DSG CAS 79642-50-5 货号4520-AAT Bioquest荧光染料

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  • 产品参数
  • 产品详情

DSG CAS 79642-50-5 货号4520
级别 :
超纯、高纯
含量 :
95%
产品规格 :
25mg
CAS :
79642-50-5
品牌 :
aat bioquest
用途范围 :
AAT Bioquest生产的荧光染料
特色服务 :
包邮

产品详情

Product details

DSG CAS 79642-50-5

DSG CAS 79642-50-5 货号4520

简要概述

        DSG 是美国AAT Bioquest生产的荧光探针,DSG是二琥珀酰亚胺基戊二酸酯,一种简单的同双功能交联剂,基于5-(7.7埃)间隔臂两端的胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯基。它用于交联具有胺部分的分子。DSG是细胞膜可渗透的。它用于ChIP分析以确定DNA-蛋白质结合相互作用。DSG交联剂必须溶解在有机溶剂(如DMSO或DMF)中,然后加入到水交联反应中。我们的内部研究表明,DSG交联的肽结合物具有更好的稳定性,并倾向于产生高特异性的抗体。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的DSG 

产品说明书

样品实验方案

1.制备含胺蛋白质的缀合缓冲液,蛋白质-NH 2 (缓冲液A):磷酸盐缓冲盐水(PBS,pH 7.2)或pH值为7.2至8.0的其他无胺缓冲液可用于此。

注意:避免在缀合过程中含有伯胺(如Tris或甘氨酸)和巯基的缓冲液,因为它们会与预期的反应竞争。如有必要,将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

2.制备含巯基蛋白质的缀合缓冲液,蛋白质-SH(缓冲液B):pH为6.5-7.5的不含巯基的缓冲液可用于此。

注1:在缀合过程中避免使用含有巯基的缓冲液,因为它们会与预期的反应竞争。如有必要,将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。

注2:加入1-5mM EDTA有助于螯合二价金属,从而减少含巯基蛋白质中的二硫化物形成。

3.准备脱盐柱,将改性蛋白与过量交联剂和反应副产物分离。

4.在其缀合缓冲液A和缓冲液B中制备含胺蛋白质(蛋白质-NH2)和含巯基蛋白质(蛋白质-SH)溶液。

5.制备蛋白质1-NH 2 -SMCC(或SMCC Plus)缀合物:将适量的SMCC(或SMCC Plus)加入到缓冲液A中的含胺蛋白质溶液中。蛋白质-NH 2的浓度 决定SMCC(或SMCC Plus)摩尔过量使用。SMCC(或SMCC Plus)摩尔过量的建议体积如下,但比例必须使用目标蛋白质通过实验确定:

  • 蛋白质样品<1 mg>

  • 1-4 mg / mL的蛋白质样品使用20倍摩尔过量。

  • 5-10 mg / mL的蛋白质样品使用5至10倍摩尔过量。

6.将上述反应混合物在室温下孵育30-60分钟或在4℃孵育2-4小时。

注1:为了在完成前停止缀合反应,加入含有还原半胱氨酸的缓冲液,其浓度比Protein-SH的巯基浓度高几倍。

注2:可以通过电泳分离和随后的蛋白质染色来估计缀合效率。

7.使用用共轭缓冲液A平衡的脱盐柱除去多余的SMCC(或SMCC Plus)。

8.将含硫醇(蛋白-SH)和脱盐的含胺蛋白(蛋白-NH 2)SMCC(或SMCC Plus)缀合物混合并混合,摩尔比对应于 终缀合物所需的摩尔比,并与亲属一致两种蛋白质上存在的巯基和活化胺的数量。

注意:与马来酰亚胺部分反应的分子必须具有游离(还原的)巯基。对于蛋白质,在室温下使用5mM TCEP还原二硫键30分钟,然后通过合适的脱盐柱两次。请注意,蛋白质(例如抗体)可能会通过完全还原其二硫键而失活。可以用2-巯基乙胺·HCl(2-MEA)实现IgG中铰链区二硫键的选择性还原。可以使用SATA或Traut’s Reagent将巯基化合物添加到分子中,后者可以修饰伯胺。