Amplite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对酶标仪进行了优化*

简要概述

Amplite 荧光总核酸定量试剂盒是以简单、准确的方式检测核酸总量，包括双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA) 和 RNA。 该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green All 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green All 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于测量样品中可能含有 dsDNA、ssDNA、RNA 和长寡核苷酸的核酸总量。 Helixyte Green All 试剂不加选择地与 dsDNA、ssDNA 和 RNA 结合。 Amplite 荧光总核酸定量试剂盒针对使用荧光酶标仪测量核酸总量进行了优化。

适用仪器

产品说明书

实验方案

概述

1.添加 100 µL 核酸标准品或测试样品
2.添加 100 µL Helixyte Green ALL溶液
3.在室温下孵育 5-10 分钟
4.检测Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注：以下方案是使用 Helixyte Green All 定量总核酸含量的示例。 打开前让所有成分升温至室温。 没有关于 Helixyte Green All（总核酸染色剂）的致突变性或毒性的数据。 由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。 应特别小心处理 DMSO 原液，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

溶液制备
核酸标准品
将 10 uL 100 ug/mL 核酸标准溶液（组分 C）加入 190 uL 检测缓冲液（组分 B）中，得到 5 ug/mL 标准溶液，然后进行 1:3 稀释，得到连续稀释的核酸标准溶液（ NS1-NS7)。请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

Helixyte Green ALL工作溶液
将 100 μL Helixyte Green All（组分 A）加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，制备 Helixyte Green All 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注意：建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。
注意：10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。

操作步骤

表 1. 96 孔黑色微孔板中核酸标准品和测试样品的布局。 NS= 核酸标准品（NS1 – NS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白； TS=测试样品

表2.各孔试剂组成

1.根据表 1 和 2 中提供的布局准备核酸标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 µL 试剂，而不是 100 µL。
2.将 100 µL Helixyte Green All 工作溶液加入核酸标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板，将 25 µL Helixyte Green All 工作溶液添加到每个孔中，以获得 50 µL/孔的总体积。
3.在室温下孵育反应 5 到 10 分钟，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm ）处的荧光酶标仪检测荧光增加。

图示

图 1. 使用 Amlite 荧光总核酸定量试剂盒在 96 孔黑色板中测量总核酸剂量反应。