应探针(通常每mV荧光变化1%)。慢响应探针,包括阳离子碳花青素,罗丹明和阴离子恶臭酚,适用于检测由呼吸活动,离子通道通透性, 结合和其他因素引起的非兴奋性细胞的平均膜电位变化。

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产品说明书

操作步骤

1.准备细胞:

1.1对于贴壁细胞:将细胞在生长培养基中以40,000至80,000个细胞/孔/ 100 µL(对于96孔板)过夜,以10,000至20,000个细胞/孔/ 25 µL(对于384孔板)过夜。

1.2对于非贴壁细胞:从培养基中离心细胞,然后将细胞沉淀以125,000至250,000个细胞/孔/ 100 µL 的浓度悬浮在等量的HHBS和MP染料上样溶液中(请参阅下面的步骤2.2),持续96-以及聚赖氨酸d板或30,000至60,000个细胞/孔/25μL的用于384孔聚赖氨酸d板。实验前将板以800 rpm的速度离心2分钟,并关闭制动器。

 

2.准备DiSBAC2(3)染料加载溶液

2.1准备10至30 mM的DiSBAC2(3)的高品质无水DMSO 储备溶液。储备溶液应及时使用;任何剩余的溶液都需要等分并在< -20 o C 冷冻。

注意:避免重复的冻融循环,并避光。

2.2准备一个2X 的DiSBAC 2(3)染料加载 溶液: 在实验的当天,无论是溶解的DiSBAC 2(3) 固体在DMSO或解冻的等分试样的DiSBAC 2(3)的储备溶液至室温。用0.04%的制备的在Hanks(HHBS)20至40μM和20mM Hepes缓冲液,pH为7的2X工作溶液到0.08%的Pluronic ® F-127(目录#20053)和2mM 锥虫红加 (目录#2456),将它们混合均匀。该工作溶液在室温下至少稳定2小时。

 

3.运行膜电位测定:

3.1将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的DiSBAC2(3)染料加载溶液(来自步骤2.2)添加到细胞板中。

注1:如果您的筛选化合物干扰了g 培养基和血清因子,则在添加DiSBAC2(3)上染 溶液之前,用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者,细胞可以在无血清条件下生长。

注2:上色后请勿清洗细胞。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意:在某些情况下,在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.3使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 540/590 nm(目录号21414)的荧光强度进行膜电位测定。

注意:在实验之前进行信号测试非常重要。不同的仪器具有各自的强度范围。将信号测试强度调整为仪器强度计数的10%到15%的水平。例如,FLIPR-384的荧光强度计数为65,000,因此应调整仪器设置,使其信号测试强度约为7,000至10,000。