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Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒 增强灵敏度
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简要概述
Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶的试剂盒,超氧化物歧化酶(SOD)是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病,缺血再灌注损伤,动脉粥样硬化和衰老相关。 SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。事实上,缺乏SOD1的小鼠会发展出多种病理,包括肝细胞癌,加速年龄相关的肌肉质量减少,早期白内障发病率和寿命缩短。 SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。 Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒为测量SOD活性提供了一种快速而灵敏的方法。众所周知,NADH和SOD酶系统产生超氧自由基,将WST-1还原成蓝色甲dye染料,其在440nm附近具有吸收。 SOD通过催化超氧阴离子歧化成过氧化氢和分子氧来抑制WST-1的还原,从而降低了甲product产物的440nm吸收。 440nm吸收的减少与SOD活性成比例。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒。
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备并添加SOD标准品或测试样品(50μL)
2.添加SOD工作溶液1(25μL)
3.添加SOD工作溶液2(25μL)
4.在室温下孵育30-60分钟
5.监测440nm处的吸光度
溶液配制
1.储备溶液配制
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1SOD标准溶液(10 kU / mL):
将50μL测定缓冲液(组分E)加入到SOD标准品(组分D)的小瓶中以制备10kU / mL标准溶液。
2.标准溶液配制
将10μL10kU / mL SOD标准溶液加入990μL分析缓冲液(组分E)中,得到100 U / mL SOD标准溶液(SD1)。 取100 U / mL SOD标准溶液(SD1),在分析缓冲液(组分E)中进行1:10,得到10U / mL SOD标准溶液(SD2)。 取10 U / mL标准溶液(SD2)并进行1:3连续稀释,以获得使用分析缓冲液(组分E)的连续稀释的SOD标准品(SD3-SD7)。
3.工作溶液配制
3.1 SOD工作溶液方案1:
将2.5mL测定缓冲液(组分E)加入WST-1瓶(组分A)中并充分混合。 然后将50μL50XSOD酶溶液(组分B)加入该瓶中以制备SOD工作溶液1.注意:该SOD工作溶液1应在实验前制备,并避光。 SOD工作溶液1不稳定,应丢弃未使用的部分。
3.2 SOD工作溶液方案2:
将50μL测定缓冲液(组分E)加入到NADH小瓶(组分C)中并充分混合。 然后,将50μL的NADH储备溶液转移到2.5mL测定缓冲液(组分E)中以制备SOD工作溶液2。
操作步骤
表1.透明底96孔微孔板中SOD标准品和测试样品的布局。
SD = SOD标准品(SD1 – SD7,100至0.041 U / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。
BL | BL | TS | TS |
SD1 | SD1 | … | … |
SD2 | SD2 | … | … |
SD3 | SD3 | ||
SD4 | SD4 | ||
SD5 | SD5 | ||
SD6 | SD6 | ||
SD7 | SD7 |
表2.每个孔的试剂组成
孔 | 容积 | 试剂 |
SD1-SD7 | 50ul | 连续稀释(100至0.041 U / mL) |
BL | 50ul | 分析缓冲液(组分E) |
TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局制备SOD标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向SOD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液1,使总测定体积为75μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液1,总体积为37.5μL/孔。
3.向SOD标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入25μLSOD工作溶液2,使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入12.5μLSOD工作溶液2,总体积为50μL/孔。
4.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。
5.用吸光度板读数器在440nm处监测吸光度。
数据分析
将从空白标准孔获得的读数(抑制%)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算SOD样本。
图1.使用Amplite 比色超氧化物歧化酶测定试剂盒在96孔白壁/透明底板中用Spectrum Max酶标仪(Molecular Devices)测量OD剂量响应。